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1、单位代码 10642 密 级 公 开 学 号 200906034012 学士学位论文（设计） （类型：论文）垫江牡丹主产区土壤重金属含量分析与评价 作 者：封 雪学 号：200906034012指导教师：蒋桂芳专 业：生物科学（师范）提交日期：2013 年 5 月 4 日 答辩日期：2013 年 5 月 16 日 学位授予单位：重庆文理学院 中 国 重 庆2013 年 5 月目 录摘要Abstract1 引言12 研究区自然状况13 材料与方法13.1 采样的区域及方法13.2 测定项目及方法23.3 评价标准与评价方法23.3.1 评价标准23.3.2 评价方法24 结果与分析34.1 土壤
2、重金属测定结果34.2 土壤重金属评价45 结论6参考文献：6致谢语82013届生物科学专业学士学位论文辣椒炭疽病拮抗放线菌F2的鉴定生物科学1班 封 雪 指导教师 蒋桂芳摘要：筛选拮抗活性菌株和寻找新的活性代谢产物， 可为辣椒炭疽病防治提供新的资源。此文主要研究永川地区的水果园和蔬菜地采集土壤6份并分离获得放线菌。以辣椒炭疽杆菌为目标菌， 采用抑菌带测定法， 筛选获得具有拮抗活性的放线菌菌株F2，通过对菌株F2形态观察、培养特征观察、 生理生化反应和16SrDNA鉴定， 结果表明该菌株为链霉菌属吸水类群 （Streptomyceshygroscopicus） 。关键词：辣椒炭疽病；拮抗放线菌
3、；形态鉴定；生理生化鉴定Analysis and Evaluation of Soil Environment Quality of Peony in Dianjiang County of ChongqingBiological sciences Class One Zhou XiaTutor Li HuiheAbstract: Objective To study the heavy metals in the chief soils of Peony in Dianjiang County of Chongqing and provide a basis for the GAP base
4、 establishment. Methods According to the agricultural sector standard（NY 50102001）of China，6 pollutants of soil were evaluated by means of single pollution index and synthetic pollution indices. Results The result of the research indicated that the single pollution index of all sorts of pollution in
5、 the soil was less than 1, shows that soil is not overweight pollutant .The 5.3 synthetic pollution indices of all sorts of pollution in the soil are greater than 0.7 and smaller than 1 , in the alert level, the rest of the 94.7 comprehensive pollution index are all smaller than 0.7 ,shows that soil
6、 quality is good, reaching the “clean” and “safe” levelsConclusion The soil environment quality meets the requirement of the organic drug culture environment.Key words: Dianjiang; Peony; soil environment quality;1 引言辣椒炭疽病是半知菌亚门炭疽菌属(Colletotrichum Cord)内几个种所引起的真菌病害15。辣椒炭疽病可为害辣椒叶片和果实3,在病叶上表现出水浸状褐色圆形斑
7、,病斑上轮生小黑点；病果上为水浸状褐色圆形斑 ,病斑逐渐凸起 ,形成灰褐色、 黑色或橙红色小粒点 ,对植株伤害很大，所以给生产造成重大损失。目前对防治炭疽病有的主要方法有依靠化学药剂防治和品种改良。近年来由于人们对环境问题的日益关注和对绿色食品的需求，生物防治成为一个很有发展前途的领域，相关试验表明对炭疽病的防治，生防具有良好的防效。本实验将已分离得到的对辣椒炭疽病具有拮抗作用的放线菌F2，通过对拮抗放线菌F2的形态鉴定和生理生化鉴定，确定菌株的种属，为进一步研究辣椒生物防治提供实验条件。2 材料与方法2.1 材料2.1.1 供试靶标菌拮抗放线菌F2：分离自永川区黄瓜山菜园；病原菌：辣椒炭疽病
8、菌 （Colletotrichum gloeosporioides）。2.1.2 培养基放线菌培养用培养基： 高氏一号琼脂培养基；鉴定用培养基：（1）高氏 I 号合成培养基（GAU）：可溶性淀粉 20 g，硝酸钾 1.0 g，氯化钠 0.5 g，磷酸氢二钾 0.5 g，硫酸镁 0.5 g，硫酸亚铁 0.01 g，琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH 至 7.27.4。配置时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至 1000 mL。121 灭菌 20 min。（2）克氏 I 号培养基：葡萄糖 20 g，KNO31.0 g，NaCl 0
