植物显微技术

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1、一、名词解释1B-染色体：当细胞中多出一个或几个小形染色体时，应考虑是否是B染色体（或称超数染 色体）。2分带：用特殊的染色方法，使染色体产生明显的色带（暗带）和未染色的明带相间的带型, 形成不同的染色体个性，以此作为鉴别单个染色体和染色体组的一种手段。分带类型（方法） 包括Giemsa分带（包括C带、N带、G带等）和荧光分带（包括Q带、H带、D带、R带、 AMD+DAPI 带等）3随体：次缢痕末端通常相连一个圆形或椭圆形的突出体，称为随体。带型：借助细胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带，每条染色体都有固 定的分带模型，即带型。4核型：一般指体细胞染色体在光学显微镜下所有可测定

2、的表型特征的总称。5.NOR （核仁组成区）：即细胞中某一对或几对染色体上负责组织核仁的区域，它含有rDNA 基因，能合成Rrna。6联会复合体（SC）：是减数分裂偶线期两条同源染色体之间形成的一种结构，主要由侧生组 分、中间区和连接两者的SC纤维组成，它与染色体的配对、交换和分离密切相关。7单价体：减数分裂时因没有同源染色体而不能联会的单条染色体。&二价体：在减数分裂中联会结果是没对同源染色体形成一个二价体9多倍体：个体恒定的均含有多倍体细胞时，称为多倍体。10单倍体：体细胞染色体数等于本物种配子染色体数的个体。11混倍体：不同个体和不同细胞的染色体数目变异幅度较大，出现整倍和非整倍细胞的一

3、系 列变异，此为混倍体。12小染色体：是指其长度约在2微米以下而又不易分辨着丝点的染色体。13细胞周期：从上一次细胞分裂到下一次细胞分裂所经历的全部过程。14变性：早期认为，染色体经碱（NaOH,Ba（OH）2）或酸HCL处理，可以使DNA分子的双 拆开，叫做“变性”15复性：变性后的DNA在SSC盐溶液中温育，使单链的DNA分子重新形成H键，恢复原 来的双键结构，叫做“复性”16染色体常规压片：是指显示染色体的一般形态和结构的技术。17解离酶：是一个应用较广泛的方法，是去壁低渗法制片的主要方法也可以用于压片法。一 般用两种酶：一种是果胶酶，分解细胞之间的中层，使组织中的细胞分离；一种是纤维素

4、酶, 分解细胞壁，便于染色体自由散开。18植物染色体的实际长度（绝对长度）：指经低温或药物处理后的分裂中期染色体变异于130um.19模式核型：从多数细胞分析所得的平均核型，它具有代表一个物种或一个品种或一个居群 的植物的核型。球2n=2020核型分析：对核型的各种特征进行定量和定性的表达。21“染色体场”理论：将真核生物的染色体分为4级：第一级微小染色体V 1um，第二级： 小染色体14um，第三级：中等大小的染色体412um，第四级：大染色体12um二、简答、论述题1植物染色体常规制片常用技术？优缺点？异同点？步骤（流程）？植物染色体常规制片常用技术有压片法和去壁低渗火焰干燥技术流程压片法

5、：取材一预处理一固定一酸（或加酶）解离一染色和压片去壁低渗火焰干燥法：取材一预处理一前低渗一酶解离一后低渗制备细胞悬液一固定、滴片、火焰干燥一Giemsa染色。固定、涂片、火焰干燥一Giemsa染色。(2) 异同相同点：材料的基础条件是相同的不同点：使染色体分散所采用的方法不同，压片法是以人工外加机械压力而使染色体分散； 去壁低渗火焰干燥法是以酶解细胞壁，以低渗液使细胞膜吸胀和火焰干燥及水表面张力而使 染色体自行展开。(3) 压片法和去壁低渗火焰干燥法的优缺点前者操作快速简便，节省材料；后者操作稍繁且需酶制剂，且染色体易于展开而不易导致染 色体变形，尤其对一些含较多成熟细胞的组织，如芽、愈伤组

