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1、大蒜新素素及其衍衍生物对对兔痒螨螨的体外外杀螨活活性研究究任方奎 何小小燕 李逐波波*通讯作者：西南大学药学院，E-mail:（西南大大学药学学院，重重庆北碚碚 40007116）来源：原原作 收稿稿：20009-11-21 南宁宁兽药科科技网上上传时间间：20009-12-1 编辑辑:doongyy大蒜新素素是从大大蒜（AAlliium sattivuum）中中提取的的一种具具有很强强刺激性性的挥发发性油状状物质，其其化学名名称为二二烯丙基基三硫醚醚，该化化合物可可以人工工合成1。大大蒜新素素具有很很强的抗抗菌22、抗抗病毒3、抗抗肿瘤4、抗抗癌55等多多种药理理活性。但但大蒜新新素在抗抗寄
2、生虫虫方面的的报道很很少，LLun Z RR等66 曾曾报道大大蒜新素素可以治治疗贾第第虫病和和有溶组组织内阿阿米巴（Entamoeba histolytica）和滴虫性阴道炎（Trichomonas vaginalis）等疾病。目前为止，大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的研究还未见报道。本文主要研究大蒜新素及其衍生物对兔痒螨的体外杀螨活性，测定半数致死时间（LT50）和半数致死浓度（LC50），并对大蒜新素及其衍生物的构效关系进行了初步探讨。1 试验验材料1.1 供试动动物自然感染染螨病的的家兔66只，雌雌雄兼有有，平均均体重22.00.55kg。由由重庆市市北碚区区某兔场场提供。1.2 仪器与与
3、试剂倒置显微微镜，220孔细细胞培养养板，挑挑虫针，大大蒜新素素（南通通鑫利化化工有限限公司，批批号：XXY07707005），二二丁烯三三硫醚、二二戊烯三三硫醚和和二己烯烯三硫醚醚均有本本实验室室合成7，伊伊维菌素素（河北北威远动动物药业业有限公公司），硫硫软膏（成成都明日日制药有有限公司司）。2 方法法2.1 药品配配制精密称取取1.00g大蒜蒜新素及及其衍生生物于110mLL的容量量瓶内，加加0.11mL吐吐温-880用水水定容至至刻度，混混匀，即即得1000mgg/mLL的储备备药液，44oC冰箱箱中保存存备用。精精密称取取0.225g的的阿维菌菌素于110mLL的容量量瓶内，加加0.
4、11mL的的吐温-80，用用水定容容至刻度度，混匀匀，即得得浓度为为25mmg/mmL的阿阿维菌素素，作为为阳性对对照液。取取0.11mL的的吐温-80于于10mmL的容容量瓶内内用水定定容，作作为阴性性对照液液。2.2 离体杀杀螨试验验892.2.1 痒痒螨的采采集用小镊子子剥取自自然感染染螨虫病病家兔的的耳道痂痂皮及脓脓血置平平皿内，平平皿边缘缘涂少量量的硫软软膏。置置30ooC温箱箱内保存存30mmin使使虫爬出出，借助助放大镜镜，用挑挑虫针挑挑取螨虫虫，在显显微镜下下对兔痒痒螨的形形态学进进行观察察100，鉴鉴定为兔兔痒螨。2.2.2 杀杀螨活性性的测定定将试验分分为药物物组、阳阳性对
5、照照组和阴阴性对照照组。药药物组：在200孔细胞胞培养板板的每孔孔各加入入1000mg/mL供供试药物物0.22mL。阳阳性对照照组：220孔细细胞培养养板每孔孔各加入入10mmg/mmL的阿阿维菌素素0.22mL。阴阴性对照照组：在在培养板板的每个个孔中加加0.22mL的的阴性对对照液。每每组设置置3个重重复。每每孔放置置痒螨110只，在在1040倍倍显微镜镜下观察察，分别别记录螨螨的死亡亡时间。判判定标准准：虫体体淋巴液液流动，虫虫体不动动但刺激激有反应应或长时时间微弱弱颤动为为麻醉；虫体淋淋巴液静静止，虫虫体完全全不动，刺刺激无反反应，判判定为死死亡。2.2.3 半半数致死死时间（LLT
6、500）的测定定将大蒜新新素及其其衍生物物的储备备液用水水稀释成成浓度为为20mmg/mmL，挑挑取100只螨虫虫置于220孔的的细胞培培养板中中，每个个孔加00.2mmL药物物，设置置3个重重复，同同时以阴阴性对照照液为阴阴性对照照。给药药后用显显微镜观观察，直直至所有有痒螨死死亡，记记录每个个时段的的死亡情情况。2.2.4 半半数致死死浓度（LLC500）的测定定将大蒜新新素及其其衍生物物储备液液先水稀稀释成44mg/mL, 再倍倍比稀释释成2.0mgg/mLL、1.00mg/mL、00.5mmg/mmL、00.255mg/mL和和0.1125mmg/mmL5个个不同浓浓度，每每个浓度度设
7、置33个重复复，同时时以阴性性对照液液为阴性性对照。在在培养板板的试验验孔中各各加0.2mLL不同浓浓度的药药物, 每孔挑挑入100只螨虫虫。将培培养板放放入测试试环境(25ooC，相相对湿度度为755%)，224h后后镜检死死亡情况况。2.3 统计分分析根据机率率值分析析法，用用Exccel的的卡方检检验运算算程序自自动判断断毒力回回归方程程的适合合性与否否111，计计算出LT500和LC500。用SPSSS 112.00 软件件对试验验数据进进行多因因素方差差分析。3 结果果与分析析3.1 杀螨活活性从表1中中可以看看出，1100mmg/mmL的大大蒜新素素5miin开始始出现螨螨虫死亡亡
