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1、C6大鼠神经胶质瘤模型材料：雄性近交系C6大鼠50只（56周龄，250300g），C6大鼠脑神经胶质瘤细胞；试剂：DMEM培养液，胎牛血清（FCS），pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)，0.25%胰蛋白酶消化液，pH7.4Tris盐酸盐缓冲液(TBS)等；仪器：超净工作台SA一IIA型，CO2培养箱MODEL5410，STIII型三维手动推进仪，倒置显微镜IX70型，培养瓶，WDT一V型脑立体定向仪，50ul微量进样器，微型颅骨打孔钻；方法：1、C6细胞体外培养及接种前准备：（1）C6细胞的复苏：把冷冻细胞的管子迅速放入38水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化，然后在无菌下取出细胞。在10
2、00r/min速度下离心10分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1109/L，置37温箱静置培养，盖好培养瓶的盖子，培养24小时。(2)将复苏后C6胶质瘤细胞，在DMEM完全培养基中，20%CO2、37、饱和湿度条件下培养瓶中单层培养；每日显微镜观察细胞生长情况；隔日半量更换培养液。（3）等到肿瘤细胞呈对数生长时，收集细胞。倒出瓶中培养液，先用PBS轻洗，然后室温下加入2ml 0.25%胰蛋白酶消化液浸泡细胞；显微镜下观察，大部分细胞变成圆球形、胞质回缩、细胞间隙增大时，加入培养液终止消化; 吸管吹打，移入离心管，1000r/min低速离心10分钟，快速倾去上清，加入5倍
3、以上体积的PBS，吸管轻轻吹打均匀，1000r/min低速离心10分钟，倾出上清;如此漂洗2次后，加入定量PBS，吹打均匀。（3）取一滴细胞悬液滴入血球计数板的细胞计数池中，静置沉降1分钟，低倍镜下计数四大中格中的结构完整的细胞，小细胞团计数为1，细胞总数按以下公式计算:细胞总数=(四大中格细胞数/4)xl0000x细胞悬液总量(ml)。（4）细胞悬液1000r/ntin低速离心10分钟，快速倾去上清，加入定量PBS，调整细胞悬液浓度（5105/ml），吹打均匀细胞悬液移入2ul无菌冻存管，放入碎冰中待种。（5）取10ul细胞悬液，用PBS选择合适倍比稀释，加入台盼蓝染液混匀，取样，计数板下观
4、察、计数100200个细胞，活细胞圆形透明，死细胞蓝染，拒染活细胞95%。2、立体定向大鼠脑内接种细胞：(1)靶点坐标：大鼠右侧脑尾状核区：前囱中点前1.0mm，矢状缝右旁开3.0mm，硬脑膜下5.0mm；(2)接种方法：Fischer344大鼠经2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.04g/kg)后，俯卧固定于大鼠脑立体定向仪，头部去毛，常规消毒。沿头颅正中线纵向切开头皮，暴露前囱。在靶点处用微型颅骨打孔钻钻1骨孔。50ul微量进样器抽取10ul（约1.0x106个）细胞悬液，固定于三维手动推进仪，经骨孔垂直于颅骨外板进针6.0mm，回退1.0mm。以1.0ul/min的速度推注，完毕后留针5分钟，使细胞充分沉淀，缓慢拔针，骨蜡封闭骨孔。生理盐水冲洗术野，缝合切口后消毒皮肤。（3）大鼠MRI检查：第10、14、20天MRI检查结论：大鼠于接种后第10天MRI增强扫描，接种部位可见肿瘤灶；第14天，肿瘤增大，显示清晰;第20天，肿瘤明显增大，占位效应明显。
