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1、分光光度法测定复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量分光光度法测定复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量容蓉1* 陈明强1 杨勇2 张发科1 李洪晓1（1 山东中医药大学天然药物省重点实验室；2 山东中医药大学分子与细胞生物学实验室，山东济南 250014）复方天麻颗粒用于治疗传出神经功能紊乱引起的头晕目眩、精神疲惫、神经衰弱等疾病。甘油磷酸钠为处方中加入的补磷药。磷参与骨质的形成，以磷脂形式参与细胞膜的组成，同时磷与许多代谢中的酶活性有关，在能量代谢中的作用至关重要；用于辅助治疗传出神经功能紊乱引起的头晕目眩、精神疲惫、神经衰弱等疾病。因此测定甘油磷酸钠在该方中的含量，并制定其质量标准，是控制该复方质量的关
2、键之一。原制剂标准没有其含量测定项；参照中华人民共和国药典2005年版二部及相关参考文献1,2，建立分光光度法控制甘油磷酸钠的含量。1 实验部分1.1 仪器与试药HITACHI 2800紫外可见分光光度仪(日本日立公司)；SX2-1-10箱式电阻炉（山东省龙口市电炉总厂）；Mettler AE 240电子天平（瑞士梅特勒公司）。甘油磷酸钠(C3H7Na2O6P5H2O，Fluka公司，批号50020)；磷酸二氢钾（中国药品生物制品检定所，批号100745-200401）；水为去离子水；其余试剂均为分析纯。1.2 试验方法1.2.1 溶液的制备供试品溶液的制备 取批号为050422的复方天麻颗粒
3、，研细，取约2 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，静置。精密量取上清液5 ml，置50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品N溶液。另精密量取上清液6 ml置盛有1g氧化锌粉末的坩锅中,混匀,置水浴上蒸干(蒸干前轻轻晃动坩埚，使其混合均匀)后,置电炉上炭化，在600炽灼1 h，冷却至室温，加水5 ml，加盐酸5 ml，加热煮沸溶解，转移至100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品M溶液。阴性对照溶液的制备 按处方比例并参照本品制备工艺，配制不含甘油磷酸钠的阴性样品，同法处理，制备成阴性对照N溶液和M溶液。对照品溶液的制备 取在105干燥2 h的磷酸
4、二氢钾136.09 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为磷酸二氢钾储备溶液；精密量取10 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为磷酸二氢钾工作对照品溶液。另精密称定350.40 mg-甘油磷酸钠(C3H7Na2O6P5H2O)置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为-甘油磷酸钠对照品溶液。1.2.2 测定方法分别精密量取磷酸二氢钾工作对照品溶液及供试品M、N溶液各5 ml置25 ml量瓶中,加钼酸铵称取钼酸铵5 g，加5%（g/ml）硫酸溶液溶解，并稀释至100 ml1 ml与0.5%对苯二酚称取对苯二酚0.5 g，加0.25%（g/ml）硫酸
5、溶液溶解，并稀释至100 ml；临用新制1 ml。再加50%醋酸钠溶液3 ml，并用水稀释至刻度，摇匀。另取水5 ml置25 ml量瓶中，同法处理,所得的溶液为空白参比溶液。在400900 nm 扫描,对照品溶液与供试品溶液在716 nm处有最大吸收,故选择716 nm作为测定波长。照分光光度法1，在716 nm的波长处迅速测定显色后的对照品溶液、供试品M、N溶液及阴性对照M、N溶液的吸光度，计算磷含量。1.3 方法学试验1.3.1 线性关系考察精密量取磷酸二氢钾储备溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0，分别置50 ml量瓶中,加水稀释至刻度。按1.2.2项下方法
6、试验,以磷的浓度(C，g/ml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,进行线性回归，得到回归方程为：C = -0.002 + 0.113A，相关系数r = 0.9998。结果表明，磷在0.68.7 g/ml范围内线性关系良好。1.3.2 精密度试验取磷酸二氢钾工作对照品溶液,按1.2.2项下的方法进行6次试验,测得吸光度的RSD = 0.3%。结果表明，试验精密度良好。1.3.3 稳定性试验取磷酸二氢钾工作对照品溶液,按1.2.2项下的方法进行试验,显色后于不同的时间点测定吸光度。试验表明，在室温条件下，吸光度(A)在30 min内基本稳定，放置45 min后吸光度的降低达3.0%，故显色后应迅速测
7、定溶液的吸光度。1.3.4 重复性试验复方天麻颗粒（批号050422）研细，取约2 g，按1.2.1项下方法制备供试品溶液，按照1.2.2项下方法测定甘油磷酸钠的含量，平行测定6份，测得甘油磷酸钠(C3H7Na2O6P)的量分别为23.8、25.2、23.6、24.7、25.2、24.4 mg/g，平均24.5 mg/g，RSD为2.8%，结果表明，该试验操作重复性好，符合要求。1.3.5 回收率试验取不含甘油磷酸钠的阴性样品约2 g,精密称定，分别加入6、5、4 ml的-甘油磷酸钠(C3H7Na2 O6P5H2O，相当于标示量的120%、100%和80%)，按1.2.1项下方法制备供试品溶液
8、，按照1.2.2项下方法测定甘油磷酸钠的含量，求得平均回收率为100.4%，RSD为2.5%，结果见表1。 EMBED Equation.3 结果表明，该试验方法测定甘油磷酸钠含量准确度合格。1.4甘油磷酸钠的含量测定结果 取复方天麻颗粒十批，按1.2.1项下方法制备供试品溶液，按照1.2.2项下方法测定甘油磷酸钠的含量，结果见表2。结果表明，本品中甘油磷酸钠（C3H7Na2O6P）含量以有机磷计，为22.825.0 mg/g。2 讨论采用灼烧法对样品中的甘油磷酸钠进行有机破坏,定量生成磷酸盐,磷酸盐与显色试剂作用生成深蓝色的溶液，在可见光区有良好的线性吸收，故可用可见分光光度法测定溶液中的磷