8、，133minn全部死死亡，225mgg/mLL的阿维维菌素55minn开始出出现螨虫虫死亡，117miin螨虫虫全部死死亡，可可见1000mgg/mLL的大蒜蒜新素与与25mmg/mmL的阿阿维菌素素的杀螨螨活性差差异显著著（P0.005）。从从表1中中可以看看出，相相同浓度度下的大大蒜新素素衍生物物的完全全杀死螨螨虫所需需要的时时间长于于大蒜新新素，大大蒜新素素与二丁丁烯三硫硫醚，二二己烯三三硫醚之之间的差差异显著著（P0.005）。二二丁烯三三硫醚、二二戊烯三三硫醚与与阿维菌菌素的差差异不显显著（PP0.05），与与二己烯烯三硫醚醚的差异异极显著著（P0.001）。大大蒜新素素衍生物物之
9、间的的差异显显著（PP0.05）。可见，1100mmg/mmL大蒜蒜新素与与25mmg/mmL的阿阿维菌素素杀螨活活性相当当，从图图3中可可以看出出随着链链的延长长大蒜新新素及其其衍生物物的杀螨螨时间呈呈现“N”规律变变化。表1 大大蒜新素素及其衍衍生物对对兔痒螨螨的离体体杀螨活活性Tablle 11 Allliccin andd allliccin derrivaativves forr thhe aacarriciidall acctivvityy aggainnst Psooropptess Cuunicculii inn viitroo组别药物螨虫数开始死亡亡的时间间/miin全部死亡
10、亡的时间间/miin药物组100mmg/mmL大蒜蒜新素1051ddD1322eD100mmg/mmL二丁丁烯三硫硫醚101011cC2022cC100mmg/mmL二戊戊烯三硫硫醚1071ddCD1522deCCD100mmg/mmL二己己烯三硫硫醚102022bB3533bB阳性对照照组25mgg/mLL阿维菌菌素1051ddD1711cdCCD阴性对照照组101080060aAA288000aA同一列中中右上角角标有不不同小写写字母的的数据之之间差异异显著(P00.055),标标有不同同大写字字母的数数据之间间差异极极显著(P00.98840)，即大大蒜新素素的毒力力与作用用时间呈呈正相
11、关关,得出出大蒜新新素、二二丁烯三三硫醚、二二戊烯三三硫醚和和二己烯烯三硫醚醚的LTT50分别别为0.62667、11.10036、00.82274和和2.223088。大蒜蒜新素及及其衍生生物之间间的LTT50存在在极显著著差异(P00.011)。阴阴性对照照组无痒痒螨死亡亡。可见，220mgg/mLL的大蒜蒜新素及及其衍生生物有较较小的LLT500,大蒜蒜新素及及其衍生生物的的的毒性比比较大。从从图3中中可以看看出随着着碳链的的延长LLT500的数值值呈现“N”变化。表2 大大蒜新素素及其衍衍生物对对兔痒螨螨的毒力力（LTT50）的的几率值值回归分分析Tablle 22 Prrobiit
12、rregrresssionn annalyysiss off tooxiccityy（LTT50）oof thee Allliccin and allliciin dderiivattivees PPsorropttes Cunnicuuli in vittro药品浓度mgg/mLL回归方程程LT500/h卡方值2相关系数数r大蒜新素素20y=5.51881 +2.555333 x0.62267DD0.000040.99999二丁烯三三硫醚20y=4.90226 +2.227388 x1.10036BB0.100080.99911二戊烯三三硫醚20y=5.16775+22.03347 x0.8
13、2274CC0.144300.99968二己烯三三硫醚20y=4.28556+22.05503 x2.23308AA0.155570.98840同一列中中右上角角标有不不同大写写字母的的数据之之间差异异极显著著(P0.001)。3.3 半数致致死浓度度的计算算010203040506070809010000.511.522.5浓度（mg/mL)死亡率%大蒜新素二丁烯三硫醚二戊烯三硫醚二己烯三硫醚图2 不不同浓度度大蒜新新素及其其衍生物物对兔痒痒螨的 24 h 致致死率Figuure 2 Thee moortaalitty oof ddifffereent conncenntraatioons of thee allliccin and allliciin dderiivattivees PPsorropttes Cunnicuuli aftter 24 h从图2中中可以看看出大蒜蒜新素及及其衍生生物随着着浓度的的增加，螨螨虫的死死亡率增增加。根根
