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1、绪论*细胞生物学:从细胞的整体、超微、分子水平上研究细胞的结构和生命活动规律的科学。*细胞:一切生物的基本结构单位,它是由膜围成的、能独立进行生长、繁殖的、最小的原生质团。细胞生物学的研究方法*分辨率:显微镜能将近邻的2个质点分辨清楚的能力。其大小取决于光波的()和镜口率(N.A.),通常用相邻两点间的距离表示。 0.61公式:D=- N.A.*冰冻蚀刻:又叫冰冻断裂,是为配合透射电镜观察而设计的一种标本制作技术。是研究生物膜内部结构的一种有用技术。制作过程:将标本超低温冰冻。 冷刀将标本冲断。 蚀刻,真空中升华暴露断裂面。 喷镀,向断裂面上喷上一层蒸汽碳、铂。 溶掉组织,得复膜。 观察。*细
2、胞化学染色:利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理,从而得以对某种成分进行研究和分析。可以在保持细胞结构的基础上,定性、定量、定位研究。常用显色法:蛋白质、核酸、酶、糖类、脂类的化学显色法。*免疫细胞化学:根据免疫学原理,利用抗体同特定抗原专一结合,对抗原进行定位测定的技术。*放射自显影术:放射性同位素发射出各种射线具有使照相乳胶中的溴化银晶体还原(感光)的性能。利用放射性物质,使照相乳胶膜感光,再经显影,以显示该物质自身的存在部位的技术。【定位】*微粒体:真核细胞,细胞匀浆在差速离心过程中破裂所分离出的一种膜泡成分。它是由内膜系统中各组分的膜断片,自然卷曲而成。例如:内质网、高尔基
3、的膜等。*分子杂交技术:在研究DNA复性变化基础上发展起来的技术。原理:具互补核苷酸序列的两条单链核苷酸片段,在适当条件下,可由H键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA杂交的双链分子。用途:测单链分子核苷酸序列间是否有互补序列。*原位杂交:在不破坏细胞或细胞器情况下,用带有标记的核酸分子做核酸探针,测特定核苷酸序列在染色体上的精确位置的技术。需切片。其标记物有:荧光素、同位素、生物素。*PCR技术:根据DNA 的变性与复性和分子杂交技术的原理设计出的,目的是将极微量的DNA大量扩增的技术。又叫聚合酶链式反应。用到的聚合酶叫TaqDNA聚合酶。*膜电位:细胞的质膜内外两侧,由
4、于阳离子浓度不同而形成了浓度梯度差,通常外高内低,从而造成膜两侧一定的电位差,这一电位差叫。*细胞电泳:细胞表面带有许多荷电基团,其总静电荷为负值,因而细胞在悬液中总向电场正极移动,细胞在外加电场作用下发生泳动的现象叫。引起细胞电泳的电位值叫电位。*细胞培养方式:群体培养、克隆培养、转鼓培养。*群体培养:是细胞培养方式的一种。将还有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中,让细胞贴壁生长,汇合后形成均匀的单细胞层的培养方式。*克隆培养:是细胞培养方式的一种。将高度稀释的游离细胞悬液加入培养瓶中,各个细胞贴壁,彼此距离较远,经生长增殖,每一个细胞形成一个细胞集落的培养方式。此集落叫克隆。*单层细胞:细胞悬
5、液中,分散呈圆球形的细胞一经贴壁,就迅速铺展并开始有丝分裂,形成致密的细胞单层。这种细胞叫。*非细胞体系:来源于细胞,而不具有完整细胞结构,但由包含了进行正常生物学反应所需的物质(如供能系统和酶反应体系等)组成的体系。用于研究DNA复制、RNA转录、Pr翻译、Golgi膜泡运输、细胞核装配等。*接触抑制:培养中的正常细胞表现有单层生长的属性。当分散的分裂细胞达到相互汇合接触后,即停止分裂和生长的现象。肿瘤细胞接触抑制现象丧失。 / *细胞库:*cell membrane:细胞膜(cell membrane)又称细胞质膜(plasma membrane)。细胞表面的一层薄膜。有时称为细胞外膜或原
