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1、1 目的 规范Waters e2695液相色谱仪的操作规程，对的使用本仪器，保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周边环境的安全。2 合用范围 本指导书合用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。3 职责3.1操作人员按本规程操作仪器，对仪器进行平常维护，作使用登记。3.2保管人员负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期维护，保养。3.3科室负责人负责对仪器综合管理。4 仪器性能指标4.1.Alliance e2695系统4.1.1 泵/溶剂管理系统：互相独立控制的线性双柱塞驱动装置,双压力传感器反馈回路, 无脉动, 无需混合器和阻尼器。4.1.1.1溶剂数
2、：44.1.1.2流速范围：0.001-10.000ml/min, 以0.001ml为增量4.1.1.3流速精度：0.075%RSD4.1.1.4流速准确度：1.0%RSD4.1.1.5操作压力：0-6000psi(0-410bar) ，可设上 ,下限4.1.1.6混合范围：0.0100.0%，以 1% 增量 4.1.1.7梯度准确度： 0.5%，不随反压变化4.1.1.8梯度精度：0.15%，不随反压变化4.1.1.9压缩补偿：自动，连续4.1.1.10梯度曲线：多种梯度曲线: 线性, 凸线和凹线等11种4.1.1.11系统体积： 650L, 不随反压变化 4.1.2 自动进样器/样品管理系
3、统： 4.1.2.1样品盘数：120位,分5个样品盘,每个样品盘可放置24个2ml样品瓶4.1.2.2进样次数：每个样品可进样1到99次 4.1.2.3进样精度：0.5%RSD4.1.2.4样品污染度： 0.999 coefficient of deviation4.1.3 在线柱塞清洗装置： 可在线清洗柱塞杆，可防止因缓冲盐溶液结晶而导致的堵塞，延长密封圈的使用寿命。4.1.4 在线脱气装置：4.1.5柱温箱：4.1.5.1温度设定范围：室温至654.1.5.2温度稳定性：0.154.1.5.3柱容量：4根7.8X300柱4.2检测器：4.2.1 2489双波长紫外检测器双通道紫外检测器，可
4、进行双波长同时测定；最新专利梯形狭缝池设计，保证低噪音，高灵敏度，宽线性范围；Maxplot,Ratioplot优化灵敏度，检测共流出物杂质，可作简朴峰纯度鉴定。4.2.1.1波长范围：190-700nm4.2.1.2 灯：氘灯，具有灯优化软件,可以延长灯的使用寿命，可编程控制灯的开关4.2.1.3波长准确度：1.0nm4.2.1.4波长重现性：0.1nm4.2.1.5光谱带宽：5nm 4.2.1.6噪音：5 X 10-6AU4.2.1.7漂移：1 X 10-4AU/hr4.2.1.8线性范围： 5% at 2.5 AU 4.2.1.9流通池：池长10mm，池体积10ul4.2.1.10 采集
5、速率：80Hz5 操作规程5.1操作前准备 5.1.1色谱柱的检查与安装 一方面打开柱温箱门看是否是所需用的色谱柱，若不是则旋下色谱柱螺母，卸下色谱柱，立即用死堵堵上。取出所需色谱柱，两端用螺母旋紧，固定在卡槽上，注意色谱柱的方向，不能装反。5.1.2 溶剂的准备。5.1.2.1 甲醇或乙腈必须用HPLC纯，其他无机试剂也最佳用HPLC纯，且需通过0.45m滤膜溶剂过滤装置过滤。试剂的纯净非常重要。必须要采用超纯水，可以用哇哈哈纯净水替代。5.2 主机操作 5.2.1灌装及清洗系统5.2.1.1当真空脱气机第一次使用或当真空管是空的，或当改变溶剂，且当前溶剂与真空管中溶剂不相溶时，应当灌装清洗
6、系统。5.2.1.2假如使用易挥发的混合溶剂或改变溶剂时，若系统长时间关机（比如，隔夜）灌装系统推荐将泵的流速控制在高水平（3-5ml/min）。5.2.1.3使用注射器灌装系统（干灌装）：点击仪器面板上“Menu/status”按钮，选择“Direct Function”,然后点击“dry prime”选择欲灌装的通道并逆时针方向旋开灌装/排放阀，将专用注射器插入灌装/排放阀入口内，拉动注射器活塞吸入大约10毫升灌装液或直到管路中不在有气泡为止。灌装完毕后顺时针方向拧紧灌装/排放阀。5.2.1.4初次灌装系统时，使用干灌装并使用异丙醇、甲醇、乙醇作为灌装溶剂。5.2.1.5置换管路中的流动相
7、，使用湿灌装：点击仪器面板“Menu/status”按钮，选择“Direct Function”,然后点击“wet prime”选择欲灌装的通道。5.2.1.6假如当前管路中溶剂是有机的或水而当前流动相也为有机溶剂 或为水，在能互相溶解的情况下，用流动相作为灌装溶剂。5.2.1.7假如当前管路中溶剂是有机的或水而当前流动相也为有机溶剂或为 水，但不能互相溶解的情况下，使用异丙醇灌装系统。5.2.1.8假如管路中溶剂为有机的而当前流动相为缓冲盐或管路中为缓冲盐而流动相为有机溶剂时，使用10%异丙醇、甲醇、乙醇灌装系统。5.3优化泵的性能5.3.1总是把存放溶剂瓶的溶剂瓶架放在泵的顶部（或在相对于
8、泵较高的位置）。5.3.2当使用盐溶液的时候，常需要用水冲洗所有流路。这样就可以将阀门端口的沉淀的盐冲洗掉。在运营泵之前，用至少两倍体积（30ml）的水冲洗真空脱气机，特别是当泵关闭较长时间时或者通道中使用易挥发混合溶剂时。5.3.3当基线长时间不能处在稳定状态时，通常情况下应考虑溶剂进口过滤器是否堵塞。当溶剂过滤器堵塞时，应将其从溶剂瓶中取出并将其放入30%硝酸溶液中超声清洗30min。在将其重新装入溶剂瓶之前，必须用MillQ水对其进行彻底的清洗。长期处在水或缓冲液中的过滤器常由于溶剂中藻类等微生物的生长，导致过滤器的堵塞。因此建议在使用完此类流动相后，用50%乙腈清洗溶剂过滤器。5.3.
