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1、欧阳生创编2022.02.08大肠菌群及检验时间：2022.02.08创作人：欧阳生一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用 语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性 的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方 面并非完全全都，其定义为：需氧及兼性厌氧、在 37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群 细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和 阴沟肠杆菌等。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查争辩说明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、 人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对 外界环境的污
2、染是大肠菌群在自然界存在的主要缘由。粪便 中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他 型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该欧阳生创编2022.02.08菌群的检出状况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的凹凸，说明白粪便污染的程度，也反映了对人体安康危害性 的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有安康人粪便，也有 肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外， 同时也会有一些肠道致病菌存在如沙门氏菌、志贺氏菌等，因而食品中有粪便污染，则可以推想该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，埋伏着食物中毒和流行病的威逼，必需看作对人体安康具有潜在的危急性。大肠菌群是评价
3、食品卫生质量的重要指标之一，目前已 被国内外广泛应用于食品卫生工作中。二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在 37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都 是依据它的定义进展。目前国内承受的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在 检测程序上略有不同。欧阳生创编2022.02.08一国家标准：国家标准承受三步法，即：乳糖发酵试验、分别培育和证明试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀 释度接种三管乳糖胆盐发酵管。361培育 482h，观看是否产气。
4、分别培育：将产气发酵管培育物转种于伊红美蓝琼脂平 板上，361培育 18-24h，观看菌落形态。证明试验：挑取平板上的可疑菌落，进展革兰氏染色观 察。同时接种乳糖发酵管 361培育 242h，观看产气状况。报告：依据证明为大肠杆菌阳性的管数，查 MPN 表， 报告每 100mlg大肠菌群的 MPN 值。具体操作参见 GB4789.3-94 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定二原国家商检局制订的行业标准，等效承受美国 FDA 的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进展检测。本方 法承受两步法：推想试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度 接种三管 LST 肉汤。361培育 482h，观看是否
5、产气。欧阳生创编2022.02.08欧阳生创编2022.02.08证明试验：将产气管培育物接种煌绿乳糖胆盐BGLB肉汤管中，361培育 482h，观看是否产气。以 BGLB 产气为阳性。查 MPN 表，报告每 ml(g)样品中大肠菌群的MPN 值。具体操作参见 SN0169-92 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法三、说明： 1MPN 检索表：MPN 为最大可能数 (Most Probable Number)的简称。这种方法，对样品进展连续系列进展稀释，参加培育基 进展培育，从规定的反响呈阳性管数的消灭率，用概率论来 推算样品中菌数最近似的数
6、值。MPN 检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度， 则表内数字应相应降低或增加 10 倍。留意国家标准和行业标准中所附 MPN 表所用稀释度是不同的，而且结果报告单位也不一样。2. 初发酵和证明试验：无论是国家标准的三步法还是行业标准的两步法，都利欧阳生创编2022.02.08用了乳糖发酵管进展了两次发酵试验，培育基的配制略有不同，但都是为了证明培育物是否符合大肠菌群的定义，即“在37分解乳糖产酸产气”。初发酵阳性管，不能确定就是大肠菌群细菌，经过证明 试验后，有时可能成为阴性。有数据说明，食品中大肠菌群 检验步骤的符合率，初发酵与证明试验相差较大。因此，在 实际检测工作中，证明试验是必
7、需的。3. 产气量与倒管：在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极 微少的气泡有时比小米粒还小，有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。试验说明，大肠菌群 的产气量，多者可以使发酵倒管全部布满气体，少者可以产 生比小米粒还小的气泡。假设对产酸但未产气的乳糖发酵如 有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮， 即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。4. 选择菌落：国家标准中，需要对初发酵阳性培育物接种伊红美蓝平 板分别，对典型和可疑菌落进展观看和证明试验。由于大肠 菌群是一群细菌的总称，在平板大肠菌群菌落的色泽、形态等方面较大肠菌更为简单和多样，而且与大肠菌群的
8、检出率亲热相关。国家标准方法规定伊红美蓝平板为分别培育基， 在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时，检 出率最高；红色、粉红色菌落检出率较低。另外，挑取菌落数与大肠菌群的检出率有亲热关系，只 挑取一个菌落，由于机率问题，尤其当菌落不典型时，很难 避开假阴性的消灭。所以挑菌落肯定要挑取典型菌落，如无 典型菌落则应多挑几个，以免消灭假阴性。5. 抑菌剂：大肠菌群检验中常用的抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂的主要作用 是抑制其它杂菌，特别是革兰氏阳性菌的生长。国家标准中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，行业 标准中 LST 肉汤利用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB 肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠菌群 细菌的生长和选择，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生 一些抑制作用。有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即 可对抑菌作用产生影响，因此抑菌剂的添加应严格依据标准时间：2022.02.08创作人：欧阳生方法进展。
