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1、液相色谱-质谱联用仪校准作业指导书1 范围本作业指导书合用于新安装、使用中和维修后的离子阱和四极杆（包含三重四级）两种种类LC-MS的校准，四极杆飞翔时间串连等其余种类台式LC-MS的校准可参照此作业指导书进行。2 引用文件以下文件所包含的条则，经过在本指导书中的引用而构成本指导书的条则。本指导书公布时，所示版本均为有效。全部标准、规范或规程都会被订正，使用本指导书的各方应商讨使用以下文件最新版本的可能性。JJF1001-1998通用计量术语及定义JJF1059-1999丈量不确立度评定与表示JJF1164-2006台式气相色谱-质谱联用仪校准规范3 概括液相色谱质谱联用仪是以液相色谱为进样分
2、别系统并经过必定的接口与质谱仪耦合到仪器的剖析仪器。样品经过色谱分别后经离子源离子化产生带有必定电荷、质量数的离子，采纳不一样的质量剖析器把电离子按质荷比（m/z）分开,获得依质量次序摆列的质谱图。经过对证谱图的剖析办理，进行定性、定量剖析。液相色谱质谱联用仪主要由液相色谱、离子源、质量剖析器、检测器、真空系统和计算机等几部分构成。4 计量特征LC-MS各项技术指标见表1表1LC-MS主要技术指标技术指标要求/质量范围不低于1000u质量正确性*0.6u分辨力（R）*1u正ESI10pg利血平，m/z609处S/N10：1（峰峰值）信噪比*负ESI20pg氯霉素，m/z321处S/N10：1（
3、峰峰值）正APCI20pg利血平，m/z609处S/N10：1（峰峰值）整机定量重复性*RSD10%注：1标*的为一定校准项目2 本技术指标仅供参照,不作为合格性判断依照5 校准/测试条件5.1实验室环境要求仪器室内不得有激烈的机械振动和电磁扰乱，不得寄存与实验没关的易燃、易爆和强腐化性气体或试剂。实验室温度：2030。相对湿度：70。5.2标准物质与试剂利血平-50%乙腈水溶液：100.0pg/L；利血平-50%乙腈水溶液：10.0pg/L；氯霉素-50%乙腈水溶液：200.0pg/L；氯霉素-50%乙腈水溶液：20.0pg/L；碘化铯钠-异丙醇水溶液：2g/L碘化钠，50ng/L碘化铯溶于
4、50%异丙醇水溶液；5.3标准设施微量注射器：10L6校准/测试项目与校准/测试方法6.1外观检查仪器应拥有以下表记：名称、型号、制造厂名(或企业名)、出厂编号，并附使用说明书。仪器主机、色谱仪、计算机、真空零件和检测器等完满(切合出厂说明书要求)，各部件连结正确，各插件密切配合，接触优秀，仪器启动后无异样噪声。仪器的按键开关、各调理旋纽均能正常工作，无松动现象，指示灯显示正常。仪器运转中使用的高电压、大电流和高温等应在仪器的明显部位贴有警告标记，提示操作者注意这些潜伏危险。仪器应注明使用电压和频次等。6.2分辨力仪器稳固后，选择ESI正离子模式，采纳手动调谐，将碘化铯钠溶液直接注入质谱中，参
5、照附录D均匀选择5个扫描质量，优化仪器至最正确状态，记录各目标离子峰获得半峰宽W1/2。6.3质量范围参照6.2条件将碘化铯钠溶液经过进样泵直接注入质谱中，选择Scan模式，设定扫描范围为（202000）m/z，察看能否出现质量数1000以上的质谱峰。6.4质量正确度参照6.2条件，将碘化铯钠溶液经过进样泵直接注入质谱中，记录133，323,473,623,922,1072等碘化铯钠主要离子的质量数，理论值见附录D，依据公式（1）计算质量正确度MMi丈量Mi理论(1)式中Mi丈量第i个离子三次丈量均匀值，u；Mi理论第i个离子理论值，u。6.5信噪比正ESI源仪器稳固后，将100pg/ul的利
6、血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子最正确响应后记录参数并保留调谐文件。609至调谐完成后依据调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等效色谱柱分别，注入10pg利血平溶液，选择SIM模式，提取m/z609特点离子，依据公式（2）计算信噪比。S/NHm/zH噪声(2)式中：Hm/z提取离子的峰高；H噪声基线噪声。负ESI源仪器稳固后，将200pg/ul的氯霉素溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子最正确响应后记录参数并保留调谐文件。321至调谐完成后依据调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等效色谱柱分别，注入20pg氯霉素溶液，选择SIM模
