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1、最新浙科版选修1第一部分实验一 大肠杆菌的培养和分离素材3导学诱思一、大肠杆菌1大肠杆菌属于革兰氏_性菌,为_型的肠道杆菌。2结构：属于_生物。3用途：是在_技术中被广泛采用的工具。4与人类的关系：它生活在人类的_中,一般对人_(“有”还是“无”)害。有一些菌株对人体能产生危害,因为它们可以侵蚀_并产生_。任何大肠杆菌如果进入人的_系统,都会对人体产生危害。答案：1.阴兼性厌氧2原核3基因工程4肠道无肠黏膜毒素泌尿二、细菌的培养和分离1细菌的培养：(1)细菌的繁殖：细菌以_的方式繁殖,分裂速度很快,约_分裂一次。(2)培养细菌的方法：培养细菌,需要将_转移到_中,一般用_来转移带菌的培养物。(
2、3)用不同培养基培养细菌的差别：接种后,培养细菌的培养基类型接种方法接种后培养的时间(单位：小时)培养结果液体培养基接种环直接接种培养8 h后每毫升培养基中有_个细菌固体培养基用接种环在培养基上用_的方式接种(该法还可以用于_)培养1020 h后一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞,这些细胞_,形成_2.细菌的分离：(1)分离的方法与特点：分离细菌有_和_2种。前者方法简单,后者操作复杂,但是_更易分开。(2)本实验进行大肠杆菌分离,是用_法,就是在_培养基上进行细菌的_答案：1.(1)分裂20 min(2)已有细菌的培养物新的培养基接种环(3)几亿划线分离细菌紧紧聚集在一起菌落2.(1)划线分
3、离法涂布分离法单菌落(2)划线分离固体平面划线培养三、灭菌操作1灭菌操作的原因：为了获得_的培养物,其关键是防止外来_的入侵污染。因此,在培养微生物时必须进行_操作。2无菌操作的条件：(1)首要条件是_必须是无菌的；(2)_必须是无菌的；(3)_的过程必须是无菌的等。答案：1.纯净杂菌无菌2(1)各种器皿(2)各种培养基(3)菌转移操作四、大肠杆菌的培养和分离实验1实验目的：(1)进行大肠杆菌的_,利用_培养基进行细菌培养的操作；(2)进行大肠杆菌的_,用_培养基进行细菌的_培养；(3)说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。2实验步骤(1)灭菌：用_在_压力下对LB液体培养基、LB固体培养基
4、和培养皿进行灭菌_min。(2)自_向_中转移并分装固体培养基：待冷却至_左右,将三角锥形瓶中的_培养基,在_上分装至几个_中,制成_培养基。(3)将大肠杆菌自_转移到_中的_培养基中培养：将大肠杆菌用_在无菌操作下接种至三角锥形瓶中的_培养基中,在_摇床振荡培养_,完成大肠杆菌的培养。(4)将菌液在_培养基上进行_分离：从前一步培养得到的菌液中获取菌种,用_以_法接种至第二步所制得的_培养基中,在_恒温箱中培养_h后观察菌落。(5)菌种保存：在无菌操作下将_用_取出,再用_法接种在_上,_培养_后,_冰箱保存。3分离实验的结果及相应结论：观察中若看到在_的末端出现_,则表明菌已被分离了。4大
5、肠杆菌分离的用途：_的通用方法,也是用于_的最简便方法之一。答案：1.(1)扩增液体(2)分离固体平面划线2(1)高压锅1 kg15(2)三角瓶培养皿60 固体超净台培养皿固体平面(3)斜面三角瓶液体接种环液体37 12 h(4)固体平面划线接种环划线固体平面371224(5)单菌落接种环划线斜面37 24 h4 3划线不连续的单个菌落4消除污染杂菌筛选高表达量菌株核心解读HEXINJIEDU1微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？(1)概念内涵：其关系图解见下(2)结构上：三者都是结构简单,形体微小的生物,但是从细胞角度看其结构是不同的,具体如下：2培养大肠杆菌的LB培养基中有各种物质,为
6、什么选择这些物质,这些物质有什么作用呢？(1)人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出了供其生长繁殖的营养基质培养基。虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有五大营养要素,即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同,有物种差异,它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的,但却是生长繁殖必需的物质)。见下表：微生物的营养要素定义功能类型化合物类型常用物质碳源凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营养物质称为碳源构成细胞物质,供给微生物生长发育所需要的能量无机碳(自养型微生物用)无机物CO2、NaHCO3、CaCO3等有机碳(异养型微生物用)蛋白质
