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1、资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载苯酚硫酸法测总糖地点：时间：说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与 义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时 请详细阅读内容苯酚-硫酸法苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖 醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。试剂6%苯酚:先配置80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20g水使之溶解，可置 冰箱中避光长期储存。再配置6%苯酚：取75ul的80%苯酚于烧杯中，加入960ul水（每次测定均 需现配），测定的时候就用6%的苯酚来
2、测！浓硫酸操作1. 制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量 瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1. 8ml, 各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1. 0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室 温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横 坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。2. 样品含量测定：吸取2.0ml样品，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放 置30分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖 含量。可能有以下问
3、题需要注意：1。苯酚是否重蒸、其溶液浓度、是否现配现用2。加入硫酸后是否加热、显色时间的确定3。阁下所选波长：这个最为重要，因为己糖及其甲基化衍生物在490nm下 有最大吸收峰，而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。如果阁下的多糖样品不是单一品而是数种混合（纯化也难一达到100%纯），则 波长一定要扫描过再做4。加浓硫酸前要摇匀，加之后也要摇匀。苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖 醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。试剂
4、1. 浓硫酸：分析纯，95.5%2. 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置 冰箱中避光长期储存。3. 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）4. 标准葡聚糖（Dextran, HYPERLINK http:/ t _blank 瑞典 Pharmacia）, 或分析纯葡萄糖。5. 15%三氯乙酸（15%TCA）： 15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中 长期储存。6. 5%三氯乙酸（5%TCA）： 25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中 长期储存。7. 6mol/L氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。8. 6mol/L 盐酸操
5、作1. 制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量 瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1. 8ml, 各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1. 0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室 温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横 坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。2. 样品含量测定： 取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5%TCA溶液研 磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液，重 复3次。最后一次将残渣一起到入离心管
6、。注意：总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。 离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次 各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。(测 肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。) 水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L盐酸之后摇匀，在96C水浴锅 中水浴2小时。 定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L氢氧化钠摇匀。 定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后 加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测 光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。注意(1) 此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线， 颜色持久。(2) 制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校 正吓数。(3) 对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲 线的校正系数加以校正计算。(4) 测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.10.3之 间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大 于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
