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1、普通植物病理学实习报告11植物保护（微生物工程）1班 # ￥一、 实习目的 通过两周的课程教学实习，巩固和加深对课堂所学知识的理解，将所学的理论知识用于分析实践问题，学会灵活运用课程知识解决生产实践问题，使对知识的掌握上一个台阶。通过实际操作和训练，掌握课程实践教学大纲所规定的 专业基本操作和实践技能，主要包括：病害标本采集方法、病害调查方法、病害田间诊断方法、不同病原类型（真菌、细菌、病毒、线虫、寄生性种子植物和非侵染性病害）的田间识别和症状观察、培养基制备、病原真菌和细菌的分离培养、线虫的分离和形态观察、病原真菌的玻片标本制作技术、病害鉴定技术、植物病害过塑标本和镜框标本制作法等。二、实习
2、内容与方法 (一) 植物病害标本的采集和制作及常见病害鉴定(二) 植物病原的分离与培养（三）植物病原真菌玻片标本制作（四）植物病害过塑标本的制作(五) 线虫的分离三、实验步骤标本采集1、外出实习地点(1)华农大农场 (2)华农大增城宁西基地 (3)广州白云区蔬菜地2、采集方式与标本采集要求(1)直接从病害植株以手、刀、剪刀提取病样。(2)症状应具有典型性。标本应有典型的病状和病症，最好有不同阶段和不同部位的症状。这样才能使标本起到帮助人们正确识别病害的作用。(3)真菌病害标本应采集有子实体的。对于真菌病害来说，鉴定病原物是正确诊断病害的重要条件之一，因此要求真菌病害标本必须有病菌的子实体。(4
3、)每种标本上的病害种类应力求单纯。如果一份标本上同时有几种病害，就会混淆视线，影响鉴定，这样就没有适用价值。(5)采集时应进行必要的记载，以辅助标本不足。记载的内容应包括：寄主名称、发病情况、环境条件、以及采集日期、地点、采集人姓名等。(6)寄主的鉴定也很重要，有些病害如锈病，不知道寄主是无法鉴定的。对于不认识的寄主植物。应将寄主鉴定所必需的部分，如枝、叶、花及果实等部分都采集齐全。(7)适于干制的标本，应随采随压于标本夹中，尤其容易干燥卷缩的标本如水稻、小麦的叶片，最好立即夹在厚书本中，否则叶片失水卷缩后无法展平。(8)柔软多汁或腐烂的标本，应用纸袋或标本纸包好，然后置于标本箱中，以免污染和
4、挤坏标本，妨碍鉴定。(10)黑白粉病、锈病、霜霉类标本等由于病菌孢子极易散落，所以采集时应用纸袋或标本纸包好后，再置于采集夹中或采集箱中，以免混杂妨碍鉴定。(11)每种标本采集的数量不宜过少，以便在制作和应用中留有余地。标本制作（1）把适于压制的病样如植物的茎、叶以及去掉果肉的果皮等，整形后分层压在标本夹中，放一层标本纸（每层3-4张）放一层标本，并写上标签（标签内容为病害名称、采集地点、采集人姓名、采集日期）每个标本夹的总厚度以三寸左右厚为宜，用绳子将标本夹压紧。（2）每隔一至两天就打开标本夹检查标本纸的干湿程度，及时更换较湿的标本纸。在第一次换纸时，同时将标本整形，使其达到既美观又便于观察
5、的要求。植物病原的分离与培养实验前准备(一)清洁环境：分离工作严格说应在无菌条下进行，无菌室或无菌箱是分离不可缺少的设施。若限于条件实验只能在普通房间进行时，必须对房间进行彻底扫除，清洁环境、搞好卫生。地上多洒些水，以消除室内尘埃，分离开始前准备好一切用品，避免工作过程中频繁走动，以破坏环境带来杂菌，工作台上铺好湿毛巾，点燃酒精灯。(二)实验材料及用品准备 1病组织材料玉米小斑病病叶水稻纹枯病病叶水稻白叶枯病病叶 2用品准备0.1%升汞溶液(广口瓶盛装)；95%酒精(广口瓶盛装)；1000ppm链霉素；瓶装牛肉膏蛋白胨培养基；瓶装马铃薯琼脂培养基； 此外，还有以下备品，无菌水1瓶，灭菌培养皿6
6、付，灭菌1毫升吸管2支，解剖剪、 解剖刀和镊子各1把，移植环，移植钩、酒精灯、珐琅盘和试管架各1个，毛巾1条，玻璃铅笔1支及火柴等。实验步骤 （一） 玉米小斑病与水稻纹枯病原分离（组织分离法）1、取样。取患玉米小斑病、水稻纹枯病的病样，分别切取材料2-3mm长的病健交界处。2、表面消毒。将病组织用清水洗净，接着放到75%酒精里浸泡30s，然后放到0.1%升汞里浸泡0.51min，最后用无菌水洗3次。 3、培养。把材料放到PDA培养基上并在25培养箱里培养23天，观察结果。（二）水稻白叶枯病原分离（稀释分离法） 1消毒：将剪下的植物组织用清水洗干净，然后用75%的酒精浸泡30秒，在用0.1%的升
