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1、优选文档扫描电镜样品的准备悬浮培养的细胞、细菌、血细胞、精子等；细胞使用PBS或无血清培养基离心漂洗12次以去除血清，离心转速依照不同样离心计、不同样样品自定，总时间控制在5min内；细胞团依照预设浓度在合适2.5%戊二醛吹悬，滴加在起初置入青霉素小瓶中的托盘，4静置沉降23天，在托盘周围加入PBS，以防范样品干燥。贴壁培养的细胞：在培养皿中起初加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上；PBS或无需请培养基漂洗后，放置在培养板室温固定1h，43h，注意放置干燥，自行转入青霉素小瓶中，加满PBS送检。SEM标本办理必定使用玻璃容器，需明确所用盖玻片尺寸可以放入青霉素瓶。组织取材样品观察表面可达810mm
2、2,高度小于5mm左右；样品表面在固定前必定干净：使用生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白、粘液等。可以明确表记标本的观察面。消化道、呼吸道、血管、生殖器官、泌尿等官腔内表面，特别要注意先冲洗再固定。如需要观察脏器内结构，应依照不同样的实验目的，决定目的脏器可否需要灌注冲洗；固定2.5%戊二醛吞没标本，室温1h，4固定3h以上，换PBS送检。附：2.5%戊二醛的配制41/4Step1:0.2M磷酸缓冲液的配制：-磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O）2.6xx磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29xx双蒸馏水加至500毫升pH调至7.4Step2:戊二醛固定液的配制：-25
3、%戊二醛1ml双蒸馏水4ml0.2mol/L磷酸缓冲液5ml戊二醛最后浓度2.5%pH值7.3-2/47.4透射电镜样品的制备一、培养细胞本方法适用于贴壁、悬浮培养的细胞；细菌；精子；血细胞等。1.细胞数量：106或6孔板一孔的细胞达到生长面积的80%或以上。2.离心收集：消化或用细胞刮刮下细胞。如细胞状态一般或飘扬物很多，建议更换新培养基；如观察自噬，建议刮下细胞。3.离心速度、时间依照不同样离心计、不同样样本自行定义，时间在5min内；4.细胞团大小：细胞最厚处约0.51.5mm,也许参照1元硬币的厚度；5.细胞离心成团后去除上清，加2.5%电镜用戊二醛500l固定，切勿吹悬，室温1h，4
4、3h后，去除戊二醛加满PBS后4放置或送检。注意：固定细胞不需要吹悬，细胞不宜过多，过多会以致固定液无法迅速浸透终究部细胞；二、生物组织迅速剪下/切下相应地址，在3/42.5%戊二醛中，依照不同样组织和实验目的，用刀片修成1mm3的小块或_mm22mm长条或薄片状。在2.5%戊二醛室温1h，43h，去除戊二醛加满PBS，4放置或送检。标本固准时，尽量修饰成合适的形状，对于需要定位的标本，走开实验室者后比较难以确认所需要的地址。使用2ml圆底或尖底的EP管，勿用500l以下的EP管。块状标本基本包括的组织种类：脑、肾、肝、肺、心肌；长条状、薄片状标本基本包括：骨骼肌、圆滑肌：肌纤维方向与标本长轴平行或垂直（送样时说明方向）皮肤、毛囊：皮肤角质层与长轴平行；神经、直径在2mm内的小血管：其长轴与标本块长轴平行的长条消化道、大血管：长条片状，一侧是上皮、内皮细胞面，或依照目的去除无用的分层脑皮质、海马、耳蜗等：拥有方向性或需横切或纵切面或需要组织中某一特定地址的标本；详尽到某些组织，可能会有不同样的要求，如观察海马CA1区，建议标本取片状或近似三角形的片状或梯形（比较好）。直观的说，小块直径约为1元硬币厚度；长度的短轴约为1元硬币的厚度；详尽大小依照标本会有相应的调整，但都已小尺寸为佳。4/4
