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1、北京泰普舜康医学检验所标本前处理 编号：BJTIB-QCL-PF规章制度 第一版第24页 共30页 第0次修改 临床病毒学检测标本采集、保存、运输制度临床检测标本包括：体液、血液、分泌物、排泄物及组织等。能否发现一未知病原，在很大程度上取决于是否能正确、及时收集标本。标本采集、运输和保存的各环节都至关重要，对于检测结果的准确性及有效性影响极大。在常规检测中这些样本可能产生病毒颗粒气溶胶而造成交叉感染，为了防止检验人员的交叉感染，医学实验室安全管理及标本的采集、运送、检测和处理的安全性是十分重要的环节。一、标本的容器运输容器、消毒标本容器、运输媒体、特殊测试的采集和运输的整套工具要严格要求。只有
2、用合适的容器采集和运输的标本才能用于测试。标本容器必须认真加固以防泄漏。超过保质期的容器也不能用于采集和运输。必须在洁净的环境中培养。放在适当倾斜的琼脂或运输媒体上。用旋紧的试管，不要侧旋。病毒分离接种标本必须冷藏。不能使用琼脂培养基和混合培养。把倾斜管或病毒放在能密封的塑料袋中。按要求来放置和运输以上物品。根据原始容器的尺寸来选择传染性标本运输容器。二、贴标签未经合适标明的传染性疾病标本不能用于检测。标本必须写上病人的名字和一个惟一的识别号码。如果使用独立的分类标签，标签要贴紧以防在运输过程中遗失。在贴标签的过程中不能影响标本的染色。每个切片都要贴上标签（仅在放切片的容器上贴标签是不行的），
3、并且必须贴在接种标本切片的同一侧面。三、检测申请单传染病标本必须具有一个测试申请单或电子申请单。必须注明标本的来源。对于标本的处理来说患者的资料，采集的时间和地点，临床病史，症状和诊断，抗生素的疗程，和任何可能的微生物记录。如果一种微生物送去鉴定，可能含有的其他微生物也必须指出。四、运输运输的时候单纯追求速度是不对的。迅速处理使病原体的生活能力的损失降到最低，并保证菌丛有足够的数量用于精确鉴定。撰写人批准人生效日期邢姚黄志斌2013年1月28日五、检验报告一旦得到精确数据就可得到初步结果。最终结果一般在培养完成的时候得到。如果需要的话，只要一出现任何阳性，显著的染色或培养（如：血液，CSF，无
4、菌的体液）就可把初步结果告知医生或实验室。电话通知的请求必须写在检测申请单或写在电子申请单的注脚上。必须有患者或实验室的名字以及电话号码。结果或关于结果的说明可以在工作时间从实验室获得。有报告价值的疾病、潜在的可能的疾病注明在最终报告上，判断报告的可信度及正确性则是具体操作的实验室和主治医生的责任。六、临床标本采集的基本原则供分离病毒、检出核酸及抗原的标本，要求做到：1早特别是对用于病毒分离、抗原或核酸检测的标本。2快病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得标本应尽快送检。不能及时检测的标本应放放装有冰块或干冰的容器内送检。短时间可低温保存，冻存的标本忌反复冻融。3近用于病毒分离、抗原或核酸检测的
5、标本应尽量取自病变部位或接近病变部位（如脑炎取脑脊液，腹泻取粪便，呼吸道感染取鼻咽分泌物或支气管灌洗液，有病毒血症时采取血液）。4多标本的量不能太少，如有可能一次取多种标本，在病程急性期和恢复期都取标本。5净避免污染标本，特别是用于病毒分离或PCR检测的标本。七、传染病标本采集的具体方法采集合适的标本进行培养是探索传染病的致病微生物的关键步骤。一次失败的标本采集可能会导致致病微生物分离的失败，并会增加一系列对受污染的微生物的处理。标本采集的基本概念：1在合适的位置进行采集，避免受附近的组织或分泌物的污染。2在最佳时间采集，血液标本应采集急性期和恢复期双份血清测定抗体滴度。3采集的量要充分。4使
6、用合适的采集工具。消毒的、防漏的标本容器。使用合适的运输媒体（M4用于病毒和Chlamydia培养）。5只要有可能就要在使用抗生素和抗病毒药物之前采集标本。6恰当标记标本并填写检测申请单。写明标本来源。7尽量缩短运输时间。在采集标本到送到实验室这段时间内要维持一个合适的环境。8用7095的乙醇和12的碘酒清洁皮肤表面。消毒作用能维持的最大时间为2min。以下是标本采集的具体说明：撰写人批准人生效日期邢姚黄志斌2013年1月28日【血液】 （病毒或分子测试）1清洁皮肤表面用于血液培养。2在5ml的EDTA真空采血管（lavender top）中采集血液。只有在必须的时候才使用儿科型号的试管（大约
