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1、实验九菌落总数的测定一、目的要修业习掌握菌落总数测定的基来源理和方法，认识食品上微生物的散布和生殖动向。二、实验说明菌落总数是指食品检样经过办理，在必定条件下培育后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。菌落总数主要作为判断食品被污染程度的标记，也能够应用这一方法察看细菌在食品中生殖动向，以便对被检样品进行卫生学评论时供给依照。每种细菌都有它必定的生理特征，培育时应用不一样的营养条件及其余生理条件（如温度、培育时间、pH、需氧性质等）去知足其要求才能将各样细菌都培育出来。但在实质工作中，一般都只用一种常用的方法去作。细菌菌落总数的测定，所得结果，只包含一君能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌
2、的菌落总数。三、实验资料（1）培育箱361（2）恒温水浴461（3）天平。（ 4）可调式电炉。（ 5）吸管1.0ml、10.0ml,标有0.1ml单位刻度。（ 6）广口瓶500ml，有盖。（ 7）玻璃珠直径5mm。（ 8）平皿皿底直径9.0cm。1/4（ 9）试管18200mm。（ 10）酒精灯。（ 11）试管架。（ 12）研钵。（ 13）灭菌刀和剪刀。（ 14）灭菌镊子。（ 15）酒精棉球。（ 16）玻璃蜡笔。（ 17）营养琼脂培育基。（ 18）灭菌生理盐水、分装于试管中，每管9.0ml。（ 19）食品检样。四、查验程序（图9-1）五、方法步骤（一）查验稀释和培育1、以无菌操作，将检样25g
3、（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适当玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10 的均匀稀释液。2、用1.0ml灭菌吸管汲取1：10 稀释液1.0ml，沿管壁渐渐注入含有2/49.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要涉及管内液面），振摇试管混淆均匀，作成1：100 的稀释液。3、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，这样每递加稀释一次，即换1支1.0ml吸管。4、依据食品卫生要求或对标本污染程度的预计，选择2-3个适合稀释度，分别作10倍递加稀释的同时，即以汲取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。5、稀
4、释液移入平皿后应实时将凉至46营养琼脂（可放于461水浴保温）注入平皿约15ml，并挪动平皿使混淆均匀。同时将营养琼脂培育基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白比较。6、待稀释液入平皿后，翻转平板，置361温箱内培育242h（肉、水产品、乳和蛋品为482h）拿出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。（二）计算方法1、平板菌落数的选择选用菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板应采纳两上平板的均匀数，此中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采纳，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落可计算半个平板后乘以代表全皿菌落数
5、。3/42、稀释度的选择（1）应选择均匀菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（表9-1例1）。（ 2）如有两个稀释度，其生长的菌落数在30-300之间，则视两者之比方何来决定。若其比值小于2，应报告其均匀数，若大于2，则报告此中较小的数字（表9-1例2及3）。（ 3）若全部稀释度的均匀菌落数均大于300，则应按稀释度最高的均匀菌落数乘以稀释倍数报告之（表9-1例4）。（ 4）若全部稀释度的均匀菌落数均小于30则应以稀释度最低的均匀菌落数乘以黧度倍数报告之（表9-1例5）。（ 5）若全部稀释度均无菌落生长，则以小于1（1）乘以最低稀释倍数报告之（表9-1例6）。（ 6）若全部黧度
6、的均匀菌落数没法不在30-300之间，此中一部分大于300，而另一部分则小于30，则以最靠近30或300的均匀菌落数乘以稀释倍数报告之（表9-1例7）。3、菌落数的报告菌落数在100之内时，按其实有数报告，小于100时采纳二位有效数字，在二位有效数字后边的数值，以四舍五入方法来计算，为了缩短数字后边的零数也可用10的指数来表示（表9-1“报告方式”栏）。六、实验作业1、食品中检出的菌落数能否代表该食品上污染的全部细菌数？为何？2、为何菌落总数测定用的营养琼脂培育基在使用前要保持在461的温度？3、为使平板菌落计数正确需要掌握哪几个重点？并说明原因。4/4内容总结（1）实验九菌落总数的测定一、目
7、的要修业习掌握菌落总数测定的基来源理和方法，认识食品上微生物的散布和生殖动向（2）菌落总数主要作为判断食品被污染程度的标记，也能够应用这一方法察看细菌在食品中生殖动向，以便对被检样品进行卫生学评论时供给依照（3）每种细菌都有它必定的生理特征，培育时应用不一样的营养条件及其余生理条件（如温度、培育时间、pH、需氧性质等）去知足其要求才能将各样细菌都培育出来（4）7）玻璃珠直径5mm内容总结（1）实验九菌落总数的测定一、目的要修业习掌握菌落总数测定的基来源理和方法，认识食品上微生物的散布和生殖动向（2）菌落总数主要作为判断食品被污染程度的标记，也能够应用这一方法察看细菌在食品中生殖动向，以便对被检样品进行卫生学评论时供给依照（3）每种细菌都有它必定的生理特征，培育时应用不一样的营养条件及其余生理条件（如温度、培育时间、pH、需氧性质等）去知足其要求才能将各样细菌都培育出来（4）7）玻璃珠直径5mm
