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1、能坯錢貧嘛喈抜肃舉统ZHEJIANG ECONOMIC & TRADE POLYTECHNIC毕业论文（设计）题 目竹叶中多糖的提取方法研究指导老师汪洪专业班级食品营养与检测112姓 名戴晓鹏学 号 201171002032014年 5月 28日摘要：本研究以竹叶为研究对象，通过单因素试验和正交试验观察了温度、时 间、固液比、提取次数对多糖提取率的影响，比较了水提、超声波提取和微波 提取三种提取方法对竹叶多糖得率的影响。结果表明，水提最佳浸提参数：温 度80C,时间90min,固液比1:25,浸提次数3次。超声波提取最佳浸提参数 为：温度70C,时间20min,固液比1:20,浸提次数3次。微
2、波提取最佳浸提 参数为：微波功率500W,固液比1:15,时间2min,浸提次数3次。最佳提取 工艺方法是超声波提取，条件是温度70C,时间20min,固液比1:20,浸提3 次。关键词：水提；超声波；微波；沉淀；提取次数目录弓I言.11材料与仪器211实验材料212实验试剂213实验仪器22实验方法321竹叶多糖提取工艺流程322样品中多糖含量的测定323浸提条件对多糖提取效果的影响4231单因素试验4232 浸提工艺正交试验4233不同浸提方法的比较研究524分析方法53结果与分析631单因素试验结果6311温度对多糖得率的影响6312时间对多糖得率的影响6313固液比对多糖得率的影响73
3、14提取次数对多糖得率的影响8315乙醇浓度对多糖得率的影响932正交试验10321水提工艺正交试验效果10322超声波提取工艺正交试验结果11323微波提取工艺正交试验效果1233竹叶多糖不同提取方法的比较效果13结论14参考文献14引言多糖又称多聚糖(polysaccharde),由单糖聚合而成，是聚合度大于10的极 多性复杂大分子，分子量一般为数万，数十万到数百万，也有报道甚至达上千 万,是生物体内普遍存在的一大类生物大分子 1。多糖按其来源不同，可分为真 菌多糖、植物多糖、动物多糖、藻类地衣多糖、细菌多糖等5大类。现代研究表 明多糖具有促进机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗
4、辐射、抗 衰老、抗炎、降低血脂以及改善动物生产性能等一系列作用，其中多糖的主要 功能是免疫调节，因此又叫免疫活性多糖2。20世纪90年代后，多糖及其复合 物的分离纯化、组分测定和结构分析有了长足进步，同时由于细胞生物学和分 子生物学的发展，研究发现了糖类化合物特别是糖复合物上的糖链参与了各种 生命现象的调节，如细胞识别、粘连与融合、信号传达、免疫与应答、细胞转 化和分化等都离不开糖链的参与3。由于糖复合物的种种功效，其研究也成为生 命科学研究领域的新热点,具有重要的开发潜力和广阔的开发前景。竹子是禾本科(Gram ineae )竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，有着 复杂的次生
5、代谢。因竹叶含有许多对人体具有重要作用的活性物质, 所以竹叶在 中国具有悠久的食用和药用历史, 本草求真、本草逢原等古代医学著作 均有大量记载。据记载, 竹叶性淡、微涩、寒, 味甘、苦, 具有清热利尿, 明目解 毒及止血的功能。主治烦热口渴, 小儿发热, 小儿疳积, 热病不眠, 口舌生疮, 目 赤肿痛, 疥癣, 疮毒, 咽喉炎, 外伤出血等症4。20 世纪 80 年代, 就有从竹叶中 提取食品防腐剂、杀菌剂和叶绿素等研究报道。近年来有学者在竹叶提取物中 又发现了其他对人体有益的活性物质, 包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、生物 碱、生物活性多糖、氨基酸肽类、蒽醌类、萜类内酯等 , 人们对竹叶提取
6、物中 黄酮类化合物的存在及其生物活性、生物活性多糖等有效成分比较关注, 了解竹 叶提取物的有效成分及其应用现状对合理利用与开发竹产业具有重要意义5。多 糖具有多种生物活性,某些多糖不但具有抗癌、抗病毒、抗衰老等作用,还是理想 的免疫增强剂。因此,关于多糖的研究具有十分重要的意义。但是竹叶中的多糖 的提取受很多因素的影响，本文就是根据温度、时间、固液比对多糖的提取率 影响做了一些研究。1材料与仪器1.1 实验材料样品为3-5片毛竹（采于台州天台），分别从毛竹冠的上、中、下部采集， 混合后洗净，低温烘干，粉碎后贮于磨口瓶中备用。1.2 实验试剂 95%乙醇（工业酒精），乙醚、丙酮、苯酚、浓硫酸等均
7、为分析纯试剂，购 于公司。水为蒸馏水。1.3 实验仪器磁力搅拌器（上海维菱科学仪器有限公司）；分光光度计（752N上海精密科学仪器有限公司）；分析天平（SPS202F梅特勒-托利多称重设备系统有限公司）；冷冻干燥仪（1-2LD德国ALPHA公司）； 超声波清洗器（KQ-500DA昆山市超声仪器有限公司）； 粉碎机（河北齐家务科仪厂）；旋转蒸发仪（RE-52AA上海亚荣生化仪器厂）；微波炉（W800格兰仕）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG 一 9246A上海精宏试验设备有限公司）； 高速离心机（DL-5型上海安亭科学仪器厂）；高效外循环浓缩设备（SJN,天津隆业设备厂）；2 实验方法2.1 竹叶多糖