7、3ml）。不要用儿科试管采集成人和大于2岁的儿童的标本。3采集后把试管翻转几次。4采集后除去皮肤表面的碘酒。5此时进行血沉的准备。6直接运输全血标本。不要冷藏或试图从全血标本中提取血沉棕黄层。【体液】无菌（除尿液，脑脊液）。1皮肤表面处理。2使用消毒的针头和注射器采集液体。3取10ml用于分析。剩余标本在封口的注射器中运输。如果有氧菌和无氧菌并存，则使用无氧运输的瓶子，保证厌氧微生物的存活。10ml腹膜液可放在血液培养瓶中。腹膜液是惟一可以放在血液培养瓶中的体液。需病毒分离则把3ml或更少的体液放在病毒运输媒体或无菌瓶中。病毒标本在28下直接送检。【骨髓】1医生在采集的时候必须穿手术衣，戴面罩
8、，戴手套。2皮肤表面处理。3用无菌纱布皱起周围的皮肤。4用无菌针头和注射器经皮抽取骨髓。5在含有SPS的无菌管中放35ml标本。病毒培养和分子测试需要EDTA。6在一般环境下运输标本。【水疱，疱疹】1清洁皮肤表面用于血液培养。2用无菌的针头和注射器吸取液体和（或）脓液。3取样后，置于合适的病毒或细菌运输媒介中。4如果没有液体，则打开水疱或疱疹，用棉球擦伤口来采集细胞。撰写人批准人生效日期邢姚黄志斌2013年1月28日【脑脊液】1采集标本时医生必须穿手术衣，戴面罩、手套。因为要使用一个开口的试管，其他人必须戴面罩或远离，避免呼吸污染。2在皮肤上自中间向周围擦12碘酒，然后擦7090乙醇溶液。3在
9、穿刺的部位用无菌的纱布使皮肤皱起来。4插入针头。把标本注入3支无菌的防漏的试管中。按以下要求采集适当体积：细菌培养1ml。真菌培养810ml。分子测试1ml。分枝杆菌培养810ml。病毒培养2ml。5将试管严密封口。为了减少培养皮肤表面菌丛的可能，使用了第3支试管。将标本冷冻用于分子测试。病毒培养时，如果体积大于3ml则马上冷藏和运输。如果体积小于3ml，则用M4病毒运输媒介在28下运输。【宫颈】（宫颈内）细胞的培养。1患者按截石术的位置放好。2准备内镜的时候尽量用温水不用润滑剂。3插入内镜并显示宫颈口。4用棉球除去多余的黏液。5将一个达可纶棉球伸入宫颈口，轻轻地旋转，保持1030s。6拿出棉
10、球放在运输媒介中。7在室温下运输，病毒培养则在28下运输。【宫颈】（宫颈内）细胞的HPV检测。1使用一个ARUP公司产的Digene阴道取样管。这套工具包括一个阴道刷和一个用于HPV检测的试管。2孕妇不要使用阴道刷。3在获得DNA测试标本以前先采集Pap点状标本。在阴道镜用乙酸和碘酒处理以前先采集DNA标本。4用棉球或达可纶球除去宫颈口内外多余的黏液。丢弃棉球。5把阴道刷插入宫颈内口11.5cm直至阴道刷庞大部分的刚毛接触到宫颈外口。沿顺时针方向旋转3周。不要把阴道刷全部插入宫颈。6取出刷子。不要使刚毛接触试管外壁或其他物体。7把刷子插入试管底部。在画线处折断，把试管旋紧。8在28下运输。9宫
11、颈活检：新鲜的宫颈组织纵长大于5mm的话必须直接放在Digene标本运输媒介中并冷冻。10液基标本也可采集和运输。【阴道分泌物】阴道分泌物培养常常不能产生有意义的结果。在所有阴道分泌物可用核酸检测试验进行检测。可参阅宫颈取样。【子宫内膜】1使患者位于截石术的位置。2插入内镜显示宫颈口。3把一个窄内径的导管放在子宫口。4通过导管插入一个棉签采集子宫内膜标本。这种方法避免了接触子宫黏膜，减少了感染的可能。5把棉签放在运输媒介中，用于病毒培养则在28下运输。【皮肤】1用7095乙醇溶液清洁皮肤。2在活动伤口的边缘用解剖刀采集表皮碎屑。3把标本放在一个干的无菌容器中。4在室温下送检。撰写人批准人生效日
12、期邢姚黄志斌2013年1月28日【耳】1外耳的培养和处理轻微外伤的方法一样。2中耳液的采集和采集无菌体液一样。如果诊断为中耳疾病，则从硬化鼓膜处取中耳液。【眼】1用温和的消毒剂清洁眼周皮肤。2化脓性结膜炎：用棉签采集脓液；把棉签放在运输媒介中在室温下送检或在28下进行病毒培养。3角膜感染用上述方法擦拭结膜；采集多样的角膜碎屑直接放在病毒运输媒介中；室温下运输或在28下用于病毒培养。4眼内液体：用外科针头吸取液体；用于细菌培养在室温下运输，病毒培养在28下，分子测试则需冷冻。【鼻咽吸出物和（或）冲洗液】1对吸出液来说，将黏液trap系在抽吸泵和导管上，将包装材料留在抽吸管上。打开抽吸管调整到指示
13、的压力。2如果没有专用抽吸泵，将导管插入鼻腔中，向后上方延伸打开外耳道。注意：达到后咽所插入的深度等于从前鼻孔到外耳道的距离。3应用抽吸泵。旋转式移动，慢慢地退出导管。4病毒培养在28转运或分子实验要冷冻。5对于冲洗液来说，抽吸35ml消毒生理盐水放到一个新的生理盐水中。6将球形管插入一侧鼻孔知道鼻孔被阻塞。7挤压球形管向一侧鼻孔慢慢地灌输生理盐水，迅速松开球茎收集可回收的鼻腔标本。8将球形瓶中的液体倒空到一个合适的干燥消过毒的标本容器中，或加3ml或加更少瓶中液体到病毒转运载体中（M4）。9在28转运。撰写人批准人生效日期邢姚黄志斌2013年1月28日【鼻咽擦拭】1患者取合适坐位，将头向后扬起。2插入扩鼻器。3从扩鼻器中插入一