6、织等，其制片效果明显优于压 片法。2银染在细胞遗传中的应用。(1) NOR的数目、位置和变异。在核型的比较研究中，NOR的数目和位置的差异，是一个十 分重要的细胞学识别特征。Ag-NOR染色技术定位、定性准确，特异性和可重复性优于其他 散热方法。(2) NOR在种间杂种中的竞争。在种间杂种或异源多倍体中，会出现两种情况，一种是杂种 的NOR数目等于两个亲本NOR数目之和，更多情况是杂种的NOR数与两亲本NOR数之和 不符。(3) 核仁周期的研究。银染研究洋葱根尖细胞的核仁周期表明，在正常和低氧条件下核仁形成 时间上的差异，可能与能量的供应和代谢活动的改变有关。李懋学等对蚕豆根尖细胞的有丝 分裂

7、过程进行了银染色研究。这些研究都表明，核仁组织在分解前期解体后，分布或包埋在 染色体中，而不是分散至细胞质中，至末期开始在染色体上出现前核仁体并由NOR组织成新 核仁。(4) 联会复合体(SC)的研究。用银染法研究SC，只需要普通光学显微镜即可，简单方便。染色体轴心的研究。有关复核设购物染色体结构，“轴心模型”认为，染色体内部有一中 心轴。(6) 核基质网络结构。Ghosh等对洋葱根尖和鳞茎组织的细胞核和染色体进了银染色研究，证 明植物细胞核与动物细胞核一样，存在一种纤维状的非染色质的网络结构。(7) 染色体端部NOR。在一个真核生物细胞的染色体中，至少有一对染色体具有NOR，没有 NOE的细

8、胞是不能存活的。端部NOR是核型中一个多变的结构，现已证实它具有组织核仁、 合成rRNA等特殊功能，它的数目、位置以及大小等的变异，无疑会对遗传产生不同程度的 影响，这个问题还有待于进一步探索。3什么是核型？核型分析的意义？核型：一般指体细胞染色体在光学显微镜下所有可测定的表型特征的总称。 核型分析：对核型的各种特征进行定量和定性的表达。核型分析的意义(应用价值)：(1) 植物分类的依据 染色体数目和形态学证据的引入，大大促进了系统与进化植物学研究 的深入和发展，尤其是在科下等级的分类中发挥了重要作用。(2) 探讨物种的起源传统上对物种形成过程的研究主要是利用一些表现性状来进行，因此 所得的结

9、果往往并不一定能反应遗传上的差异。Ayala说的更明确，形态上的变化不一定也不 足以说明物种形成的出现，事实证明，染色体这一有组织的基因集团的变化是物种演化的遗 传物质基础，正像等位基因的变化是种内品种变化的遗传物质基础那样。核型分析是在染色 体水平上研究生物的遗传变异现象。(3) 了解植物遗传和形态变异染色体不仅是基因的载体，而且是直接参与进化过程的有组 织的基因集团，进化能够对影响核型的单位一染色体一进行选择。由于进化本身是非常复杂 的过程，决定于环境条件和生物本身。因此，通过具体核型分析才有可能使我们了解植物适 应环境的一些遗传变异。4核型分析四个不同层次。(1) 染色体数目。染色体数目

10、包括基数(x)、多倍体、非整倍体、B-染色体和性染色体等。染 色体数目变异的这种多样化，通常与其分类群相关，例如，在某些属甚至某些科，往往具有 同一的基数，而在种内或居群内染色体数目通常具有相对稳定性。由于染色体数目易于判断 和鉴别，用以说明问题时简明而且方便，所以，它在细胞遗传学研究中，是应用最广泛的核 型特征。(2) 染色体的形态。染色体形态主要包括染色体的绝对大小和相对大小；着丝点和次缢痕以 及随体的数目和位置等特征。有些近缘种，或整个属的二倍体(百合属，稻属)种，均含有同 一的染色体数目。因此，这些物种之间核型的差异不表现在染色体数目上，而是表现在染色 体形态上。染色体形态，是研究属下

11、或种下等级的物种或居群的亲缘关系和演化趋向的主要 核型特征。(3) 染色体的解剖学特征。染色体的“解剖学”特征是指一般光学显微镜下可观察到的染色 体内部结构特征，即主要指的是分带特征。(4) 分子特征。DNA的数量:每一细胞染色体组乃至每不同物种间DNA含量是有差异的。 DNA的质量。DNA中重复和非重复序列的比例不同植物，即使DNA数量同重复和非重复 的比例也是有差别的。5核型分析的表述格式？(1) 参数表1染色体序号：通常用阿拉伯数字。2染色体长度：绝对长度和相对长度，应详细列出长、短臂长度和染色体全长的数字。3.臂比值。4染色体类型或着丝点位置，应准确按照命名字母填写。 此外，相对长度和

