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1、广东佛山地区地中海贫血基因突变类型分析邹林1 周少雄通讯作者：周少雄，主任技师，佛山市禅城区卫国路78号，佛山市第二人民医院检验科 528000，联系电话：0757-88032088，手机：13068622783，E-mail： 胡佩村2 黄杰3（1佛山市第二人民医院检验科 广东佛山 528000）（2佛山市第二人民医院呼吸科 广东佛山 528000）（3广东医学院检验学院五年制本科生 广东东莞 523808）【摘要】目的 了解佛山地区与地中海贫血患者的基因突变类型，为开展佛山地区与地中海贫血的遗传咨询，产前诊断和预防计划提供参考。方法 回顾性分析2011年1月至2012年12月佛山市第二人民
2、医院地中海贫血基因检测PCR阳性的351名患者的地贫基因突变类型。结果 351名地中海贫血患者中200名地中海贫血患者，其中东南亚型缺失（ - -SEA）154例，右侧缺失（-a3.7）20例，左侧缺失（-a4.2）8例，缺失型HbH病（- -SEA/-a3.7）11例，缺失型HbH病（- -SEA/-a4.2）7例。136名地中海贫血患者，其中CD41-42杂合子53例，ISV-II-654杂合子38例，CD28杂合子16例，CD17杂合子13例，CD29杂合子3例，CD43杂合子3例，E杂合子5例，CD41-42纯合子、CD17纯合子、CD71-72杂合子、CD41-42，ISV-II-6
3、54双重杂合子、Int杂合子各1例，15名复合型地中海贫血患者。结论 佛山地区的地贫人群中东南亚缺失型占主导地位，而CD41-42突变与ISV-II-654突变是地中海贫血最常见的基因突变类型。【关键词】地中海贫血；基因突变Analysis on Gene Mutation Types of Thalassemia in Foshan Area of Guangdong Zou Lin Zhou Shaoxiong Hu Peicun Huang Jie【Abstract】Objective To explore the gene mutation types of - thalassemia
4、 and - thalassemia in Foshan area of Guangdong. Methods Retrospective analysis the 351 cases of Thalassemia patient from Jan 2011 to Dec 2012 in The Second Peoples Hospital of Foshan which were detected postive in PCR method. Results Among the 351 ceses,200 cases were - thalassemia,including 154 cas
5、es of - -SEA, 20 cases of -a3.7, 8 cases of -a4.2,11 cases of - -SEA/-a3.7,7 cases of - -SEA/-a4.2。136 cases were- thalassemia,134 cases were heterozygote,including CD41-42 ISV-II-654、 CD28、CD17、 CD29、 CD43、E、CD71-72、 CD41-42 comlexISV-II-654,2 cases of homozygote.And 15 cases were-and -complex thal
6、assemia . Conclusion In Foshan,the commonest- thalassemia mutation is - -SEA , the commonest - thalassemia mutation is CD41-42 and ISV-II-65 .【Key words】Thalassemia; Gene mutation; 地中海贫血 (以下简称地贫)，是一种危害极大的单基因遗传性疾病。其临床最常见的类型有地贫与地贫两种。广东和广西人群中与地贫基因携带率合计分别高达11071和23982 。严重类型(包括重型和中间型) 与地贫均为致死性或致残性血液病，目前尚
7、无理想的治愈方法，给家庭和社会带来沉重负担。夫妇双方若同为轻型地贫（即地贫基因携带者），怀孕以后，对子代的遗传几率是： 1/4为正常胎儿，1/2为轻型地贫（同父母一样），而1/4为重型地贫患者。地中海贫血的遗传与性别无关，男胎女胎发病机率均等。 因此， 开展地贫筛查，指导高风险夫妇在怀孕后的特定时期进行产前诊断，通过淘汰性人工流产，是防止重型地贫儿出生，达到优生优育的重要措施。本文通过对佛山地区与地中海贫血患者的基因突变类型分析，明确了本地区的地贫基因分布情况，为本地区开展产前诊断和遗传咨询提供理论依据。1 对象与方法1.1 对象：2011年1月至2012年12月佛山市第二人民医院送往广州金域
8、检验医学中心进行地中海贫血基因检测PCR阳性的351名患者，均为本地户口，年龄主要为0-40岁。1.2 方法1.2.1 采血：使用基因诊断的真空采血管，如成人用柠檬酸钠或乙二胺四乙酸( EDTA)抗凝全血提取 DNA， 不可用肝素抗凝全血， 及时送检或置2 8 冰箱中并于5 d 内检测， 或在 20 存放1 个月以内检测。1.2.2 方法 分为检测缺失型-地贫和突变型-地贫基因型的方法。-地贫采用跨越断裂点的 PCR技术 ( 也称裂口 PCR， gap- PCR) ，检测东南亚型缺失（ - -SEA），右侧缺失（-a3.7），左侧缺失（-a4.2）。-地贫采用 PCR-膜反向点杂交技术( RD
