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1、实验名称：茶多酚的提取工艺试验实验目的及要求：1.了解茶多酚的性质和用途。2.了解植物天然产物的常规提取及精制方法。3.通过本实验的具体操作，掌握并熟悉茶多酚的提取与精制的方法及其操作原理和步骤。4.掌握提取精制过程中茶多酚的分析检测方法。实验原理：茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，含量约占茶叶干重量的2030。茶多酚可以消除超氧阴离子和过氧化氢自由基，同时具有抑菌、杀菌，有效降低大肠对胆固醇的吸收，增强机体免疫能力等功能。目前，茶多酚被广泛的用作食品、饮料、药品和化妆品的天然添加成分。（离子沉淀法）茶多酚易溶于热水，与一些金属离子形成络合物，并在一定pH值下溶解度很低。形成的金属离子络合物溶于
2、酸溶液后，茶多酚再次转变成游离状态，再用对茶多酚有更好选择性的溶剂进行萃取、浓缩和干燥，即可得到茶多酚的纯品。实验仪器介绍及基本操作：电动搅拌器、离心机、pH试纸、真空干燥箱、抽虑瓶、旋转蒸发仪、真空泵、天平、紫外分光光度计、容量瓶、烧杯、量筒等。实验试剂及材料：氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硫酸铝、盐酸、亚硫酸氢钠、乙酸乙酯、维生素C（抗坏血酸）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、硫酸、绿茶等实验内容及步骤：1 浸提 称取一定重量过20目的茶叶末，加入其重量15-25倍的60-80的热水，搅拌下恒温浸提20min-30min,过滤得到茶叶浸提液。即：以料液比:1/15、1/20、1/
3、25，提取温度:60、70、80，提取时间:20min、25min、30min为3因子3水平进行正交实验，然后对实验结果进行极差分析，选出最优组合，做验证性实验，如若符合最佳结果，进行下面的实验 1（料液比）2（提取温度）3（提取时间）因素11:15 60 20min因素21:20 70 25min 因素31:25 80 30min测浸提液体积，并取样分析浸提液中茶多酚的含量，计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。2盐析 加氯化钠于茶叶浸提液中，质量分数为2-6，静置0.5-1.5h后过滤（可用抽滤或者离心的方式）。3沉淀 在上述滤液中加入茶叶重量2%-5%的亚硫酸氢钠，然后加入茶叶重量1
4、5%-25%的硫酸铝饱和溶液，加热至上述最优组合温度，用10%-20%的碳酸氢钠溶液在快速搅拌下调节pH至5-6，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段时间后过滤，最后用等体积最有温度热水洗涤沉淀三次。4酸溶 将沉淀在快速搅拌下放入到茶叶重量1-3倍的pH=2.5-4.5的盐酸水溶液溶解沉淀，控制酸转溶液的pH=2.5-4.5，酸转时间10min-50min,少量胶状沉淀经离心分离出去。即： 以酸浓度：pH=2.5，pH=3.5，pH=4.5，料酸比：1:1,1:2,1:3，酸转时间：10min,30min,50min为3因子3水平进行正交实验，在最优条件下测酸转溶液体积然后对实验结果进行极差分
5、析，选出最优组合。 1（酸浓度）2（料酸比）3（酸转时间）因素1pH=2.51:1 10min因素2 pH=3.5 1:2 30min因素3 pH=4.5 1:3 50min测酸转溶液体积并取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量，计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。5萃取加入茶叶重量25的NaHSO3至酸转溶液中，然后用体积0.3-1.5倍的乙酸乙酯萃取15次，每次萃取时间2-10min，合并萃取液。测萃余相体积，并取样分析计算萃余相中茶多酚的总量，计算茶多酚的萃取率。6洗涤加入茶叶重量1-3的维生素C至萃取液体积0.4倍的水中，用柠檬酸调节水溶液的pH=2.5-3.0，等分成2份对乙
6、酸乙酯萃取液洗涤两次。7蒸发浓缩将洗涤后的乙酸乙酯相在5070下真空蒸发回收乙酸乙酯，待浓缩成膏状物时，加入膏状物2倍体积的无水乙醇洗涤挂在壁上的物料，继续浓缩成稠的膏状物。计算其中茶多酚的含量。提取过程中茶多酚的分析测定方法（定量）准确吸取待测溶液1ml，将其稀释125倍（稀释成15倍），再从稀释液中准确吸取1ml，注入25ml的容量瓶中，加水4ml和酒石酸亚铁溶液5ml，充分混合，再加pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液至刻度，用1cm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白液作参比，测定吸光度。计算公式： 茶多酚（g/ml）=1.957AX/500 A:吸光度 X:稀释倍数。1）酒石酸亚铁溶液1g
7、硫酸亚铁和5g酒石酸钾钠用水溶解并定容至至1L，放置过夜后使用。2）pH=7.5的磷酸二氢钾缓冲液A液：称取磷酸氢二纳23.877g,溶解并定容至至1L；B液：称取经110度烘干2h的磷酸二氢钾9.078g，加水溶解并定容至至1LA液85ml和B液15ml混匀即可。计算项目：1)浸提液中茶多酚的总量及茶多酚的浸提率计算浸提液中茶多酚的总量（g）=浸提液中茶多酚的含量（g/ml）浸提液体积（ml）茶多酚的浸提率=浸提液中茶多酚的总量（g）原料茶叶末中茶多酚的总量（g） 100%2)经过盐析、沉淀及酸溶后茶多酚的总量和回收率计算酸转溶液中茶多酚的总量（g）=酸转溶液中茶多酚的含量（g/ml）酸转溶
8、液的体积（ml）酸转溶液中茶多酚的回收率=酸转溶液中茶多酚的总量（g）/浸提液中茶多酚的总量（g）100%3)萃余相中茶多酚的总量和茶多酚的萃取率计算 萃余相中茶多酚的总量（g）=萃余相中茶多酚的含量（g/ml）萃余相溶液的体积（ml） 茶多酚的萃取率=100%酸转溶液中茶多酚的总量（g）-萃余相中茶多酚的总量（g） /酸转溶液中茶多酚的总量（g）4）茶多酚的最终得率计算 100%酸转溶液中茶多酚的总量（g）-萃余相中茶多酚的总量（g）/原料茶叶的重量实验要点及难点：1. 通过本实验的具体操作，掌握并熟悉茶多酚的提取与精制的方法及其操作原理和步骤。2. 掌握提取精制过程中茶多酚的分析检测方法。实验注意事项：1.茶多酚易氧化，分离过程中注意避免高温，过酸或过碱并尽量缩短提取时间。2.沉淀完全后应尽快抽提滤出沉淀，酸溶过程一定要充分，控制好溶液pH。思考题：通过对本工艺的实验结果进行分析，讨论分析哪些因素影响茶多酚产品的产率？怎样影响的？应如何控制？实验参考资料：宋航.制药工程专业实验. 北京：化学工业出版社.2005：149-156
