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1、乳腺癌中血管内皮生长因子受体KDR的表达及其意义 作者：董伟 刘友富 张加满 吴志宏 宋斌 宋景春 【摘要】 目的 研究乳腺癌中血管内皮生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor2, VEGFR2）KDR的表达情况及其与微血管密度（microvessel density，MVD）关系。方法 对98例乳腺癌患者的病理标本应用CD34， KDR分别进行免疫组化染色，双盲法计数热点内血管测定MVD，并进行统计学分析。结果 乳腺癌KDR在血管周围的肿瘤细胞质呈较强阳性表达，在部分血管内皮细胞质内表达呈弱阳性，KDR表达与MVD有统计学意义（P&
2、lt;0.05）。结论 KDR在乳腺癌细胞的高度表达可能参与乳腺癌的发病机制，为乳腺癌的治疗提供新的思路。 【关键词】 乳腺癌 血管内皮生长因子受体 微血管密度【Abstract】 Objective To explore the expression of vascular endothelial growth factor receptor KDR , and the relation between KDR and microvessel density(MVD). Methods CD34 and KDR were assayed with immunohistochemistry i
3、n the specimen from 98 breast cancer patients ,double blind method was carried out to assay the MVD with hot spots and results were analyzed statistically. Results KDR was strongly positive in breast cancer cells around vessels , and weekly positive in vascular smooth muscle cells. Conclusions High
4、expression of KDR may be related to breast cancer.【Key words】 breast cancer vascular endothelial growth factor receptor microvessel density(MVD)实体肿瘤的生长和转移依赖于肿瘤间质中血管的新生，许多血管生成因子在肿瘤中均有表达,介导血管新生。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是其中效力最强的因子之一，它可直接或间接地参与血管新生的每一个过程，可诱导内皮细胞短暂的钙浓度升高、形态改变、细胞分
5、裂及细胞运动，影响内皮细胞的基因表达，降解基底膜，促进血管生成，增加血管的通透性。目前已证明，KDR是VEGF型受体，亲和力较高，具有受体型酪氨酸激酶活性，主要表达在内皮细胞。VEGF是通过作用于细胞上的特异性受体而发挥其生物学活性的，在脑胶质瘤、脑膜瘤等多种肿瘤组织中的表达上调。一般认为，可特异性地表达于肿瘤的血管内皮细胞，但有关其在乳腺癌中的表达目前尚无定论。本文旨在研究KDR在乳腺癌中表达情况。1 材料和方法1.1 标本来源为1990年6月至2005年4月期间，本院病理科保存的乳腺癌蜡块标本，均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片(厚4)。病例共98例，患者年龄2572岁(平均4
6、7岁)，术前均未接受过化疗或放疗；淋巴结转移56例，无淋巴结转移42例；肿瘤直径112 cm。仪器、试剂：兔抗人KDR蛋白多克隆抗体为美国Santa Craz Biotechnology Inc产品，兔抗人CD34多克隆抗体、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2 方法(1)免疫组化实验：切片常规脱蜡，30mL/L H2O2 10 min灭活内源性过氧化物酶，微波修复，正常山羊血清封闭，抗体工作浓度1100，滴加KDR多克隆抗体 4过夜，依次滴加生物素化羊抗兔IgG、SABC、DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片；以代替第1抗体作为阴性对照，阳性对照采用已知
