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1、HPLC 梯度洗脱法同时测定川芎中阿魏酸和藁本内酯的含量汪潜1，朱玉丰1，李鹏2 ，王一涛2（1太极集团有限公司，重庆 401147； 2. 澳门大学，澳门）【摘 要】 目的：建立 HPLC 梯度洗脱的方法同时测定川芎中阿魏酸和藁本内酯的含量，以评价川芎药材的质量。方法：采用ODS C18 （4.6X250 mm, 5p m）色谱柱，乙腈-水（1%醋酸）为 18流动相进行梯度洗脱，流速为1.0ml- min-1，检测波长为284nm。结果：在该条件下，阿魏酸和藁本 内酯分离良好，阿魏酸在0.1021.632g范围内线性良好（r=0.9999）,平均回收率为100.2%，RSD 为1.0%；藁本
2、内酯在0.44.0p g范围内线性良好（r=0.9999），平均回收率为98.4%，RSD为1.0%。 结论：该方法分离效果好，简便快捷。【关键词】 川芎； 阿魏酸； 藁本内酯； 梯度洗脱； HPLCDetermination of Ferulic Acid and Z-Ligustilide in LigusticumChuanxiong Hort by HPLCWang Qian1, Li Peng1, Kelvin Kan1， Li Shao-ping1, Wang Yi-tao1,2( 1 University of Macau， Macau； 2China Academy of Tr
3、aditional Chinese Medicine， Beijing 100700)【Abstract】 Objective: To establish a gradient elution method for simultaneous determination of ferulic acid and ligustilide in Ligusticum chuanxiong Hort , so as to evaluate the quality of the Rhizome Chuanxiong . Method: ODS C18 column(4.6X 250 mm， 5 m) wa
4、s used. The mobile phase for gradient18elution consist of acetonitrile and water (1%HAc), the flow rate was 1.0 ml. min-1, the wavelength for measurement was 284nm. Results: In this condition, ferulic acid and ligustilide can be successfully separated, the ferulic acid has a good linear relation at
5、the range of 0.1021.632 g(r=0.9999) , the average recovery was 100.2%, RSD was 1.0%, the ligustilide has a good linear relation at the range of 0.44.0 g (r=0.9999) , the average recovery was 98.4%, RSD was 1.0% . Conclusion: This HPLC method is a simple, rapid method for simultaneous determination o
6、f ferulic acid and ligustilide in the Ligusticum chuanxiong Hort.【Key words】 Ligusticum chuanxionHgort; ferulic acid; ligustilide; gradient elution; HPLC川茸为伞形科藁木属植物Ligusticum chuanxiong Hort.干燥的根茎。性温，味辛，具有活血行气， 祛风止痛的功能1；用于月经不调、经闭痛经、产后瘀滞腹痛、胸肋刺痛、跌扑肿痛、头痛、风湿痹 痛2，是一种常见的中草药。川芎含有多种化学成分3-4，有效成分可以分为水溶性和脂溶性两部
7、分， 分别以阿魏酸5和藁本内酯6为代表。因此，研究与检测制剂中阿魏酸及藁本内酯的含量，对于保证 疗效及提高产品质量有积极意义。阿魏酸和藁本内酯两种成分的极性相差较大，目前尚无同时测定两种成分的方法，于是在本实验 中，我们通过参考文献7，考虑采用梯度洗脱的方式，将乙腈和水按不同的比例，以及调节水相的 PH 值来选择梯度洗脱的条件，最终确定了乙腈-水（1% 醋酸）作为流动相进行二元洗脱的条件，以及建 立了用 HPLC 同时测定阿魏酸及藁本内酯这两种成分的定量分析方法。1 仪器与试药Angilent 1100 Series高效液相色谱仪，G1311A型四元泵，G1313A型自动进样器，G1315A型
8、二 极管阵列检测器， Angilent Chemstation 色谱工作站（美国 Agilent 公司）， ASE 200 溶剂加速提取仪（美 国Dionex公司），乙睛和醋酸为色谱纯（Sigma公司），水为Milli-Q水，阿魏酸对照品购自中国药品 生物制品检定所（批号：0773-9910）,藁本内酯对照品购自Chroma-Dex公司（批号：12180-5）。2 方法与结果色谱条件色谱柱：ODS C18 （4.6X250 mm, 5p m）,流动相：以乙睛水（1%醋酸）为流动相进行梯度洗脱，洗脱程序为：0.010.0min,乙月青-水（1%醋酸）比例为（5： 95）（30： 70）, 10.
