乙肝五项检测

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1、乙肝五项检测（ELISA法）一、检测目的：乙型肝炎病毒标志物（HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb）检测。二、测定分别采用双抗体（抗原）夹心法和竞争法。HBsAg、HBsAb原理：采用单克隆抗-HBs（HbsAg）包被反应板，加入待测标本， 同时加入多克隆抗-HBs-HRP（HBsAg-HRP）,当标本中存在HBsAg（ HBsAb ）时，该 HBsAg（ HBsAb）与包被抗-HBsAg（ HBsAb）结合并与抗-HBsAg-HRP （HbsAb-HRP ）结合形成抗-HBsAg（ HBsAb ）-抗-HBsAg-HRP（ HBsAb-HRP） 复合物，加入TMB底物产生

2、显色反应，反之则无显色反应。HBeAg原理 采用抗-HBe包被反应板 加入待测标本 伺时加入抗一HBe-HRP， 如待测样本中抗HBeAg时，就与包被抗-HBe、抗一HBe-HRP结合形成复合物，加 入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。HBeAb原理：采用抗-HBe、HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入 HBe-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-HBe含量高，则抗一HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。HBcAb原理：采用基因工程重组HbcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入 HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样本中抗-H

3、Be含量高，则抗一HBe-HRP 与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则显色深。三、操作步骤：1、将试剂从冷藏室中取出，30 分钟后平衡至室温方可开启使用。2、用蒸馏水将PBST浓缩液20倍稀释，作为洗液。3、将微孔条固定于支架上，按序编号。4、按具体使用试剂盒说明书加样、孵育、洗板、显色。9、用酶标仪读数，取波长450nm,先用空白调零，然后读取各孔OD值。样品OD值/阴性对照平均OD 2.1,判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。五、注意事项：1、冷藏环境中取出的试剂盒应在室温平衡30分钟后方可使用。2、使用试剂前摇匀，

4、并弃去1-2滴后垂直滴加。3、结果判定必须在反应终止后10分钟内完成。4、不同批号的试剂不可混用。5、待测标本不可用 NaN 防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。6、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。六、生物安全防护：1、在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。2、如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3、操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）。4、HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100C10分钟、高压蒸汽灭菌121C15分钟或干热160C2小时均可灭活HBV。5-10g/L次氯酸钠30 分钟，1: 4

5、000福尔马林37C72小时，0.5%过氧乙酸15分钟均可破坏其传染性。七、临床意义：乙肝病毒血清标志物的临床意义（即常说的乙肝五项或称两对半）序号HBsAg表面抗原 抗-HBs HBsAb表面抗体HBeAg E抗原 抗-HBe HBeAb E抗体 抗-HBc HBcAg核心抗体 临床意义出现率9种常见模式1 过去和现在未感染过HBV。1-30%2 + 既往感染未能测出抗-HBs ; （2）恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出 现；无症状HBsAg携带着。5-10%3 - - - + + （1既往感染过HBV ;（2）急性HBV感染恢复期；（3）少数标本仍有传染性。HBV感染已过；抗HBs出

6、现前的窗口期2-10%4 - + - - - （1）注射过乙肝苗有免疫；既往感染；假阳性1-6%5 - + - + +急性HBV感后康复。0.5-5%6 + - - - +急性HBV感染；（2）慢性HBsAg携带者；（3）传染性弱。10-15%7 - + - - +既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。5-15%8 + - - + + （1）急性 HBV感染趋向恢复；（2）慢性HBsAg携带者；传染性弱。即俗称的“小三阳”。 5-10%9 + - + - +急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。即俗称的“大三阳”。 30-40%16种少见模式10 + 急性HBV感染早期，急性HB

7、V感染潜伏期；（2）慢性HBV携带者， 传染性弱。11 + - - + -慢性HBsAg携带者易转阴；急性HBV感染趋向恢复。12 + - + -急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。13 + - + + +急性HBV感染趋向恢复；（2）慢性携带者。14 + + - - - （1）亚临床型HBV感染早期；（2）不同亚型HBV二次感染。15 + + - - +亚临床型HBV感染早期；不同亚型HBV二次感染。16 + + - + - 亚临床型或非典型性感染。17 + + - + + 亚临床型或非典型性感染。18 + + + - +亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物，新的不同亚型

