《AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准准则操作规程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准准则操作规程（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、AB7500 荧光定量 PCR 仪使用、维护、校准标准操作规程颁发部门制订人：复核人：批准人：质保部制订日期：复核日期：批准日期：执行日期版本1.0编号SOP04006制作份数 份发送部门修订记录修订人修订缘由修订内容版本 修订日期1. 目的：确保荧光定量PCR 仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、标准化。2. 范围：适用于 AB7500 荧光定量PCR 仪的使用及维护。3. 定义：无4. 职责：荧光定量 PCR 仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行担当监视检查责任。5. 内容：5.1 室内温度把握在 1530，相对湿度 4575%。5.2 仪器操作5.2.1
2、依次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows 界面。5.2.2 接着翻开AB7500 仪器电源开关，预热 10 分钟。5.2.3 点击 7500Softwarev2.3 图标，翻开软件。5.2.4 按压仪器托盘上的按压位，待托盘弹出后，将所需检测的 8 联 PCR 反响管或者 96 孔PCR 反响板放入检测孔位，登记放置位置。检测 8 联PCR 反响管用*反响孔模块，检测 96 孔PCR 反响板用*反响孔模块。检测 8 联PCR 反响管需放入盖紧管盖的空 8 联PCR 反响管配平，检测 96 孔PCR 反响板无需配平5.2.5 再次按压托盘使其滑入仪器。5.2.6 建扩增参数模板
3、：例如建一个 UG-63-62 的模板，扩增参数是 95，10；95，10；63，455cycles；95，10；62，3540cycles，在62时收集荧光信号HEX、FAM 信号，20l 反响体系。5.2.6.1 在 Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamples 中，将 TargetName 下的Target1 改成FAM；点击AddNewTarget，将增的Target1 改成HEX，点击Reportee 下拉菜单，选择VIC。5.2.6.2 在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面
4、输入2020l 反响体系。选中第一个 HoldingStage，点击 DeleteSelected 删除；在 CyclingStage 中的 NumberofCycles 后输入 5，在 Step1 中输入时间 10 秒，在 Step2 中输入温度 63 度，输入时间 45 秒，将 63 度下面收集荧光图标点掉；点击 AddStage 下拉菜单项选择择Cycling，在 CyclingStage 中的 NumberofCycles 后输入 40，在 Step1 中输入时间 10 秒，在 Step2 中输入温度 62 度，输入时间 35 秒，在 62 度下面点击图标收集荧光。3 点击 Save
5、下拉菜单下的 SaveAsTamplate，文件名输入 UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates 文件夹内，关闭设置界面。5.2.7 已有扩增参数模板：在软件 Home 界面中点击Template，选择需要的模板，点击翻开。例如：UG-63-62，其扩增参数就是 95，10；95，10；63，455cycles；95，10；62，3540cycles，在 62时收集荧光信号HEX、 FAM 信号，ReactionVolumePerWell:20l20l 反响体系。5.2.8 在 Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples
6、中选择 8 联管摆放的位置，全部勾选Sample1；UGT1A1*6 勾选HEX，UGT1A1*28 勾选 FAM。5.2.9 在Run-AmplificationPlot 中点击STARTRUN，命名为当日日期+当日上机次数，例:2023 年 1 月 1 日第 1 次上机编号为，保存在默认文件夹中，开头运行。结果分析PCR 反响完毕后自动保存结果，对扩增曲线进展分析。也可依据分析后图像调整Baseline 的 Start 值、End 值以用户可依据实际状况自行调整，Start 值可以在 3 15、End 值可设在 520，Threshold 值Rn推举设定为500015000，点击 Anal
7、yze 进展分析，然后到Plate 窗口下记录每个反响的Ct 值。试验完毕后取出反响管切勿翻开管盖，挨次关闭 AB7500 软件、定量 PCR 仪电源，关闭电脑。5.3 仪器维护5.3.1 每周维护检查计算机磁盘空间。如需要，将试验文件归档或备份。?至少每周检查一次计算机磁盘空间。?假设硬盘的可用空间缺乏其总容量的 20%，应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。关闭把握 7500Instrument 的计算机，30 秒后再次开启计算机。用无绒布块不脱毛蘸取 75%酒精清洁 7500Instrument 的外表。注：切勿使用有机溶剂清洁 7500Instrument。使用 75%酒精浸泡反响