9、B) 检测 17种基因位点突变， 分别是 CD41-42、IVS-II-654、-28、CD71-72、CD17、E、CD31、CD27 /28、IVS1-1、CD43、-32、-29、-30、CD14-15、CAP、Int、IVS1-5。所用标本均为广州金域检验医学中心检测完成。作者进行回顾性分析。2 结果回顾性分析地中海贫血基因检测PCR阳性的351名患者，其中200名地中海贫血患者，占56.9%，136名地中海贫血患者，占38.7%，15名复合型地中海贫血患者，占4.4%。（1）地贫患者的基因突变类型的分析：200名地中海贫血患者，- -SEA/aa 154例，-a3.7/aa 20例，
10、-a4.2/aa 8例，- -SEA/-a3.7 11例，- -SEA/-a4.2地中7例，其中东南亚型缺失（ - -SEA）所占比例最高，43.8%。详见表1。表1 地中海贫血患者的基因突变类型及所占比例基因类型例数（n）比例/%- -SEA/aa15443.8-a3.7/aa205.7-a4.2/aa82.3- -SEA/-a3.7113.1- -SEA/-a4.272.0合计20056.9（2）地贫患者的基因突变类型的分析：136名地中海贫血患者，其中134名均为杂合子，2名为纯合子。CD41-42杂合子53例，占15.1%，其次为ISV-II-654杂合子38例，占10.8%。以上2种
11、突变在地贫中常见。详见表2。（3）复合型地贫患者的基因突变类型的分析：15名复合型地中海贫血患者，共占4.4%。详见表3。表2 地中海贫血患者的基因突变类型及所占比例基因类型例数（n）比例/%CD41-42杂合子5315.1CD41-42纯合子10.3ISV-II-654杂合子3810.8CD28杂合子164.6CD17杂合子133.7CD17纯合子10.3CD29杂合子30.8CD71-72杂合子10.3CD43杂合子30.8CD41-42，ISV-II-654双重杂合子10.3Int杂合子10.3E杂合子51.4合计13638.7 表3 复合型地中海贫血患者的基因突变类型及所占比例基因类型
12、例数（n）比例/%- -SEA/CD41-42杂合子41.1- -SEA/CD28杂合子10.3- -SEA/CD17杂合子10.3- -SEA/ISV-II-654杂合子10.3-a3.7 /ISV-II-654杂合子20.6-a3.7 /CD41-42杂合子20.6-a3.7 /CD28杂合子10.3-a3.7 /CD41-42，CD28双重杂合子10.3-a3.7 / CD654,CD28双重杂合子10.3-a4.2/CD41-42杂合子10.3合计154.43讨论地中海贫血是我国南方最常见和危害最大,干预效果显著的一种出生缺陷病，被列为广东省出生缺陷重点干预病重之一3。-地贫是由于第1
13、6 号染色体短臂末端-珠蛋白基因缺陷所致，有缺失型和非缺失型两种，缺失型是我国主要类型，而东南亚缺失型（ - -SEA）、 右侧缺失(-a3.7) 和左侧缺失(-a4.2) 是中国人最常见的 -地贫缺失类型。-地贫根据受累的基因可以分为 4 种，累及一个基因的静止型( -/)，累及2个基因的轻型(-/或 -/-) ，累及3个基因的中间型( HbH 病，-/ -) 及4个基因都累及的重型- 地贫( Barts 水肿，-/-)。-地贫是由于第 11 号染色体短臂-珠蛋白基因缺陷所致，绝大多数是由于基因发生了点突变，少数是因为基因发生了缺失。目前对地贫的治疗尚无好的办法， 因此对本病重在预防。在本研
14、究中351名地中海贫血患者中， 200名地中海贫血患者，东南亚型缺失（ - -SEA）占154例，右侧缺失（-a3.7）20例，左侧缺失（-a4.2）8例，缺失型HbH病（- -SEA/-a3.7）占11例，缺失型HbH病（- -SEA/-a4.2）7例。这说明在佛山地区的地贫人群中东南亚缺失型占主导地位，与广东人常见地贫主要突变类型一致，同时也与同类研究结果相吻合4-5。因此在佛山地区地贫产前监控当中，东南亚缺失型基因应作为重点监控对象。地中海贫血患者共136名，共检测出9种突变，12种基因型，其中CD41-42突变54例，ISV-II-654突变 38例，CD28突变16例，CD17突变1
15、4例，CD29突变3例，CD43突变3例，E突变5例， CD71-72突变、CD41-42，ISV-II-654双重突变、Int突变各1例。由此可以看出CD41-42突变与ISV-II-654突变是佛山地区最常见的地中海贫血基因突变类型，与广东地区同类研究结果基本吻合6。因此在佛山地区开展地中海贫血突变基因的产前诊断，尤其注意CD41-42突变与ISV-II-654突变。另外有15名复合型地中海贫血患者，共有10个基因型，有文献显示当名与地中海贫血双重杂合子时，筛查多表现地中海贫血的特征7。因此对地贫患者要同时考虑合并地贫杂合子的可能，防止漏检。 本研究所获得的佛山地区地贫人群的基因突变类型分析资料，能够为本地区开展产前诊断和遗传咨询提供理论依，也能够为我市开展以产前诊断为手段的地贫预防计划提供参考。参考