9、030.0min, 乙月青-水（1%醋酸）比例为（30： 70）（70： 30）, 30.040.0min,乙青-水（1%醋酸）比例为（70： 30）： （5： 95）,检测波长：284nm,进样量：10p l,柱温：25C。样品溶液的制备将川茸饮片粉碎，过筛，取粒径范围在4060目的川茸粉末2.02g，进行ASE提取，提取溶剂为 甲醇，提取温度为120C，提取压力为1600 Psi，提取时间为10min,然后，将ASE甲醇的提取液， 约20 ml,置于25 ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45p m微孔滤膜过滤，即为样品溶 液供HPLC分析。对照品溶液的制备阿魏酸对照品溶液精密
10、称取阿魏酸对照品1.02mg，置5 ml容量瓶中，加乙青溶解并稀释至刻度， 摇匀，用0.45m m微孔滤膜过滤，即得阿魏酸对照品溶液。藁本内酯对照品溶液 精密量取藁本内酯对照品溶液(1 mg/ ml )0.2 ml,加入0.8 ml乙腈稀释后,摇匀， 用0.45m m微孔滤膜过滤，即得藁本内酯对照品溶液(0.2mg/ ml )。线性关系考察分别吸取两种对照品溶液：阿魏酸0.5，1.0，2.0，4.0, 8.0m l，藁本内酯2.0, 4.0, 8.0，12.0,16.0m l 注入液相色谱仪中，用上述梯度洗脱条件进行分析，记录色谱图，以对照品溶液浓度为横坐 标，峰面积为纵坐标作线性回归，结果发
11、现，阿魏酸在0.1021.632m g范围内线性良好，藁本内酯 在0.44.0m g范围内线性良好，结果见表1.表1. 对照品标准曲线标准品线性回归方程R2线性范围(M g)阿魏酸y = 3622.5x + 36.13310.1021.632藁本内酯y = 1631.1x + 33.89710.44.0精密度试验分别对阿魏酸对照品溶液和藁本内酯对照品溶液连续进样5次，每次进样量为10m l,测量峰面 积，计算均为 RSD = 0.1% 。重复性试验取同一批川芎饮片，用 ASE 进行提取，并用同样的方法对样品溶液进行处理，平行制备样品溶 液5份，测定其含量，计算RSD = 0.3%。稳定性试验取
12、同一份样品溶液，于室温下放置，分别在0, 1, 3, 6, 9小时重复进样3次，每次10m l，用 上述同一梯度洗脱的色谱条件测定，结果发现，样品溶液中的阿魏酸和藁本内酯的峰面积基本保持不 变，计算得 RSD = 0.4% 。回收率试验样品采用四川都江堰产川芎药材，精密称取样品粉末(4060 目) 2.01g，平行称取6份，并编 号： 1#， 2#， 3#， 4#， 5#， 6#，其中1#3#加入阿魏酸标准品， 4#6#加入藁本内酯标准品，以甲醇为提取溶剂进行ASE提取，提取液转入25 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度。按以上“色谱条件”进样分 析，进样量10p 1,并计算峰面积，结果如表2.表
13、2.阿魏酸及藁本内酯的加样回收率（n=3）化合物样品含量（p g）加入标准品量（p g）理论总量（p g）实际测得量（p g）回收率（%）阿魏酸0.45370.68561.13931.132599.4藁本内酯2.38521.23873.62393.6311100.2样品的测定精密称取2批川芎药材样品2.00g,按1.2项下操作，制备样品溶液。进样10p 1,每批重复进样3次，计算峰面积，计算样品中阿魏酸和藁本内酯的含量，结果如表3.表3. 样品中阿魏酸和藁本内酯的含量测定样品阿魏酸含量（p g）藁本内酯含量（p g）平均含量（p g）RSD(%)阿魏酸藁本内酯10.45332.37440.46
14、212.38030.45802.37761.120.45862.378220.44232.36980.43852.36210.44032.36581.080.44022.36543 讨论（1）川芎为活血化瘀的常用中药，但现行药典尚无定量的质量控制的方法。现代药理学研究证 明，川芎中的阿魏酸和藁本内酯均为川芎药材中主要有效成分：其中阿魏酸有明显的扩张冠脉血管， 增加冠脉流量，改善心肌缺血，抑制胶原和ADP诱导的血小板凝集的作用；藁本内酯则是川芎挥发 油中含量最高的成分，约占挥发油总量的5080%8-9，也是川芎用于治病的有效成分，具有解痉，止 咳平喘，调经止痛等多种药理活性。因此，以川芎中的这两
15、种活性成分作为川芎质量控制的指标，对 中药川芎进行检测和质量评价有其科学的理论依据和明显的现实意义。（2）川芎药材中阿魏酸和藁本内酯之间的极性差别很大，目前尚无同时检测该两种成分的报道， 现有方法只对阿魏酸和藁本内酯分别单独进行测定，方法烦琐，条件苛刻。本方法不仅可以同时测定 川芎中两种成分的含量，而且样品处理简单，分离度好，无干扰，简便快捷。（3）阿魏酸和藁本内酯这两种成分也是当归和川芎中最大量的共有成分，而且都有很重要的生 理活性，能否以该实验为基础，为建立当归和川芎的鉴别方法提供参考，还有必要做进一步的探讨。参考文献：1 中华人民共和国药典（一部）.北京:化学工业出版社，2010:302 中国医学科学院药物研究所.中草药现代研究（第二卷）,2005:333 北京制药工业研究所.川芎有效成分的研究.中华医学杂志，2007，（7）:4204 曹凤银，刘文心，温月笙等.川芎化学成分研究.中草药，1993，14（6）：15 郑虎占，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用（第一卷）.学苑出版社，2007：6496 侯宽昭.中国种子植
