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1、人白细胞介素-6 （IL-6）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细 胞介素6 （IL-6）,只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-6（IL-6）的测定。工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素-6IL-6）的水平。向预先包被了人白细胞介素-6（IL-6）单克隆抗体的酶标孔中加入白细 胞介素-6（IL-6），温育；洗涤后，加入HRP标记过的白细胞介素-6（IL-6）抗体。再经 过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B,产生蓝色，
2、并在酸的作用下转化 成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素-6 （IL-6）的浓度呈正相关。试剂盒组成1标准品（16ng/L）0.5ml7显色剂A液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂B液6ml3酶标包被板12孔X8条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1份530倍浓缩洗涤液20ml11封板膜2张6样品稀释液6ml12密封袋1个需要而未提供的试剂和器材1. 37 C恒温箱。2 标准规格酶标仪。3. 精密移液器及一次性吸头4. 蒸馏水，5. 一次性试管6. 吸水纸注意事项1. 从2-8C取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封 后如未用完，板条应装入密封袋中保
3、存。2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释 液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。4 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。6 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。7. 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几 次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml 注
4、入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融操作程序1.标准品的稀释（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明在小试管中自行倍比 稀释）：8ng/L（5号标准品）120卩1的原倍标准品加入120卩1的标准品稀释液4ng/L（4号标准品）120卩1的5号标准品加入120卩1的标准品稀释液2ng/L（3号标
5、准品）120卩1的4号标准品加入120卩1的标准品稀释液1ng/L（2号标准品）120卩1的3号标准品加入120卩1的标准品稀释液0.5ng/L（1号标准品）120卩1的2号标准品加入120卩1的标准品稀释液2. 分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待 测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50卩1 ；在酶标包被板上待 测样品孔中先加样品稀释液40卩1，然后再加待测样品10卩1 （样品最终稀释度为5倍）。 轻轻晃动混匀，37C温育30分钟。3. 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。 如此重复 5 次，拍
6、干。4. 每孔加入酶标试剂50卩1，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37C温育30分钟。5. 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。 如此重复 5 次，拍干。6. 每孔先加入显色剂A50pl，再加入显色剂B50pl，轻轻震荡混匀，37C避光显色10分 钟.7. 取出酶标板，每孔加终止液50卩1，终止反应（此时蓝色立转黄色）。8. 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加 终止液后15分钟以内进行。9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由 于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37C反应30分钟 洗板5次，加入酶标试剂，37C反应30分钟 洗板5次，加入显色液A、B, 37C显色10分钟加入终止液XZ 15分钟之内读OD值计算检测范围：0.3ng/L-10ng/L。 规格：96T/盒保存：2-8C有效期：6个月（2-8C）。