7、的阳性的标本切片，胞核或胞浆染成棕黄色为阳性。(2)图像分析：用多功能真彩色病理分析系统，分别测定肿瘤细胞和血管内皮细胞质表达的平均吸光度值，取其均值作为各自KDR蛋白表达的相对含量。(3)MVD测定：按Weidner方法，低倍镜在肿瘤中心区寻找热点，400倍镜下由2位病理科医生按双盲法分别计数热点内血管。染成棕色的血管内皮细胞或血管内皮细胞簇，只要它们和临近的微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织分开，就视为一个微血管，即使是同一血管的头和尾正巧在同一切面上，也计为2个微血管。结果以单个400倍视野下最多的血管数目表示。1.3 统计学分析全部数据用 SPSS 11.0统计软件，对各组数据进行t检验和
8、2检验。2 结果2.1 乳腺癌组织中KDR的表达及图像分析乳腺癌KDR在血管周围的肿瘤细胞质呈较强阳性表达，在部分血管内皮细胞质内表达呈弱阳性（图1）。图像分析结果肿瘤细胞表达灰度值为17412，血管内皮细胞表达灰度值为1578。此结果经统计学分析，显示KDR在肿瘤细胞与血管内皮细胞中的表达差别有统计学意义(P<0.05)。所有98例乳腺癌标本中，KDR表达阳性75例，阳性率为76.5%。2.2 乳腺癌组织中的微血管密度乳腺癌组织的毛细血管、小静脉和小动脉的CD34染色阳性，高表达区多出现在肿瘤的边缘。98例乳腺癌标本在400倍镜下MVD计数结果为363(426)。2.3 乳腺癌组织中K
9、DR与MVD表达的关系在75例KDR表达阳性组中，MV计数(447)；23例KDR表达阴性组中，MV计数(356)，两组之间差异有显著性(P<0.05)，说明KDR表达与肿瘤血管密度相关。3 讨论 KDR是VEGF主要受体之一，酪氨酸激酶第亚型, 胞外含7个免疫球蛋白区域。有报道表明,胞外Ig样domain2属VEGF结合区，而domain1和domain3对受体与配基的结合起一定作用，domain4能维持受体的二聚体化。目前已经公认，VEGF对内皮细胞的增殖、分化作用是由KDR介导的。KDR介导的信号转导的主要过程是VEGF结合到KDR胞外区的Ig结构域上，引起KDR胞内激酶区特定酪氨
10、酸残基的交叉磷酸化而活化。活化的受体进而被含有2结构域的适配分子（adaptor）如Grb2等结合，通过一系列生化级联反应，活化MAPK，MAPK作为转录因子可转运至细胞核内，启动特定基因的表达，完成VEGF相应的促增殖作用。在脑胶质瘤、脑膜瘤等多种肿瘤组织中的表达上调。一般认为,可特异性地表达于肿瘤的血管内皮细胞。 本文证实KDR可在乳腺癌组织中血管周围的肿瘤细胞质呈较强阳性表达，在部分血管内皮细胞质内表达呈弱阳性，这与以往VEGF在乳腺癌组织中表达情况的研究基本一致。VEGF可诱导内皮细胞分裂及细胞运动，影响内皮细胞的基因表达，降解基底膜，促进血管生成，增加血管的通透性，是乳腺癌迅速生长、
11、转移、恶性度高的机制之一。本结果提示KDR则是VEGF在乳腺癌形成发展中的重要步骤。KDR在肿瘤细胞中的表达显著强于血管内皮细胞，提示除了诱导血管形成外，可能还具有其他作用，尚需进一步实验验证。 此外，KDR表达阳性组的MVD明显高于VEGF表达阴性组, 两者之间差异有显著性。KDR表达阳性者，其MVD值也高，显示两者成正相关。这提示VEGF可能通过KDR促进肿瘤血管生长，增加血管通透性，影响乳腺癌的生物学特性。同时，MVD已经实验证实与乳腺癌的恶性程度有关，并作为乳腺癌预后的指标，；KDR与MVD表达的平行性，提示KDR也可对判定乳腺癌的预后提供参考。 肿瘤细胞和血管是密切相关的系统，内皮细
12、胞可能由来自肿瘤细胞所发出的信号激发，从休眠期转至快速生长期，血管大量生成，为肿瘤细胞的生成、转移提供物质基础和途径。当对肿瘤的血管生成抑制时，肿瘤的生长受到抑制，肿瘤的转移机会也随之降低，从而达到治疗肿瘤、提高肿瘤患者生存率的目的。因此，通过抑制KDR的表达来降低VEGF的作用，抑制肿瘤血管增殖，也为临床治疗乳腺癌提供了思路。【参考文献】 1 Ferrara N, Gerber HP. The role of vascular endothelial growth factor in angiogenesis. Acta Haematol， 2001，106(4):148156. 2 Fak
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