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1、常用溶液的配制一、常规溶液（一）1/15mol/L PBS（磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution, PBS） 甲液：1/15mol/L Na2HPO4 溶液Na2HPO49.465g蒸馏水加至 1000ml乙液：l/15mol/L KH2PO4 溶液KH2P049.07g蒸馏水加至 1000m1分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:pH甲液 ml乙液 mIpH甲液 ml乙液 mI5.292.597.56.8150.050.05.595.095.06.9860.040.05.9110.090.07.1770.0
2、30.06.2420.080.07.3880.020.06.4730.070.07.7390.010.06.6440.060.08.0495.05.0（二）0.3台盼兰染液称取台盼兰（Trypan blue）粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤 纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。（三）0.5酚红指示剂酚红0.5g0.1N（0.4）NaOH15ml双蒸水85ml将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红 液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。（四）5.6%NaHCO3 溶液称NaHCO35
3、.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可（如需要也可10磅15分钟高压 灭菌，4C冰箱保存）（五）10“ ml秋水仙素秋水仙素lOmg生理盐水100ml装入茶色瓶中，为贮备液，4C冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。（六）0.4 % KCl-0.4 %柠檬酸钠低渗液将 0.4 KCl 和 0.4 柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。（七）2柠檬酸钠称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。（八）0.2次甲基兰染液称次甲基兰（Methyle ne blue）0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。（九）0.5%醋酸洋红（Aceio Carmi ne）染液洋红lg醋酸
4、90ml蒸馏水110ml将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速 冷却过滤，加饱和氢氧化铁（媒染剂）水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红 沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。（十）1%甲苯胺兰（Toluidi ne blue）称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。（十一）1/3000中性红染液取中性红（Neutral red）0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。（十二）Giemsa染液1贮备液Giemsa 粉1g纯甘油66ml甲醇66ml先将 Giemsa 粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全
5、部甘油加入，放入56C温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。2工作液临用时将贮备液与PH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。（十三）埃利希（Ehrlich）苏木精染液苏木精1.0g乙醇50ml醋酸5ml甘油50ml硫酸铝钾5g蒸馏水50ml将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油 加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将 其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经 常摇动以加速其成熟，成熟约需4 周左右，成熟的染液为深红色。二、细胞化学和细胞组分分离溶液(
6、一)M 缓冲液 眯唑(Imidazole)KCIMgCI26H2OECTAEDTA 巯基乙醇 甘油 蒸馏水3.404g3.7g101.65mg380.35mg29.224mg0.07ml297ml加至 1000ml用INHCI调pH至7.2室温保存。(二) 2%Trit on X 一 100 溶液量取2mITriton X 一 100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。甲醇醋酸考马斯亮兰46.5mI7.0mI0.2g加至 100mI蒸馏水(四)A. 0.1%碱性固绿染液(pH8.08.5)10.1%固绿水溶液固绿(Fast gree n)蒸馏水0.1g100mI2. 0.05%N
7、a2C03 溶液Na C023 蒸馏水用时按1:1体积混合即可B. 0.1%酸性固绿染液(pH2.2)1. 0.1%固绿水溶液。2. mol / Lx75 盐酸液50mg100mI盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml用时按 l:1 混合。(五)甲基绿一哌咯宁染液1.1mol / L 醋酸缓冲液(pH4.8)：(1)醋酸17ml蒸馏水加至 200ml(2)醋酸水蒸馏水13.5g加至 lOOml(三) 0.2%考马斯亮兰R-250染液用时分别取两液 40ml、60ml 混匀即可。2.甲基绿一哌咯宁（methyl gree nPyrc nln）5%哌咯宁水溶液2%甲基绿水溶液 蒸馏
8、水lmol/L醋酸缓冲液6ml6ml16ml16mllmol/L 醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。（六）Sch iff试剂将碱性品红0.5克加入100ml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50C时过 滤到棕色瓶中，加1N HC110毫升，冷却至25C时加入1克NaHSO3,此时需很好的振荡, 避光过夜。次日取出（呈淡黄色）加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。 避光低温保存。（七）联苯胺混合液联苯胺（4.4 Diamino benzidine）0.2g95%乙醇3%过氧化氢 此液临用时配制。（八）1 %番红水溶液l00ml2滴番红（Safra nin）蒸馏水1.