8、管托架晾干后放回仪器内。5.3.2 每月维护执行背景校准。可执行一次背景校准以检查是否存在污染物运行磁盘清理和磁盘碎片整理。?至少每月一次。?当Windows?操作系统显示消息提示执行碎片整理时。?切勿同时运行磁盘治理有用工具和 7500Real-TimePCRSoftware。5.3.3 每半年6 个月维护1 检查灯具状态。在 7500Software 中，选择 InstrumentLampStatus/Replacement 以确定卤素灯的状态。显示LampStatus/Replacement 对话框：?Condition表示以下其中一种状况：Good灯具工作良好，不需要更换。单击Clos
9、e。Failed必需更换灯具。单击Close，然后依据步骤更换卤素灯。ChangeSoon灯具使用超过 2023 小时；生产商建议将其更换。单击 Close，然后打算是否更换灯具。假设打算更换，请依据步骤更换卤素灯。?Usage(Hours)灯具已照明的总小时数。?LampCurrent灯具的输出电流，以安培为单位(A)。低电流意味着灯具可能将要失效。?DateLastReplaced上次更换灯具的日期。在执行一次运行之前或期间，7500Software 可能显示以下警告：消息描述WarningCannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampis
10、notinstalledproperlyornee在运行开头dstobereplaced.时，灯具电流低于可接受水平。在依据步骤更换卤素灯具之前，无法继 续 该 运行。WarningCannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalledproperlyornee dstobereplaced.7500Softw are 停顿了该次运行， 由于在运行中灯具电流下降到可承受 水 平 之下。在依据步骤更换卤素 灯 具 之前，无法连续该运行。在消息框中单击 OK， 检查仪器日志，然后更换灯具。Warning-Thelampusage
11、hasexceeded2023hr.Werecommendreplacingthelampsoontoens ureoptimalassayperformance.在运行开头时，灯具使用时间超过2023 小时。单击CancelRun，然后更换灯具，或者单 击ContinueR un。重运行 ROI、背景、光学和染料校准。执行目标区ROI校正。执行背景校准。执行光学校准。执行染料校准。执行 RNaseP 仪器验证试验。5.3.4 其它维护任务需要时执行 样本块污染去除。执行以下程序，去除 7500Instrument 样本块的荧光污染。荧光污染是导致背景运行失败的常见缘由，在此状况下，一个或多个
12、反响孔会持续表现出特别的高信号。留意！切勿移去设备上的盖板。7500Instrument 中没有用户可安全修理的组件。假设疑心存在问题，请联系生产商效劳代表。全程戴上一次性无粉手套操作。找到样本块中受污染的反响孔参阅“如何确定污染”。从 7500Real-TimePCRInstrument 中取出反响板和托盘支架。a.按压托盘门，将其翻开。b.取出反响板和托盘支架。c.关闭托盘门。以确定角度向托盘右侧施加压力。手动降低样本块：a.在7500Software中，选择InstrumentInstrumentMaintenanceManager。b. 在 InstrumentMaintenanceM
13、anager的 ROI选 项 卡 中 ， 单 击StartManualCalibration。c.在ROIInspector 对话框中，单击MoveBlock。d.当ROIInspector 对话框显示“BlockDown”时，单击 Done。关闭 7500Real-TimePCRInstrument，然后拔下其电源电缆。允许仪器冷却 15 分钟。翻开 7500Real-TimePCRInstrument的检查门。a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔内，然后推动以解开门栓。b.翻开仪器前门。抬起门栓，然后将受热的护盖门推到仪器的反面。使用少量的双蒸水，清洁样本块中被污染的反响孔：a.用移液
14、管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次，以冲洗反响孔。c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。7500Real-TimePCRInstrument 将受热的护盖门拉到仪器的正面。抬起门栓，然后将受热的护盖门紧固到穿插杆。翻开 7500Real-TimePCRInstrument的检查门。?插上电源插头并开启 7500Instrument。?通过执行背景校准运行确认已消退污染参阅 5.4.2“背景校准”。d.使用棉花拭子，擦试每个被污染的反响孔的内壁。e.使用无绒布料，吸出剩余的双蒸水。?假设污染照旧存在，重复步骤至，然后使用95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反响孔：a.用移液管吸取少量 95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用双蒸水冲洗反响孔。?重复步骤至?，以冲洗样本块的反响孔，并验证已去除掉污染物。?假设污染照旧存在，重复步骤至，然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反响孔：a. 用移液管吸取少量 10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反响孔