8、感染。19 - - + - 非典型性急性感染；见于抗-HBc出现之前的 感染早期，HBsAg 滴度低而呈阴性，或呈假阳性。20 - - + - + 非典型性急性感染。21 - - + + +急性HBV感染中期。22 - + - + - HBV感染后已恢复。23 - + + -非典型性或亚临床型HBV感染。24 - + + - +非典型性或亚临床型HBV感染。25 - - - + -急性HBV感染趋向恢复。7种罕见模式26 + + + + +一种亚型的H BsAg及异型的抗H Bs（常见）；血清从H BsAg 转化为抗HBs的过程（少见）。27 - + + + -28 - + + + +29 -

9、 - + + -30 + - + + -31 + + + - -32 + + + + -乙肝五项检测（胶体金法）一、检测目的乙型肝炎病毒标志物（HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb）检测。二、测定HBsAg、HBsAb、HBeAg均采用双抗体（原）夹心法原理。HBeAb、HBcAb采用竞争法原理。三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书使用前将试剂板和血清血浆标本 恢复至室温(2030%)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复 至室温)，在丨小时内应尽快地使用。1. 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血

10、清血浆标本，逐滴垂直加入 于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。2. 加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在 15 分钟时读取测试结果。在 20分钟后读取的结果无效由于前三个项目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用双抗体(原)夹心法原理，后两个项 日HBeAb、HbcAb使用竞争法原理。因此前一：个项日与后两个项目判读方法是不 同的请注意区别。l .HBsAg、HBsAb、HbeAg(1) 阳性(+):两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性 结果表明：标本中含有待测物质。(2) 阴性(一)：质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴

11、性结 果表明：标本中检测不出待测物质。(3) 无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍 然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。(4) 注意：在进行HBsAg、HBsAb、HbeAg测试时，测试区(T)内的红色条带可 显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有 非常弱的色带也应该判为阳性结果。2 HBeAb、HBcAb(1) 强阳性(+):仅质控区(c)出现一条红色条带在测试区(T)内无红色条带出现。 阳性结果表明：标本中含有待测物质。(2)

12、弱阳性(+):质控区(c)出现一条红色条带，在测试区(T)内有非常弱的红色条带 出现。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(3) 阴性(一):两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(c)。阴 性结果表明：标本中检测不出待测物质。(4) 无效：质控区(c)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质 损坏。在此情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品， 并与当地供应商联系。五、注意事项I请控制判读时间，测试结果应在测定开始后20分钟左右读取，30分钟后读判定 无效。2. 乳胶法乙肝五项检测试剂板(血清/血浆)只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的 存在，

13、不能确定血样中病毒的含量。3. 由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检 测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。六、生物安全防护1. 在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物危险品。2. 如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3. 操作前一定要做好自身防护（穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套）。4. HBV对低温、干燥、紫外线、70%乙醇均有耐受性。煮沸100C10分钟、高压 蒸汽灭菌121C15分钟或f热160C2小时均可灭活HBV5 10g /L次氯酸钠30 分钟，1: 4000福尔马林37C72小时，O 5%过氧乙酸15分钟均可破坏其

14、传染性。七、临床意义1. HBsAg阳性：血清HBsAg阳性，表示受检者处于HBV的感染状态。2. HBsAb阳性：多见于乙型肝炎处于恢复期，或既往曾感染过HBV,现在已恢复， 而且对HBV有一定的免疫力；同时，HBsAb阳性是对接种乙肝疫苗后产生效果，即 接种免疫成功的指标。3. HBeAg阳性：见于HBV感染的早期，表示血液中含有较多的病毒颗粒，提示肝 细胞有进行性损害和高度传染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于预 测肝炎病情，HBeAg持续阳性，易转为慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均为阳性 的孕妇，可以将乙型肝炎传播病毒给新生儿，其感染的阳性率为70%90%。4. H

15、BeAb阳性 滲见于HBeAg转阴的检验对象，意味着HBV部分被清除或抑制， 病毒复制减少，传染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌检验对象可检出 HBeAb ;在日BsAg和HBsAb阴性时，如能检出HBeAb和HhcAb，也能确诊为乙 型肝炎近期感染。5. HBcAbIgG阳性:高滴度表示正在感染低滴度则是既往感染过HBV的指标， 具有流行病学的意义。6. HBcAbIgM阳性：是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示 检验对象血液有较强传染性。同时，HBcAbIgM阳性还见于慢性活动性乙型肝炎。乙肝表面抗原检测（胶体金法）一、检测目的乙型肝炎病毒标志物HBsAg检测。二、测定HBsAg采用双抗体（原）夹心法原理。三、操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书使用前将试剂板和血清血浆标本 恢复至室温(2030%)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意：在扣开铝箔前应先恢复 至室温)，在 l 小时内应尽快地使用。1. 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清血浆标本，逐滴垂直加入 于试剂板的五个加样子L中(每孔2。3滴)。2