8、提取工艺流程图 2.1 竹叶多糖提取工艺流程2.2 样品中多糖含量的测定 准确称取竹叶磨碎样 5.0 g 加 100 mL 蒸馏水提取，提取液减压浓缩到 10mL,加4倍于浓缩液体积的95%乙醇沉淀1224 h, 4000 r/min离心，取沉淀,定容到250 mL,取0.5mL用硫酸苯酚法测定多糖含量，按公式计算多糖得率。多糖得率(% )=C X V/W X100 %c根据吸光度值由回归方程计算的多糖浓度值v：多糖溶液体积w：竹叶样品千重.2.3 浸提条件对多糖提取效果的影响2.3.1 单因素试验 温度对多糖得率的影响准确称取竹叶磨碎样50g,加200mL蒸馏水，分别在40C、60C、80C
9、、 100C,提取20h,提取液浓缩至10mL,加4倍体积95%的乙醇沉淀1224 h, 4000r/min离心，取沉淀，沉淀定容到250mL,硫酸-苯酚法测定多糖含量。 浸提时间对多糖得率的影响准确称取竹叶磨碎样5.0 g，加200mL蒸馏水，按确定的温度，分别浸 提 15 min、30 min、60 min、90 min、120 min、150 min,其他操作如，硫酸 -苯酚法测定多糖含量。 固液比对多糖得率的影响准确称取竹叶磨碎样5.0 g,以确定的温度和时间，按固液比1:5、1:10、1:20、 1:30、1:40提取，其他操作如，硫酸-苯酚法测定多糖含量。 浸提次数对多糖得率的影响
10、准确称取竹叶磨碎样50g,按上述试验确定的温度、时间，分别浸提1次、 2次、3次、4次，每次固液比为1:30,其它操作如，硫酸-苯酚法测定多糖含 量。 乙醇浓度对多糖得率的影响准确称取竹叶磨碎样250g,按80C，固液比1： 30,浸提60 min,将浸提 液平均分成5份，提取液浓缩到1： 2(竹叶质量：浓缩液)，以终溶液中乙醇的不 同浓度沉淀12-24 h, 4000 r/min离心取沉淀，定容到250mL,硫酸苯酚法 测多糖含量，计算得率。2.3.2 浸提工艺正交试验按L9(34)正交表分别采用水提、超声波浸提、微波浸提，对竹叶多糖提取工 艺参数进行试验，用硫酸一苯酚法测定多糖含量。表2.
11、1水提L9(34)正交试验因素水平表温度时间固液比A/CB/min C 次数 D170301:151280601:202390901:253表22超声波提取L9(34)止父试验因素水平表温度E/C时间1F/min固液比C提取次 数D150101:151260201:202370301:253表2.3微波提取L9(34)止父试验因素水平表功率G/W时间1H/min固液比C提取次 数D120011:151230021:202350031:2532.3.3 不同浸提方法的比较研究准确称取一定量的竹叶样品，先分别预浸30 min再参照以上正交试验结 果，分别浸提，苯酚-硫酸法测定多糖含量，分析试验结果
12、。2.4 分析方法使用 MicrosofI Excel 2000 和 The SAS system for Windows 70(简体中文)， 对数据进行分析。3 结果与分析3.1 单因素试验结果3.1.1 温度对多糖得率的影响由图31可知，在40C至80C的温度范围内，随着提取温度的升高，多糖 得率增加，当温度为80C时，多糖得率达到最大值，之后有所下降，可能是过 高的提取温度，会造成糖苷键的断裂，使多糖分解，导致得率降低，结果表明，采用80C的提取温度效果较好。0.&0,50.10400.4 030.20.5550.5410.4560.365為度30图 31 浸提温度对多糖得率的影响3.1
13、.2 时间对多糖得率的影响由图3.2可知，随着浸提时间的延长，多糖得率增加，在60min时达到最大 值，之后开始下降，可能是在80C的提取温度下，过多延长提取时间会造成糖 苷键的断裂，使多糖分解，导致得率降低，因此，竹叶多糖的提取时间采用 60 min 为佳。.60.50.4-15EG9012015Q恳0-30.565G.5450.5440.5410.4980.45S时间/rm in图 3.2 浸提时间对多糖得率的影响3.1.3 固液比对多糖得率的影响由图3.3可知，在固液比 1：5至1：40的范围内，随着固液比的增大，溶 质的扩散动力增加，易于从材料中扩散到提取液中，多糖得率不断增加；当固 液比达到 1:30 时，多糖已基本溶出，内外浓度达到平衡，继续增加固液比，多 糖得率增加不明显，而且会增加杂质的浸出率，同时也会增加后续加工成本， 综合考虑各方面因素，1:30 的固液比提取竹叶多糖，效率较高，且成本较低。0.5遂0.4色0.31:51:10J：?01：3C1:4G固痕比0.62 0 6280.4450.514O.55H图 3.3 浸提固液比对多糖得率的影响此外，工业化生产中，固液比受容器容积、搅拌状况、提取液理化性质等限制
