《2013高二生物精品学案：专题2微生物的培养与应用学案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2013高二生物精品学案：专题2微生物的培养与应用学案（38页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 世纪金榜 圆您梦想 专题2微生物的培养与应用第5课时微生物的实验室培养目标导航1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。一、培养基与无菌技术1培养基(1)概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其_的_。(2)成分：一般含有_、_、_、_，此外还要满足微生物对_(即生长因子)、_以及氧气的需求。拓展深化营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需_的物质构成生物体的_和一些_，有些是异养生物的_无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供
2、所需_的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等特殊营养物质(生长因子)生长必不可少的_酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂(3)培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质_培养基加凝固剂，如琼脂_半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定_培养基微生物_、_、活菌计数、保藏菌种化学成分_培养基含化学成分不明确的天然物
3、质工业生产_培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定用途_培养基培养基中加入某种化学物质，以_不需要的微生物的生长，_所需要的微生物的生长培养、_出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素或链霉素；培养固氮菌可用无氮培养基，如阿须贝培养基)_培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品_不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)注意病毒目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。2无菌技术(1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并
4、保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是_，_。(2)无菌技术的具体内容对实验操作的_、操作者的_进行清洁和消毒。将用于微生物培养的_、接种用具和培养基等进行_。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_进行。实验操作时应避免已_处理的材料用具与周围的物品相接触。(3)消毒和灭菌的概念消毒：消毒是指使用_的物理或化学方法杀死物体表面或内部的_(不包括芽孢和孢子)。灭菌：灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外_，包括_。消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是_。拓展深化某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。
5、每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。孢子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。(4)消毒与灭菌的常用方法方法条件作用对象消毒_100，煮沸56 min杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢_7075煮30 min或80煮15 min不耐高温的液体_70%的酒精对双手消毒50%的石炭酸、来苏水对空气消毒一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒紫外线法紫外线照射30 min物
6、体表面或空气中的微生物灭菌_在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌_在干热灭菌箱内，160170条件下，加热12 h耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等_在高压蒸汽灭菌锅内，121，100 kPa，灭菌1530 min_30 W照射30 min小型接种室、接种箱等二、实验操作(一)配制培养基1配制原则(1)_(根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。(2)_，注意各种营养物质的浓度和比例。(3)_，各种微生物适宜生长的
7、pH范围不同，细菌6.57.5、放线菌7.58.5、真菌5.06.0。注意不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为41时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为31时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2配制方法(以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例)(1)培养异养菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养构成培养基组分提供的
8、主要营养物质牛肉膏5.0 g碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0 g氮源和维生素NaCl 5.0 g无机盐H2O定容至1 000 mL氢元素、氧元素(2)实验流程提醒合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保温12 d，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。(二)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。1微生物接种的方法微生物接种的方法最常用的是_和_两种。(1)_通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐
9、步稀释分散到培养基的表面。将_放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。将试管口通过酒精灯的_。将已冷却的接种环伸入菌液中，_一环菌液。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。_将培养皿皿盖打开一条缝隙，_将沾有菌种的接种环迅速伸入_，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将_的划线与_相连。将_，放入培养箱中培养。(2)_则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。系列稀释操作
10、a取盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101106的顺序编号。b用_吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。c从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀，获得102倍液。依此类推。涂布平板操作a将_浸在盛有酒精的烧杯中。b取不超过0.1 mL的_，滴加到培养基表面。c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810 s。d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。2注意事项(1)平板划线法操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_，划线操作结束时
11、，仍需灼烧_。从第二次以后的划线操作总是从_开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(2)稀释涂布平板法稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_”，应特别注意：酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管要在酒精灯火焰周围使用。3微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价(1)培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。(2)在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。(3)培养12 h和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落
12、的位置不动，只是菌落数增多。(4)频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，第36个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在20的冷冻箱中。4菌种的保存为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用_法；对于需要长期保存的菌种，可以采用_法。将菌种放在低温环境中保藏的目的是_，但时间长了菌种还是要老化的，因此对临时保存的菌种_个月后需重新接种。知识点一培养基与无菌技术1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一2下列说法正确的是()A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C除水以外的无机物只能
