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1、梅毒螺旋体抗体凝集实验(TPPA)操作程序梅毒螺旋体抗体凝集实验(TPPA）操作程序1标本种类及收集要求标本种类：血清2设备和材料2.1设备：旋转振荡仪、精确移液器2。2材料：梅毒螺旋体确认试剂盒。来源：富士瑞比欧梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒或者类似产品。有效期内。2。3 试剂盒： 按说明书要求调制致敏粒子和未致敏粒子悬液。3原理将梅毒螺旋体Nichols 株的精制菌体成分包被于明胶颗粒上，此种致敏颗粒与检样中的抗TP 抗体结合时可产生凝集反应.4试验步骤4.1 将诊断试剂盒平衡至室温4。2 按下述手工操作方法，迅速连贯地进行操作。定性试验只做4孔，半定量(测抗体滴度）试验做12孔。4.3 在反应
2、板第1孔中微量移液管取（100l）血清稀释液,第24孔每孔滴1滴（25l）。4。4 用微量移液管取待测血清25l加至第1孔中，然后再用微量加样器混匀后取25l至第2孔，依次稀释至第4孔（或12孔）。此时，第1孔待测血清为1:5倍稀释,第24孔分别为1:101:40（第12孔则为10240）.4.5 用试剂盒中的专用滴管在第3孔中滴加1滴（25l）未致敏粒子,在第4孔中滴加1滴（25l）致敏粒子.待测血清的最终稀释倍数第3孔为1:40，至第12孔为1：20480。4。6 平板在平板混合器上混合30s，加盖后置室温(1530）下水平静置2h(即使24h不影响结果判定）,用观察镜观察并记录结果. 4
3、.7 对照试验：每个试剂盒中的阳性对照血清都要与样品用相同的测定方法进行试验,阳性对照血清调制成抗体效价为1：320（最终稀释倍数）。5结果判断及报告5.1 判定标准：见下表反应图像判定粒子成纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形(）粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形(）粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围（+）产生均匀的凝集,凝集粒子在底部整体上呈膜状延展（+）5.2结果判定：阳性：第3孔（加未致敏粒子，待测血清最高稀释倍数为1:40）为（），第4孔（加致敏粒子，待测血清最高稀释倍数为1:80）为（)，判为阳性.如做12孔测定,则以出现()的最终稀释倍数为抗体滴
4、度.阴性：只要第4孔为（），即判为阴性。可疑:第3孔为（），第4孔为（）时判为可疑。6实验检测注意要点6.1 此类患者血清等样品中，可能存在HBV、HCV、HIV等病原体，因此,样品、用过的器具、废弃液体等除用次氯酸钠（有效浓度1000pm,浸泡1小时以上),戊二醛（2，浸泡1小时以上）进行消毒外，还要进行高压蒸汽灭菌及焚烧等处理。6。2 试剂盒中的试剂配制后仅限当天使用,如在28保存,7天内稳定.6.3 不同批号的试剂不可混用。6.4 结果为阳性或可疑时，应进行随访并结合临床综合考虑。结果可疑时还需要用其他方法(如FTAABS）复查。对未致敏粒子和致敏粒子均出现（）以上的样品,应参照试剂盒说明书作吸收试验后再复查。6.5定性测定时,如抗TP浓度过高，可能会因前带现象出现假阴性结果.