7、、核酸类牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、明胶、氨基酸等糖类脂质等葡萄糖、蔗糖、淀粉等氮源凡是构成微生物的细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源主要是提供合成原生质和细胞其他结构的原料,一般不作能源无机氮铵盐NH3、(NH4)2SO4硝酸盐KNO3N2空气有机氮牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明胶等生长因子一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物一般是酶和核酸的组成成分酵母膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦芽汁等,复合维生素水作用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体无机盐作用：维持渗透压、pH等 (2)大肠杆菌的LB培养基微生物的营养要素本实
8、验中大肠杆菌LB培养基配方培养基配方与微生物营养要素的对应关系LB液体培养基LB固体培养基氮源、碳源、无机盐、生长因子、水琼脂1 g蛋白胨0.5 g主要提供大肠杆菌的氮源、碳源需求酵母提取物0.25 g主要提供生长因子NaCl0.5 g提供无机盐水50 mL提供水 (3)此外配方中还要注意pH等。3该实验中这些操作的原因(1)三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌后,需要冷却到60 左右时,才用来转移和分装,制成固体平面培养基,为什么？你用什么简易方法快速估计该温度？因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂,它在98 以上熔化,在44 以下凝固,当冷却到60 左右时,不会因温度过高烫手而不易操作；也
9、不会因为温度过低而使三角锥形瓶中的培养基凝固,最终无法转移分装制成新的平面培养基。简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶,感觉锥形瓶由烫手转为刚刚不烫手时,则说明已经冷却到60 左右了。(2)进行恒温培养时,为什么要将培养皿倒置？恒温培养时,培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖子上；如果正放培养皿,则水分形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落,则菌落中的菌会随水扩散,菌落间相互影响,很难再分成单菌落,达不到分离的目的,培养皿中的菌落还有可能被盖子上掉落的水给污染。(3)将大肠杆菌用接种环自斜面转移到液体培养基中培养时,为什
10、么接种环必须先深入到斜面冷却后,才能再取斜面上的菌体？接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌,一直灼烧至红,温度很高,若不冷却就直接用其取斜面上的菌体,菌体可能因为接触高温接种环而死亡,导致大肠杆菌的转移培养失败。(4)用划线法分离大肠杆菌中,第一次和随后的几次划线前都要灼烧接种环,它们的原因一样吗？在划线结束后仍然要灼烧接种环这又是为什么呢？虽然每次灼烧都是为了灭菌,但所灭的菌种和原因却不一样。灼烧接种环的时间消灭的菌体原因第一次划线前其他杂菌防止其他杂菌的侵入而造成污染随后的几次划线前上次划线结束后残留在接种环上的实验菌(本实验为：大肠杆菌)为了使下一次划线时,接种环上的菌来自上次划线的
11、末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,最终获得单个菌落,实现菌的分离最后一次划线结束后为了防止实验菌残留于接种环而污染环境和感染实验人员 (5)用划线法分离大肠杆菌时,每次的划线是怎么样的？对随后的划线的起点有什么要求？为什么这样要求呢？每一次的划线依次的2次划线之间的关系各次划线的分布图形辅助理解划线的要求不能出现线条的重叠第二次以及随后的划线操作,总是从上一次划线的末端开始不要将最后一区的划线与第一区相连这样要求的原因使线条末端细菌的数目比线条起始处要少因为划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐
12、减少,最终得到有单个细菌繁殖而来的单菌落若相连,则可能最后一次划线末端处的细菌与第一次的叠加,细菌的数目不是最少的,不能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少,最终将很难获得单菌落4消毒与灭菌一样吗？概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法：在100 煮沸56 min一般物品巴氏消毒法：7075 煮30 min或在80 煮15 min对于一些不耐高温的液体,如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌干热灭菌：160170 下灭菌12 h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：121 条件下,灭菌1530 min培养基及容器的灭菌5.本