7、汞洗0.51分钟，最后用无菌水洗涤3次。2捣碎：取用一个灭菌小皿，向内滴加12滴无菌水，然后灭菌剪刀剪碎已洗涤好的组织，放入水中静置5-10分钟，制备成菌悬液。 3划线：用接种环取一环菌悬液进行平板划线。4培养：将平板倒置，写标签，至于28-30摄氏度培养，2天后，观察分离结果。植物病原真菌玻片标本制作1.内容、材料和方法实验材料：苦瓜霜霉病病叶、竹子黑痣病病叶实验器材：解剖针、剪刀、载玻片、盖玻片、无菌水、立体显微镜2.实验步骤（一）苦瓜霜霉病病原装片制作1取苦瓜霜霉病病叶，用剃刀或解剖针 轻轻刮取苦瓜霜霉病病叶上的白色粉状物。2在载玻片上点一滴绵蓝乳酚油，将针尖或刀片浸于绵蓝乳酚油中，使锈
8、粉进入漂散于绵蓝乳酚油滴中。重复以上操作，待获得足够锈粉后，盖上盖玻片。贴上标签。3显微镜下观察。（二）竹子黑痣病病原装片制作。 1 取竹子黑痣病病叶，选取带黑色突起较多的部位，用刀片切取0.5*1 cm规格的薄片。2.在立体显微镜下，徒手切片。2 切得所需薄片后，置于绵蓝乳酚油的载玻片上，盖上盖玻片。用钝物轻轻压平，置于显微镜下观察。并贴上标签。植物病害过塑标本的制作材料：熨斗，过塑机等实验步骤1.选取特征明显，典型的植物病害样本用熨斗烫平。2.制作植物病害标签（包括病害名、拉丁名、采集地、采集小组和采集时间）。3.一个样本对应一个标签放在一起，过塑。线虫病害标本的采集、分离与鉴定1.内容、
9、材料和方法塑料袋，铁铲，贝曼漏斗，解剖镜，显微镜，培养皿，酒精灯，解剖针等2.实验步骤1，采样 线虫多在植物生长高峰期，多数为夏末秋初。丰富于根系土壤。以植株为中心，用小铲取植物根部周围的土壤（深度为10cm）。装于塑料袋中。2，分离 （贝曼漏斗法 ）分离时在漏斗内放大小适中的金属网，筛上铺纸巾，漏斗下面接橡皮管，橡皮管下接离心管，加样本于网的纸巾上，加完样后紧贴漏斗边缘往漏斗里加水没过土样，但不没过纸巾边缘。3，鉴定 经过一天左右，取下离心管，再静置十分钟，吸去一半，把剩下的一半倒进培养皿，因为线虫多数沉淀了。把培养皿置于解剖镜下观察，把线虫吸到玻片用低倍镜观察。四、 实验成果展示1.部分已
10、鉴定的病害列表病害名致病生物属名致病生物属拉丁名茄子褐纹病拟茎点霉属Phomopsis茶叶轮斑病拟盘多毛孢属Pestaloiopsis水稻胡麻叶斑病平脐蠕孢属Bipolaris玉米瘤黑粉病黑粉菌Ustilago玉米小斑病平脐蠕孢属Bipolaris花生褐斑病尾孢属Cercospora花生锈病柄锈菌属Puccinia苦瓜霜霉病假霜霉属Pseudoperonospora竹子黑痣病黑痣菌属Phyllachora空心菜白锈病白锈属Albugo稻瘟病丝核菌属Rhizoctonia茄子青枯病劳尔氏菌属Ralstonia共计16种病害，14个属几种病害的展示：a.玉米瘤黑粉病黑粉菌（Ustilago）引起的
11、病害.玉米果穗膨大，内含黑粉状孢子. 镜检可见散生的冬孢子。b.花生褐斑病 由尾孢属（Cercospora）引起的病害. 花生叶斑为褐色且周围有黄晕。分生孢子针形、倒棒形、鞭形，多隔膜。 过塑标本展示五、个人收获与体会通过这次实习我有很多收获，感受颇深。1. 通过这次实习，让我学到了很多知识，学习到了一些常见植物病害的特征，记住了30个常见病害的拉丁文名字，以及怎样初步鉴别一种病害。通过实践，加深了对课本知识的理解及掌握，并能够将课本知识运用到实际生产生活。进一步提高了动手能力，提高了切片及玻片制作的技能。2. 虽然外出的时候天气比较热，但大家都坚持了下来，提高了吃苦耐劳的能力，同时增进了班级
12、内同学的交流沟通，增强了班级的凝聚力。在实验室里，大家分工合作每个人都主动去鉴定病害查阅资料，这种知识的共享让大家可以成长的更快，学到更多的知识。3. 在植物病原物培养的实验中，我的真菌培养的结果较好，而细菌的培养结果不是很好。在以后的工作学习中，细心是很重要的，细心才能把事情做好。4. 这次实习也让我们在紧张的学习生活之余有了又一种乐趣，实习是一件快乐的事，大家一起集体合作，一起动手，本来就是一件很快乐的事。同时实习时老师的耐心讲解，也让我们获益匪浅。六、问题及建议1. 实习时间有点紧，实习完两天就期末考试，让我们没有太多的时间复习；同时实习中，每天都很忙碌，进度有点赶。七、参考文献1.许志刚主编 普通植物病理学 高等教育出版社，20092.吕佩珂等撰摄 中国蔬菜病虫原色图谱，农业出版社，19923.中国农作物病虫图谱 农业出版社，1985