6、生质膜。细胞膜的化学组成基本相同,主要由脂类、蛋白质和糖类组成。各成分含量分别约为50%、40%、2%10%。此外,细胞膜中还含有少量水分、无机盐与金属离子等。*生物膜 :把细胞所有膜相结构称为生物膜。*脂质体:是根据磷脂分子可在水相中形成稳定的脂双层膜的而制备的人工膜。*双型性分子(兼性分子):像磷子分子即含亲水性的头部、又含疏水性的尾部,这样的分子叫双性分子。*内在蛋白:分布于磷脂双分子层之间,以疏水氨基酸与磷脂分子的疏水尾部结合,结合力较强。只有用去垢剂处理,使膜崩解后,才能将它们分离出来。*外周蛋白:为水溶性蛋白,靠离子键或其它弱键与膜表面的蛋白质分子或脂分子极性头部非共价结合,易分离
7、。*细胞外被:细胞外被(cell coat):又称糖萼,细胞膜外表面覆盖的一层粘多糖物质,实际上是细胞表面与质膜中的蛋白或脂类分子共价结合的寡糖链,是膜正常的结构组分,对膜蛋白起保护作用,在细胞识别中起重要作用。*细胞连接:细胞连接是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞膜相互联系、协同作用的重要组织方式,在结构上常包括质膜下、质膜及质膜外细胞间几个部分,对于维持组织的完整性非常重要,有的还具有细胞通讯作用。*紧密连接:紧密连接是封闭连接的主要形式,普遍存在于脊椎动物体表及体内各种腔道和腺体上皮细胞之间。是指相邻细胞质膜直接紧密地连接在一起,能阻止溶液中的分子特别是大分子沿着细胞间的缝隙渗入体内,
8、维持细胞一个稳定的内环境。 *桥粒:又称点状桥粒,位于粘合带下方。是细胞间形成的钮扣式的连接结构,跨膜蛋白(钙粘素)通过附着蛋白(致密斑)与中间纤维相联系,提供细胞内中间纤维的锚定位点。中间纤维横贯细胞,形成网状结构,同时还通过桥粒与相邻细胞连成一体,形成整体网络,起支持和抵抗外界压力与张力的作用。*膜骨架:细胞质膜下与膜蛋白相连的、由纤维蛋白组成的网架结构,它参与细胞质膜形状的维持,协助质膜完成多种生理功能。11、血影:红细胞经低渗处理后,质膜破裂,释放出血红蛋白和其他胞内可溶性蛋白后剩下的结构,是研究质膜的结构及其与膜骨架的关系的理想材料。*间隙连接:是动物细胞间最普遍的细胞连接,是在相互
9、接触的细胞之间建立的有孔道的连接结构,允许无机离子及水溶性小分子物质从中通过,从而沟通细胞达到代谢与功能的统一。*细胞粘附分子:细胞粘附分子是细胞表面分子,多为糖蛋白,是一类介导细胞之间、细胞与细胞外基质之间粘附作用的膜表面糖蛋白。*细胞外基质:分布于细胞外空间,由细胞分泌的蛋白和多糖所构成的结构精细而错综复杂的网络结构,它不仅参与组织结构的维持,而且对细胞的存活、形态、功能、代谢、增殖、分化、迁移等基本生命活动具有全方位的影响。 细胞外基质成分可以借助其细胞表面的特异性受体向细胞发出信号,通过细胞骨架或各种信号转导途径将信号传导至细胞质,乃至细胞核,影响基因的表达及细胞的活动。*通道蛋白:是
10、衡跨质膜的亲水性通道,允许适当大小的离子顺浓度梯度通过,故又称离子通道。有些通道蛋白形成的通道通常处于开放状态,如钾泄漏通道,允许钾离子不断外流。有些通道蛋白平时处于关闭状态,即“门”不是连续开放的,仅在特定刺激下才打开,而且是瞬时开放瞬时关闭,在几毫秒的时间里,一些离子、代谢物或其他溶质顺着浓度梯度自由扩散通过细胞膜,这类通道蛋白又称为门通道。*载体蛋白(通透酶):载体蛋白是多回旋折叠的跨膜蛋白质,它与被传递的分子特异结合使其越过质膜。其机制是载体蛋白分子的构象可逆地变化,与被转运分子的亲和力随之改变而将分子传递过去。*主动运输:主动运输是指物质逆浓度梯度,在载体的协助下,在能量的作用下运进