9、.2 g，K2HPO41 g，MgCO30.3 g，CaCO30.5 g，FeSO40.1 g，琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000mL，调节 pH7.27.4。（3）蔗糖察氏培养基：蔗糖 30 g，NaNO33.0 g，K2HPO41.0 g，KCl 0.5g，MgSO47H2O 0.5 g，FeSO47H2O 0.01 g，琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH7.27.4。（4）燕麦片培养基：燕麦片 20 g（水煮 30 min，过滤取汁），琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH7.27.4。（5）葡萄糖天门冬素培养基：葡萄糖 10 g，天门冬素 0.5 g，K
10、2HPO40.5 g，琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH7.27.4。（6）马铃薯葡萄糖培养基（PDA）：去皮马铃薯 200 g（切片沸水煮30 min，过滤取汁），葡萄糖 20 g，琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH7.27.4。（7）明胶液化培养基：蛋白胨 5.0 g，葡萄糖 20 g，牛肉浸膏 3.0 g，酵母浸膏 1.0 g，明胶 120 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH7.27.4，115 灭菌 10 min。（8）牛奶凝固胨化培养基：牛奶（脱脂鲜牛奶）1000 mL，石蕊液（2.5%）40 mL，115 灭菌 10 min，间歇灭菌 3 次
11、。（9）淀粉水解琼脂：可溶性淀粉10 g，NaCl 0.5 g，KNO31.0 g，K2HPO40.3 g，MgSO47H2O 0.5 g，琼脂粉 10 g，蒸馏水 1000 mL，121 灭菌20 min。（10）纤维素水解培养基：MgSO47H2O 0.5 g，NaCl 0.5 g，KNO31.0 g，K2HPO40.5 g，蒸馏水 1000 mL，调节 pH7.27.4，滤纸条（0.85cm），115 灭菌 10 min。（11）H2S 产生培养基：蛋白胨 10 g，胱氨酸 0.1 g，Na2SO40.5 g，蒸馏水 1000 mL，分装试管后，121 灭菌 20 min。（12）碳源利
12、用培养基：（NH4）2SO4 2.64g，KH2PO4 0.5g，K2HPO4 0.5g， MgS047H2O 0.5g， CuSO45H2O 0.0064g， FeSO47H2O 0.0011g，MnC124H2O 0.0079g，ZnSO47H2O 0.00l5g，琼脂粉15.0g，蒸馏水1000mL（选用的碳源分别有1%碳源：L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-果糖、L-鼠李糖、 蔗糖、D-甘露醇、L-肌醇）2.2 菌株鉴定2.2.1 形态学观察将菌株F2划线接种于高氏一号培养基， 28C插片培养7天和14天， 显微镜下观察菌体的形态特征。2.2.2 培养特征的观察将菌株F2分别接种
13、在PDA、 高氏一号琼脂、察氏琼脂培养基、克氏一号培养基、葡萄糖-天门冬素琼脂培养基、燕麦粉琼脂培养基、 葡萄糖天冬素琼脂等培养基上， 28培养5天， 观察基内菌丝、气生菌丝的生长状况和孢子链的形态及孢子形状。2.2.3 生理生化特性测定测定菌株F2明胶液化、牛奶凝固与胨化、 淀粉水解、 纤维素的利用、 H2S的产生以及碳源利用等生理生化特性6。2.2.4 分子生物学鉴定进行了 16S rDNA 的序列分析， 其中基因组DNA采用碱裂解法14提取质粒DNA，PCR扩增采用16S rRNA通用引物 （16SL 5- AGAGTTTGAT CCTGG CTCAG-3 ； 16SR 5 -AAGGA
14、GGTGATCCAG CCGCA-3 ） ， 每50 L体系含37.5 LddH2O、10 倍 PCR-buffer5.0 L、2.5 mmol/L dNTP4.0 L、1 mol/L 引物各 1.0 L、 5U/L LA Taq DNA 聚合酶0.5 L和110 ng/L模板DNA1.0 L。PCR 反应条件为： 94 5min,预变性； 94 变性0s， 60退火45s， 72延伸2 min， 共30个循环， 最后72延伸10 min。取1%的琼脂糖电泳分析。扩增序列连入PMD-18T载体， 由上海英骏生物技术有限公司进行测序。测得的16S rDNA序列与GenBank数据库中序列进行BL
15、AST分析， 并利用BioEdit 和MEGA 3.1软件构建系统进化树。式中：P综为土壤中综合污染指数；Pmax 为单项污染指数最大值；Pave为单项污染指数平均值。综合污染指数法评价结果的分级标准见表2。表2土壤环境质量分级标准等级划分综合污染指数污染指数污染水平1P0.7安全清洁20.7P1.0警戒级尚清洁31.0P2.0轻污级超过背景值视轻污染42.0P3.0中污染作物受到中度污染53.0P重污染污染已相当严重4 结果与分析4.1 土壤重金属测定结果各个样点的土壤中的铜、镉、铬、铅、砷、汞单项指标元素均有不同程度的检出。根据其测定结果进行了分析。土壤监测分析结果见表3。表3 牡丹土壤的重金
