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1、第五章分光光度法第一节紫外可见分光光度法掌握紫外可见分光光度法的基本原理和方法，紫外可见分光光度计的基本结构及校正。一、基本原理（一）概述光学分析法：物质辐射能间相互作用建立起来的定性定量方法。光谱法（物质的光谱）：能级跃迁产生辐射随波长变化。X射线光谱法；紫外可见吸收光谱法；红外吸收光谱法；（吸收光谱法；发射光谱法；分子光谱法；原子光谱法）非光谱法（电磁波传播方向、速度改变）：折射分析法；旋光分析法。紫外可见分光光度法：-根据物质分子对波长为200760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。（二）光的性质与波长范围 光：电磁波（电磁辐射）能量在空间高速传播的
2、一种形式。二象性：波动性、粒子性C（真空中传播速度）2.9979251010cms-1：波长：相邻两波峰之间的距离，nm，m，A（埃）n：频率（赫兹）、（hz）C TC/1nm = 10-3mm = 10-6mm = 10-7cm = 10-9m = 10 AE = h = hc/大，E小；小，E小（三）BeerLambert定律-吸收光谱法的基本原理A = lgT = ELCT = 10-A = 10-ELC； E1%1cm（四）吸收系数与吸收光谱E：吸光物质在单位浓度，单位液层厚度时的吸收度。特性常数（单色光、溶剂、温度一定）常温下，温度改变对E影响很小E，A，灵敏度 E定性、定量依据。，
3、一定波长下，C = 1mol/L , L = 1cm时A；E1%1cm，C 1%（W/V），L 1cm，AE1%1cm10/M（五）影响Beer定律因素：理论上：AC，通过原点的直线。实际：偏离直线。原因:（一）化学因素: 溶质-离解,缔合,与溶剂作用。控制溶液条件（二）光学因素：非单色光、杂散光、散射光、反射光、非平行光。A型题：某药物的摩尔吸收系数（）很大，则表示：A.光通过该物质溶液的光程长B.该物质溶液的浓度很大C.该物质对某波长的光吸收能力很强D.该物质对某波长的光透光率很高E.测定该物质的灵敏度低【答疑编号21050101：针对该题提问】答案：C紫外可见吸收光谱中的B带是下列哪一类
4、的特征吸收带A.脂肪族B.芳香族C.有机胺类 D.烯烃类E.硝基化合物【答疑编号21050102：针对该题提问】答案：B二、紫外可见分光光度计基本结构：光源、单色器、吸收池、检测器、讯号处理、显示器。紫外可见分光光度计： 单光束、双光束仪器性能检查，药典规定，仪器校正，检定X型题紫外可见分光光度计应定期检查：A.波长精度B.吸收度准确性C.狭缝宽度D.溶剂吸收E.杂散光【答疑编号21050103：针对该题提问】答案：ABE紫外分光光度计是由以下部件组成的A.氘灯B.光栅C.石英吸收池D.光电管E.真空热电偶【答疑编号21050104：针对该题提问】答案：ABCD三、紫外可见吸收光谱与结构关系（
5、略）四、定性与定量方法（一）定性鉴别：吸收光谱特征：吸收光谱形状、吸收峰数目、各吸收峰的波长位置、强度、吸收系数值对比法：（1）与标准化合物的吸收光谱特征比较（2）与文献标准图谱比较完全相同可能是同一种化合物明显差别肯定不是同一种化合物1.对比吸收光谱特征数据：定性鉴别：max（峰、谷、肩峰），光谱特征；EX型题：用紫外分光光度法鉴别药物时，常采用核对吸收波长的方法。影响本法试验结果的条件有：A.仪器波长的准确度B.供试品溶液的浓度C.溶剂的种类D.吸收池厚度E.供试品的纯度【答疑编号21050105：针对该题提问】答案：ACE2.对比吸收度（吸收系数）的比值：A1/A2El1/E2紫外分光光
6、度法鉴别药物，常用的测定参数有：A.maxB.max的E1%1cmC.A1/A2 D.C/C2E.T 【答疑编号21050106：针对该题提问】答案：AC3.对比吸收光谱的一致性：光谱曲线完全一致，才有可能是同一物质（也有并非同一物质的可能性）光谱曲线有明显差别时，肯定两物不是同一物质（二）纯度检查：1.杂质检查:有吸收的杂质-使化合物的吸收光谱变形。化合物紫外可见区没有明显吸收，所含杂质有较强吸收-少量杂质就可用光谱检索出来。化合物较强吸收峰：杂质无吸收峰，很弱-稀释效应，E（e）杂质更强吸收峰-E（e） 2.杂质限量检测：A：肾上腺素中肾上腺酮，A0.05；峰谷A比值：药典碘磷定杂质，A2