7、式，提取m/z321特点离子，依据公式（2）计算信噪比。正APCI源仪器稳固后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609至最正确响应后记录参数并保留调谐文件。调谐完成后依据调谐文件设定参数，以50：50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等效色谱柱分别，注入20pg利血平溶液，选择SIM模式，提取m/z609特点离子，依据公式（2）计算信噪比。6.6丈量重复性参照6.5.1条件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，选择SIM模式，提取m/z609特点离子，连续丈量6次，记录相应峰面积，依据公式（3）计算重复性RSD6x)2(xii11100%(3)61x式中：
8、RSD相对标准误差，%；xi第i次丈量峰面积；x 峰面积的算术均匀值。7 校准/测试结果办理与复校周期7.1按程序言件CX34-01证书/报告管理程序要求出具校准/测试报告。7.2检测部门对原始记录进行整理和归档。7.3依据校准结果，发校准证书或校准通知书。在校准结论中明确说明被校准仪器能否合格、存在问题及建议。7.4液相色谱-质谱联用仪的校准周期为2年，改换重要零件、维修或对仪器性能思疑时，应随时校准。附录A液相色谱-质谱联用仪信噪比扩展不确立度A.1概括丈量依照SSY0052-2010液相色谱-质谱联用仪作业指导书环境条件温度（1527），相对湿度小于75%RH。丈量标准液相色谱-质谱联用
9、仪标准物质。被测对象Agilent6100丈量过程SSY0052-2010液相色谱-质谱联用仪作业指导书评定结果的使用切合上述条件的丈量结果，一般可直接使用本不确立度的评定结果。A.2数学模型数学模型：S/NHm/z(1)H噪声式中：Hm/z：提取离子(m/z)的峰高H噪声：噪声峰高度A.3不确立度重量的计算信号峰高值丈量不确立度u(Hz/m)：仪器丈量峰高时，它与标准物质的浓度、进样量和峰高丈量值的不确立度相关，所以信号峰高值丈量不确立度应包含三个方面：信号峰高测量值的相对不确立度进u(H1)，标准物质的不确立度u(H2)、微量进样器的不确立度u(H3)和仪器重复丈量的不确立度。信号峰高丈量
10、值的相对不确立度进u(H1):信号峰高丈量值的丈量有两种方法：一是依据工作站中记录的选择离子流图，读取峰高值和基线值，以两点差的绝对值作为峰高的测量值，这类峰高的丈量方法的相对不确立度优于0.2%；二是用工作站记录相应的选择离子流图，再用游标卡尺量取谱图的峰高的高度。谱图的高度一般为100mm,峰高为7090nm，其相对不确立度的重量预计为u(H)0.5%。标准物质的相对不确立度u(H2)：标准物质的相对不确立度是检定质谱计的不确立度的主要根源之一，它直接影响检定结果，标准物质的相对不确立度往常由标准物质证书给出，标准物质证书给出其定值的误差为10mg2%，认为其为矩形散布，所以u(H2)2%/31.2%。微量进样器校准的相对不确立度u(H3)：微量注射器的体积刻度是重要的不确立度根源之一，所以，微量注射器一定经校准后才能使用。规程中规定校准一般称量6次，相对标准误差1%。(进行检定结果计算时，应该采纳校准值)uW2)1/60.4%。(重复丈量相对不确立度u(H4):此刻以一台6310的液相色谱-质谱联用仪为例做重复性丈量：在同样的条件重复进样10次，按仪器自己计算信噪比的软件进行计算，所得的表1中的数据：表1：型号为6310的液相色谱-质谱联用仪10次连续丈量的数据序号12345678910信噪185132185225228219196174231212比