11、或运出细胞膜的过程。Na+、K+和Ca2+等离子,都不能自由地通过磷脂双分子层,它们从低浓度一侧运输到高浓度一侧,需要载体蛋白的协助,同时还需要消耗细胞内化学反应所释放的能量。*协助运输:被选择吸收的物质从高浓度一侧通过细胞膜到达低浓度一侧,但需要细胞膜上的一种物质载体蛋白的协助才能完成扩散过程,称为协助运输。协助运输是一种被动运输,由于流动镶嵌模型决定了蛋白质会运动,所以不需要细胞提供代谢能量,因为物质是顺着浓度梯度运输的,例如葡萄糖进入红细胞。*ABC超家族:ATP结合盒式蛋白(ATP-bindingcassette transporter,ABC)是古老而庞大的家族,是一类ATP驱动泵,
12、由两个跨膜结构域及两个细胞质ATP结合域组成。ABC成员之间具有很多共性,如相似的物质转运功能和结构。但随着基因的不断进化,成员之间又产生许多不同点,表现在家族特征的各个方面,如结构、功能、器官分布与亚细胞定位等。广泛分布在从细菌到人类各种生物体中。每种ABC蛋白对于单一底物或相关底物的基因是有特异性的。这些底物或许是离子、单糖、氨基酸、磷脂、肽、多糖甚至是蛋白质。*胞饮:除固体颗粒外,多种细胞,如肠壁细胞以及一些原生生物,如变形虫等,还能吞入液体。吞入的方法是细胞膜向内褶入,形成细长的管,管内充满外界液体。管从末端断开而成游离的含有液体的小泡。这种吞入液体的过程称为胞饮作用(pinocyto
13、sis)。*质膜微囊:是一种特殊类型的脂筏,是哺乳动物细胞质膜上呈细颈烧瓶状的内陷结构。通常直径约50-100nm,富含胆固醇、鞘磷脂(sphingomyelin)和鞘糖脂(glycosphingolipids),并形成一个去垢剂不溶性的膜区域,以存在caveolin蛋白分子为特征。质膜微囊大量存在于内皮细胞、脂肪细胞、血管平滑肌细胞、纤维母细胞和肺上皮细胞。随着分子生物学研究的进展,发现质膜微囊参与许多细胞生命活动,例如细胞内吞(endocytosis)、胆固醇运输、细胞膜组装、信号传导和肿瘤生成,并参与许多致病性细菌和病毒1的内吞过程。*网格蛋白(clathrin):是一种进化上高度保守的
14、蛋白质,由分子量为180kDa的重链和分子量为35 40kDa的轻链组成二聚体,三个二聚体形成包被的基本结构单位三联体骨架(triskelion),称为三腿蛋白(three-legged protein)。有两种类型的轻链:链和链,二者的氨基酸有60%是相同的,但还不知道它们在功能上有什么差别。许多三腿复合物再组装成六边形或五边形网格结构,即包被亚基,然后由这些网格蛋白亚基组装成披网格蛋白小泡。*协同运输:协同运输(cotransport)是一类靠间接提供能量完成的主动运输方式。物质跨膜运动所需要的能量来自膜两侧离子的电化学浓度梯度,而维持这种电化学势的是钠钾泵或质子泵。动物细胞中常常利用膜两
15、侧Na+浓度梯度来驱动,植物细胞和细菌常利用H+浓度梯度来驱动。有正向、反向协同运输(记住相关的例子!)*V型质子泵:存在于动物细胞溶酶体膜和植物细胞液胞膜,用来转运H+过程不形成磷酸化中间体,从而保持细胞质基质内中性PH和细胞器内的酸性PH。*P型质子泵:存在于真核生物的细胞膜,其在运转时的特点是:转运H+过程涉及磷酸化和去磷酸化。*微管(MT):广泛存在于真核细胞中。细胞质中,由微管蛋白组装成的一种细长而具有一定刚性的圆管状结构。内径15nm;外径24-26nm;壁厚5nm。中空。*踏车运动:在一定条件下,微管/微丝一端发生装配,使微管/微丝延长;另一端发生去装配,使微管/微丝缩短的现象。但实际上正极装配速度快于负极装配速度。(= =)*中心粒:光镜下,存在于动物细胞的中心体的2个深染颗粒。是由9组小管围成的圆筒状细胞器,每组含3条微管,由内向外分别编号为A、B、C亚丝,9组三联体按一定角度规则排列成风车状。3亚丝中,A亚丝为13条原丝组成的完全微管,B、C为不完全微管。2颗中心粒在一端相互垂直。分裂间期位于核一侧;分裂期逐渐移向两极。与组建有丝分裂器有关。*肌节:肌原纤维中,2条相邻Z线间的结构,是肌原纤维的基本结构单位。包括1条暗带,及其两侧各1/2的明带。*应力纤维:真核细胞中,紧邻质膜下方的微丝平行排列成束,这种微丝束叫