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1、酿酒酵母的培养与观察摘要：本实验利用液体培养基对酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）在28下进行3d培养，并以麦芽汁琼脂培养基与麦氏（Meclary）培养基进行菌种活化与产孢培养，通过美蓝染色、子囊孢子染色，在普通光学显微镜下观察酵母菌的基本形态、出芽情况和子囊孢子等结构。关键词：酿酒酵母 出芽 子囊孢子 前言酵母菌是一群单细胞的真核微生物，极少数种可产生子囊孢子进行有性繁殖。在光学显微镜下，一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形。酵母菌与人类生活关系十分密切，在酿酒、食品、医药工业等方面占有重要地位。 酿酒酵母（S. cerevisiae）是与人类关系最广泛的一种酵母，不仅
2、因为传统上它用于制作面包和馒头等食品及酿酒，在现代分子和细胞生物学中用作真核模式生物，其作用相当于原核的模式生物大肠杆菌。酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形，直径510 m。其繁殖的方法为出芽生殖。液体培养基、麦氏（Meclary）培养基在本次实验的各个阶段起到不同的重要作用。而利用活的酵母菌对于美蓝的分解作用，可以利用美蓝染色达到鉴别死活细菌的目的。另外，子囊孢子的染色技术利用孔雀绿与番红使孢子与菌体分别带上不同的颜色，更容易观察。本文就将以这些为基础，培养和观察酿酒酵母（S. cerevisiae），在熟悉实验技法的同时，对酿酒酵母（S. cerevisiae）
3、有一个更深入的认识。1. 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种 酿酒酵母（S. cerevisiae）1.1.2 培养基1.1.2.1 液体培养基 蛋白胨2g；酵母膏1g；葡萄糖2g；蒸馏水100ml；pH自然（6.0左右）1.1.2.2 麦氏（Meclary）培养基 葡萄糖0.1g；KCl 0.18g；酵母浸膏0.25g；琼脂1.52.0g；醋酸钠0.82g；蒸馏水100ml1.1.3 试剂 0.1%美蓝溶液；5%孔雀绿溶液；0.5%番红溶液；蒸馏水1.1.4 仪器 电子天平；玻璃棒；药匙；加热器；100ml量筒；高压蒸汽灭菌锅；培养皿；盖玻片；载玻片；酒精灯；接种环；试管；恒温箱；普通光
4、学显微镜；锥形瓶1.2 方法1.2.1 酿酒酵母（S. cerevisiae）培养1.2.1.1 按照液体培养基的配方，称取成分，在锥形瓶中混合，加塞，包扎，在高压蒸汽灭菌锅中120下灭菌20min；1.2.1.2 通过无菌操作技术接种酿酒酵母（S. cerevisiae）于液体培养基中，放在28下培养3d1.2.2 产孢培养1.2.2.1 按照麦氏（Meclary）培养基配方，称取成分，在锥形瓶中混合，分装、加塞，包扎，在高压蒸汽灭菌锅中120下灭菌20min，搁置斜面；1.2.2.2 将活化的酿酒酵母（S. cerevisiae）接到麦氏（Meclary）培养基上，30下恒温培养一周；1.
5、2.3 美蓝染液水浸片法 在洁净的载玻片中央滴加一滴0.1%美蓝染液，无菌操作用灭菌的接种环从液体培养基中蘸取少量菌液，滴加在载玻片上，混合均匀，轻缓地盖上盖玻片，3min后进行镜检；1.2.4 子囊孢子制片观察 在洁净载波片上滴加一滴蒸馏水，从麦氏（Meclary）培养基斜面上通过无菌操作技术挑取少量菌苔于水滴中，涂片，加热固定后，用5%孔雀绿染液染色2min，水洗至流出液无色后，用95%的乙醇脱色30s，接着利用0.5%番红复染30s，水洗至流出液无色，自然干燥；1.2.5 镜检2. 结果与分析 本次实验在光学显微镜下得到了不错的结果，基本达到了预期目标，并记录如下。 在图1和图2，为美蓝
6、染液水浸片法在显微镜不同倍数下观察到的酵母菌。死活菌体被明显地区分开来。死细菌呈现蓝色，而活细菌则是透明无色的，且边缘发亮类似水滴。观察中，活菌数量远远大于死菌数量。视野中，酿酒酵母（S. cerevisiae）菌体呈现明显的椭圆形，而且有较多出芽中的酵母菌菌体存在（大的上面连了一个小的）具体见图2。在图3中，子囊孢子着上明显的绿色，而酿酒酵母菌体被0.5%番红溶液染成红色，从视野中可以看出子囊孢子所占比例较多，且在每个子囊中又存在着3个小孢子。产孢培养是比较成功的。 死酵母菌活酵母菌图2：美蓝染色下显微图（1040）图1：美蓝染色下显微图（1010）子囊孢子菌体图3：子囊孢子染色下显微图（1040）3.小结本次实验主要是对酿酒酵母基本形态与子囊孢子的观察与学习。在美蓝染色中，被染成蓝色的死菌数量比较多，染色较好。实验中，注意美蓝溶液不能过多增加，否则也会导致部分活菌着色在孢子染色中，使用孔雀绿染色时，可以不用加热，在常温下染色4到5分钟后即可用自来水冲洗，再用番红染色。 参考文献1 沈萍，陈向东. 微生物学实验M. 4版. 北京：高等教育出版社，2007.