7、94/A2623.39（三）含量测定：灵敏度：mg/ml ，2%误差由于UVVis吸收峰简单，平缓，特征性不强，不如红外分光光度法，药物分析中常用于含量测定。1.单组分的定量方法：AECLAC 线性， AC（1）吸收系数法：（绝对法）AECLCA/ELA型题：1.中国药典（1990年版）规定维生素B12注射液规格为0.1mg/ml，含量测定如下：精密量取本品7.5ml，置25ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，混匀，置1cm石英池中，以蒸馏水为空白，在3611nm波长处吸收度为0.593，按E1%1cm为207计算，维生素B12按标示量计算的百分含量为：A.90%B.92.5%C.95.5%D.9
8、7.5%E.99.5%【答疑编号21050201：针对该题提问】答案：C2.对乙酰氨基酚的含量测定方法为：取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数（E1%1cm）为715计算，即得。若样品称样量为m（g），测得的吸收度为A，则含量百分率在计算公式为：A.A/715250/51/m100%B.A/715100/52501/m100%C.A715250/51/m100%D.A7151
9、00/52501/m100%E.A/7151/m100%【答疑编号21050202：针对该题提问】答案：A样品（%）（E1%1cm）样/（E1%1cm）标A/（CL715）A/715250/51/m100%（2）标准曲线法：单色光不纯，A变化大C，误差大 AKCAKCK比例常数标准曲线上查出回归方程（3）对照法：标准溶液，样品溶液，选定波长A标EC标LA标/A样EC标L/ EC样LA标/A样C标/ C样A样EC样LC样C标A样/A标同种物质，同台仪器，同一波长测，故 E、L相等X型题：紫外分光光度法中，用对照品比较法测定药物含量时，A.需已知药物的吸收系数。B.供试品溶液和对照品溶液的浓度应接
10、近。C.供试品溶液和对照品溶液应在相同的条件下测定。D.可以在任何波长处测定。E.是中国药典规定的方法之一。【答疑编号21050203：针对该题提问】答案：BCE2.多组分的测定方法：两组分光谱曲线互不重叠：分别测定。两组分光谱部分重叠：吸光度加和性。两组分光谱曲线互相重叠：吸光度加和性。 第二节荧光分析法芳香族-共轭的不饱和体系，易产生荧光掌握荧光分析法的基本原理和方法一、概述某些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光之外还会发射出比原来所吸收的光的波长更长的光；当激发光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光称为荧光。分子荧光；原子荧光。利用荧光的物理特性，进行定性与定量测定的方法 定性鉴别物
11、质：分子结构不同，吸收光的波长与发射的荧光波长不同。定量测定： C FUVVis 107g/ml荧光法 101010 12g/ml二、基本原理（一）荧光的产生：某些物质吸收一定的紫外光或可见光后，基态原子跃迁到激发态的各个不同能级，然后经过振动弛豫掉到第一激发态的最低振动能级，在发射光量子后，分子跃迁回基态的各个不同振动能级，这时分子发射的光称为荧光。由于振动弛豫损失了部分能量，荧光的能量小于原来吸收的紫外光的能量，故发射荧光的波长比原来照射的紫外光的波长更长（二）荧光光谱-荧光的发射光波长为横坐标；发射光强度为纵坐标 荧光光谱，荧光激发光谱是物质定性分析依据 ex、em最大激发光波长、最大荧
12、光波长 F2.3KI0ECLlKC （正比条件：吸收百分率不太大，C很小，l不变） K荧光效率三、荧光分光光度计从样品池出来的荧光是各方向发射的，在与激发光光源排成直角的方向测荧光强度可以避免透射的激发光的干扰。A型题1.荧光是指当用一定波长的紫外光或可见光照射某一物质时，此物质会在短时间内发射出：A.波长较照射光的波长为短的光B.波长较照射光的波长为长的光C.波长与照射光波长相等的光D.波长较磷光波长为长的光E.波长较磷光波长相等的光【答疑编号21050204：针对该题提问】答案：B2.在测量药物荧光强度时，要在与入射角成直角的方向上进行测定，这是由于：A.荧光的波长比入射光的波长长B.荧光
13、强度比透射光强度小C.荧光强度比透射光强度大D.只有入射角成直角的方向上才有荧光E.荧光是向多方向发射的,为了减少透射光的影响【答疑编号21050205：针对该题提问】答案：E 第三节红外分光光度法（IR）掌握红外分光光度法的基本原理；熟悉基频区与指纹区的波段范围及主要吸收峰的位置、强度一、概述红外线： 0.76mm500mm近红外区（泛频区） 131584000cm1中红外区（基本振动区）4000200 cm1远红外区（转动区） 20020 cm1IR-分子振动、转动能级的跃迁引起几乎所有的化合物都有自己特征的红外光谱-鉴定依据二、基本原理（一）分子振动与红外吸收： 分子基本振动形式：伸缩振动；弯曲振动（变形振动）。振动频率入射的红外线振动频率相同时，分子对红外线产生吸收。（二）基频峰、泛频峰：