9、含量。以市售进口的-甘油磷酸钠为标准进行回收率试验，证明该方法准确、实用,可用于复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量测定。试验中N溶液代表试样中的无机磷，M溶液代表试样中的总磷，两者之差代表有机磷。对阴性样品的测定结果发现，阴性样品的M、N溶液均会发生显色反应，说明阴性样品中含有一定量的磷；但在扣除N溶液中的磷（无机磷）后，有机磷含量近似为零；说明阴性样品中主要含无机磷。因此在扣除总磷中的无机磷后，阴性样品对甘油磷酸钠的含量测定基本无干扰。样品中甘油磷酸钠的含量以有机磷计，可通过测定有机磷而间接测定甘油磷酸钠的含量。参考文献1 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典S. 二部. 北京: 化学工业出
10、版社,2005. P70，附录222 冯大仁, 何兴富, 左承学, 等. 分光光度法测定复方咖磷颗粒中甘油磷酸钠的含量. 华西药学杂志, 2005, 20(2): 161162 分光光度法测定复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量容蓉1 陈明强1 杨勇2 张发科1 李洪晓1（1 山东中医药大学天然药物省重点实验室；2 山东中医药大学分子与细胞生物学实验室，山东 济南 250014）摘要 目的：建立分光光度法测定复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量。 方法：灼烧法对样品中的甘油磷酸钠进行破坏,生成磷酸盐,磷酸盐与显色试剂作用生成深蓝色的溶液，以716nm为测定波长，测定其吸光度。 结果：可样品中有机磷的含量计
11、算甘油磷酸钠的含量。磷的浓度在0.68.7g/ml范围内线性关系良好(r =0.9998),平均回收率为100.4%，RSD =2.5%(n=9)。 结论：所用方法准确、实用,可用于复方天麻颗粒中甘油磷酸钠的含量测定。关键词 分光光度法; 复方天麻颗粒; 甘油磷酸钠Determination of sodium glycerophosphate in Compound Tianma Granule by SpectrophotometryRONG Rong1，CHEN Ming-qiang1，YANG Yong2，ZHANG Fa-ke1，LI Hong-xiao1(1.Shandong Un
12、iversity of Traditional Chinese Medicine，2, Laboratory of Molecular Cell Biology, Jinan Shandong 250014)ABSTRACT Objective: To establish a method of spectrophotometry to determine the content of sodium glycerophosphate in Compound Tian-ma granule. Methods: Sodium glycerophosphate was decomposed by i
13、gnition to produce phosphate which could react with the coloring reagent to form dark blue solution. The complex was detected at 716nm. Results: The content of sodium glycerophosphate was calculated according to the concentration of organic phosphorus in the solution. The calibration curve appeared
14、a good linearity relationship within the range of 0.68.7g/ml of phosphorus (r=0.9998) and the average recovery was 100.4% with RSD of 2.5% (n=9). Conclusion: The method is accurate, practical and can be used for determination of the content of sodium glycerophosphate in Compound Tian-ma granule. KEY
15、WORDS spectrophotometry；Compound Tian-ma granule；sodium glycerophosphate 表1 回收率试验结果(n=9)Tab 1 Results of recovery experiment(n=9)samplessodium glycerophosphate added（C3H7Na2O6P，mg）sodium glycerophosphate detected（C3H7Na2O6P，mg）recovery（%）average recovery （%）RSD(%)159.3660.83102.5100.42.5259.3658.7398.9359.3660.18101.4449.4750.74102.6549.4749.2699.6649.4751.00103.1739.5740.19101.5839.5738.4497.1939.5738.2596.6表2 复方天麻颗粒中甘油磷酸钠含量测定结果(n=3)Tab 2 Contents of sodium glycerophosphate in Compound Tian-ma granule (n=3)No. of batchescontents of s