9、0g100ml（九）1%SDS（十二烷基硫酸钠 Sodium dodecyl sulfate,SDS）SDS45%乙醇10g100ml（十）1mol / LTris（三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethaneTris/HCL）pH7.8Tris蒸馏水12.114gl00ml先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8,然后加水至100ml（十一）Rin ger Soluti on氯化钠（冷血动物用 0. 65 克）0.9 克氯化钾氯化钙蒸馏水（十二）淀粉肉汤培养基蛋白淀粉牛肉汤0.042克0.025克100ml2g6g100ml用 10%NaH
10、CO3 调 pH 至 7.07.2（十三）0.25mol / L蔗糖一 0.003mol/L氯化钙溶液蔗糖85.5g氯化钙0.33g蒸馏水1000ml（十四）1%詹纳斯绿B染液取詹纳斯绿 Ja nus green B）1.0g Rin ger 氏液 100ml（十五）1%刚果红染液刚果红1g蒸馏水100ml（十六）Gomori硝酸铅作用液0.05mol / L 醋酸缓冲液（pH5）lOOml0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其42ml醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200mlB-甘油磷酸钠2g醋酸铅2g5%氯化镁5ml以上作用液在临用时配制，最终在pH55.2,过滤使用。（王
11、世藩 汇编）三、细胞培养和细胞融合溶液（一）0.01mol / LPBS（磷酸盐缓冲液 Phosphate Buffer Saline, PBS）pH7.2。0.2mol/L磷酸氢二钠液（甲液）：NaH2PO412H2O35.814g双蒸水加至 500ml0.2mol/L磷酸二氢钠液（乙液）：NaH PO 12H O15.601g242双蒸水加至 500ml取甲液36ml,乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4C冰箱备用。（二）50%PEG（聚乙二醇 Polyethyleneglycol mwl500）称取0.5克PEG，用前放入试管中
12、在酒精灯火焰上熔化，加入等量37C予热的MEM培养液，混匀，保温在37 C水浴中待用。（三）MEM培养液（含10%小牛血清）MEM 培养液（日本制药株式会社）9.4g双蒸水1000mlNaHCO31.5g谷氨酰胺（L-glutami n）0.292g56C灭活30分钟的小牛血清110mlMEM粉末加水溶解后，用NaHCO3调pH到7.1（因在抽滤过程中pH升高0.20.3），然 后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6抽滤除菌，分装，置4C冰箱 保存备用。（四）0.25%胰蛋白酶一 0.02%EDTA混合消化液胰蛋白酶(Trypsi n)粉EDTA 粉0.01molL PBS0.
13、25g20.0mg100ml先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37C水浴中 1小时左右（待彻底溶解，液体呈透明为止），用G5抽滤，分装置4C冰箱中保存。（五）Ha nks 液1原液甲NaClKClMgSO47H2OMgCI26H2O 溶于 800ml 馏水中。CaCl2 (无水)溶于 100ml 蒸馏水中。160g8g2g2g2.8g将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4C冰箱备用。原液乙Na HPO 12HQ242KH2PO4葡萄糖3.04g1.2g20.0g溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5%酚红80ml，
14、再加水至1000ml，最后 加入2ml氯仿防腐，置4C冰箱备用。2使用液甲乙两液各1份,双蒸水18份,混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4C 冰箱中保存。使用时用5.6%NaHCO3调pH值到所需要求。（六）1640培养液（含10%小牛血清）RPMI-1640 粉双蒸水10.39g加至 1000ml通入适量的C02气体，边通入CO2边慢慢搅拌，使其（呈透明）完全溶解。用NaHCO31.5 克调 pH 值到 7.2。双抗 1 万 u/ml 灭活小牛血清10ml110ml混匀上述液体，立即用G6抽滤除菌分装，置4C冰箱备用。（七）青、链霉素溶液青霉素钠盐（40万u /瓶）5瓶链霉素（100万u /瓶）2瓶将两者溶于200ml0.9%的无菌生理盐水，分装小瓶，-30C保存。双抗在培养基中的终浓度 为各lOOu为宜。（八）二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4%。（九）BrdU 溶液（200ug/m1