12、臂比值一律取小数点后两位数，*表示包括随体长度(2) 模式照片一般每种材料最好能附一张质量较高的分裂中期染色体的完整照片。注意注明其放大倍数。 操作方法：将照相机测得的模式细胞中的一个平直的染色体，与照片上的同一个染色体核 实，然后实测照片上该染色体的长度，再用染色体实际长度：照片上该染色体长度 =5um： x。 所求的x值，即应在照片上绘出的标尺长度，并注明其长度相当于5um(3) 核型图：将与模式照片同一细胞的染色体逐个剪下，参照染色体长度和臂比值，进行同 源染色体“配对”，然后，按表格中的染色体序号顺序排列于模式照片的下方或右方，并在染 色体下方编上序号。(4) 核型模式图：用核型分析表

13、中所列个染色体的长度平均值绘制。(5) 染色体编号：按染色体总长度由长至短顺序排列。(6) 核型公式：2n=2x=10=6m=2sm=2st(SAT)。6植物组织器官切片中主要包括那些方法？(1) 徒手切片法。(2) 滑动切片法。(3) 蒸汽切片法。(4) 冷冻切片法。(5) 石蜡切片法。7染色剂及染色方法？(1)铁-乙酸洋红（2）卡宝品红这是目前在国外应用最为广泛的一种优良的核和染色体的染色剂。它具有乙酸洋红的染色简 便、快速的特点，又具有孚尔根反应的分色清晰的优点。配制方法：原液A （此液可以无限期地保存）原液B （此液不稳定，限2周内使用） 原液C染色液（3）孚尔根染色法8（显）分带机制

14、？C-带：由于结构异染色质变性迟而复性快，早复性的染色质便为Giemsa深染而显带G带：染色体中具有染色粒结构，这种结构在G带显带过程中银色染色质的某种重排而被夸 大，可能某些非带区的DNA被消化或者被提取，或由变性的非组蛋白所覆盖，或者两者同 时存在，然后通过Giemsa染料在可作用的DNA侧面堆积，从而显示带纹9石蜡制片的步骤（植物组织器官制片方法）：1选材（材料三性一代表性，典型性，特异性）;2固定和保存固定液的体积是材料总体积的20倍，含水量多的固定液浓度需要调整，材料多 含有气体易漂浮实验前要先抽出气体（常用FAA （甲醛-醋酸-酒精）固定液）；3冲洗和脱水 脱水剂-不同浓度酒精30

15、%开始至纯酒精（材料在70%的酒精可隔夜），30%的乙醇lh、50% 的乙醇lh、70%乙醇1.5h、85%乙醇lh、95乙醇2h、100%乙醇2h、100%乙醇2h； 4透明 常 用的透明剂是二甲苯。1/2的纯酒精+1/2的二甲苯2h、放入二甲苯中2h、再放入二甲苯中2h； 5浸蜡1/2的二甲苯和1/2的石蜡6h、56C的烤箱2h、纯石蜡2h； 6包埋用石蜡液把材料包 住；7修正；8切片；9粘片（粘片剂-Haupt粘贴剂）；10脱蜡 二甲苯5s-10s、1/2的二甲苯 +1/2的纯酒精5s-10s、纯乙醇5s、95%乙醇5s-10s、70%乙醇5s； 11染色 番红-固绿对染（见 下面）；12圭寸固13镜检 照相分析。10染色体压片流程：取材，预处理，固定（卡诺固定液），解离（HCL），染色（卡宝），压 片，封片11基数（x）及倍性（n）： x代表个体发育的范畴，n表示配子体世代（代表系统发育的范畴） 12核型表述：核型图，模式图，核型公式如芍药2n=2x=10=6m+2sm+2st （SAT） 核型分析参数表中的*表示包括随体长度。13固定剂的种类：酒精，甲醛，冰醋酸，铬酸，苦味酸，娥酸，重铬酸钾，氧化汞，碘 分带类型：荧光分带（包括Q带、H带、AO带等）和Giemsa分带（包括C带、N带、G带 等）14分带处理：能显