9、4当使用缓冲溶液时，在关闭系统前必须将通道中的溶剂置换成50%乙腈，以防止藻类等微生物的生长。5.4使用Empower色谱工作站5.4.1双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。输入用户名与密码，默认账号为“system”，密码为“manager”，点击“OK”进入Empower工作站。单击高级键, 选择用户类型和 QuickStart 界面。5.4.2选择 QuickStart 界面，点击“拟定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统 （仅查看数据可选择色谱系统中的没有系统），单击“拟定”。 5.4.3编辑仪器方法和方法组5.4.3.1监视区单击方法组编辑向导5.
10、4.3.2选择新建按钮，弹出仪器方法编辑器。5.4.3.3单击 2690/5，弹出 2695 编辑界面。5.4.3.4 Alliance 系统（涉及 2695、2795 和 2695D）通用编辑页面中，可选择单次输送体积。查看脱气选项，确认设立对的。流量选项中设立泵模式、总流量以及流动相配比。 选择等度或者梯度。5.4.3.5单击2489，弹出2489编辑界面。在波长模式中选择相应的波长模式。单波长或者双波长，输入所需的波长，选择相应的采样速率，一般为2点/秒。TUV 检测器滤波常数快速选项仅合用于单波长模式；采样速率以一个色谱峰上的采样点不少于 15 个点为准。5.4.3.6点击文献，选择另
11、存为，输入仪器方法名称，点击保存；点击文献，选择退出。5.4.3.7在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击 “下一步”。5.4.3.8在下拉菜单中选择所需的解决方法和报告方法（假如没有合适的方法选择无解决、无报告），点击“下一步”。5.4.3.9输入方法组名称，单击完毕。5.4.4进样单击平衡系统按钮进入平衡系统/监视基线界面，选择相应的仪器方法，点击平衡/监视器，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击停止按钮。单击样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。点击“进样”。5.4.5使用向导建立样品组和样品组方法5.4.5.1选择“运营样品
12、”任务栏，然后单击“样品队列”，进入样品列表。单击新建样品组向导，建立样品组。选择创建样品组方法类型为LC 或 PDA/MS，然后点击“定义样品板”，在选择标准进样在那里开始中选择合适的选项。检查开始加载样品瓶的位置是否 对的，点击“下一步” 。5.4.5.2在描述标样中需要设立一下内容：样品组中的标样数：x；每瓶标样进样次数: x；进样体积: x ； 行时间： xx；方法组 xxx；点击选项： 输入下一进样延迟时间 x ； 点击“下一步”。样品数：x；每瓶样品进样次数：x； 进样体积： x ; 行时间：x 方法组 x；点击“选项”。输入下一进样延迟时间 x；点击“下一步”。5.4.5.3在辨
13、认标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用 1。在辨认样品界面中，输入样品名称，增量后缀使用 a。点击“下一步”。 运营模式选项中选择只测试。查看摘要，点击“下一步”。 注 ：弹出组分编辑器，输入标样中每个组分的名称（内标不需要输入含）。可以直接关闭该窗口，在解决数据的时候再添加。 点击“完毕”，5.4.5.4在菜单栏中选择文献。为方法组命名并保存样品组方法。单击“样品队列”，打开运营样品窗口，点击运营当前样品组方法键，选择“运营”。选择需运营的样品组名称，点击“运营”。样品组运营过程中，在正在运营栏中正在运营以及运营完毕的样品以红色显示。 注：以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正，一般在
14、运营样品前删除该行或改为平衡。 5.4.6建立数据解决方法。5.4.6.1单击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目的样品组。在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组在单个通道中显示。5.4.6.2选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未解决的 色谱图形。5.4.6.3点击解决方法向导快捷键，选择创建新解决方法，点击”拟定”。确认解决类型为 LC，积分方式可选择为传统，再点击使用解决方法向导，选择“拟定”。积分-峰检测 1：要设定峰宽，用鼠标左键拖拽放大选定区域，放大感爱好的最窄峰。注：在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键选择全视图可以 还原色谱图
15、。积分-峰检测 2：在色谱图的积分界面选择一段典型的基线作为积分的阈值，点击 “下一步”。积分-几分区域：用鼠标左键拖拽放大选定区域，在基线上选取积分的起始时间点。积分-剔除峰：建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。小于此峰高 90%的峰将不被积分。点击“下一步”。5.4.6.4在定量方法中选择面积 ，组分信息中选择含量，校正曲线你和类型选择线性 。点击“下一步”。 QuickStart: 跨通道内标样界面点击否。校正-名称和保存时间：由于选择的是标样，点击峰 1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运营样品个组分相应的名称。 添加于组分名称相匹配的标准含量，然后点击“下一步”。 注：假如需要输入多水平的标样浓度或含量，请忽略此含量缺省值的设立环节，点击“下一步”。（假如使用的单一水平的标样，可以在缺省含量中输入相应的数值）。 5.4.6.5校正：选择外标法，校正：选择单一内标样，需要在下拉菜单中选择或键入内标相应得名称，然后点“下一步”。校
