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1、制定部门文件名称受控号：SJ/JYD5.14-02/0810品管部粗蛋白含量的测定受控编号：SJ/JYD5.14-02/0810粗 蛋 白 含 量 测 定 法 文件类别：作业指导书撰写单位：品管部 版 本：第二版 实施日期：2008.10.25 合计页数：共 6 页核 审制准核定1. 目的 测定粮食、油料中粗蛋白的含量2. 范围 含氮量0.02%-95%之间的粮食、油料3. 定义 无4. 职责 检验员负责检验工作的执行5.作业办法5.1 KDN-08C定氮仪测定法5.1.1工作原理 KDN-08C定氮仪是由消化炉与定氮仪蒸馏器组成。将试样置入消化管插入井式加热炉内加热取得最佳的热效应，在消化之
2、前置入催化剂进一步加速消化煮解，大大缩短消化时间。消化管内溢出的SO2等有害气体，通过消化管上的排污管经抽气三通由下水道带入下水道，有效的抑制了有害气体的外溢，试样经40分钟左右消化煮解，即可完全消化尽。5.1.2技术参数5.1.2.1测定样品量：固体5g/个，液体15ml/个5.1.2.2工作电压：220V，50HZ5.1.2.3电耗：蒸馏器800W、消化炉（四孔1200W）(八孔2400W)5.1.3操作方法5.1.3.1试剂准备5.1.3.1.1浓硫酸混合液 在100mL水中缓缓加入浓硫酸200mL，冷却后加入30%过氧化氢300mL，混合均匀。5.1.3.1.2混合催化剂 硫酸铜10g
3、、硫酸钾100g、硒粉0.2g，在研钵中研细过孔径0.45mm（40目筛），混匀备用。5.1.3.1.3 混合指示剂 2份甲基红乙醇溶液（称取0.1g甲基红置于研钵中加入少许95%乙醇，研磨溶解后，加入75mL95%乙醇）与1份次甲基蓝乙醇溶液（0.1g次甲基蓝溶于80mL95%乙醇中）临用时混合。或使用由0.2%甲基红乙醇溶液1份和0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份配置的混合指示剂，终点为灰红色。5.1.3.1.4 20g/L硼酸溶液 称取20g硼酸溶解在1000mL水中。5.1.3.1.5 400g/L氢氧化钠溶液 称取40g氢氧化钠溶于100mL水中。5.1.3.1.6 0.01mol/L盐酸
4、溶液 5.1.3.1.6.1配置 先配置0.1mol/L盐酸，量取9mL浓盐酸，加水定容至1000mL。再配置0.01mol/L盐酸标准溶液，量取已配置的0.1mol/L盐酸100ml加水定容至1000mL。5.1.3.1.6.2 0.1mol/L盐酸标准溶液的滴定 称取0.2g于270-300灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50mL水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示液，用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时做空白试验。5.1.3.1.6.3 计算 C(HCL)= 式中 C(HCL)盐酸标准溶液的物质的量浓度，mol/L；
5、m无水碳酸钠的质量，g V1盐酸溶液的用量，mL V2空白试验盐酸溶液的用量，m； M无水碳酸钠的摩尔质量，其值为M（1/2Na2CO3)=52.994g/mol。5.1.3.2样品消化称取经粉碎通过40-60目的样品0.5-1.0g用蜡光纸卷着倒入已洗涤烘干的消化管中加催化剂5g左右和10mL左右硫酸。将消化管分别放入消化架各个孔内，然后置于消化炉上，然后开启抽气三通接上自来水龙头，使抽气三通处于吸气状态，接通电源，在加热初始阶段注意防止样品飞溅。消化炉温度起先控制在200度左右，20分钟后可以再设定至450度以上。消化终点是以消化液的颜色来判定的，当消化液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸
6、腾10分钟，然后结束消化过程。5.1.3.3 蒸馏5.1.3.3.1蒸馏器中，碱液及蒸馏水采用电磁泵加入，NaOH、H2O注入接口用橡胶管套入后分别置入自备的容器中，加液时按面板上相应开关，液体由泵吸入消化管内，注入毫升数视标尺所注位置而定。（一般碱液加量是消化时硫酸用量的5倍以上，加蒸馏水量15毫升左右）。5.1.3.3.2 打开电源，打开自来水龙头，接冷却水，自来水龙头不必开过大，出水口有水流出即可，用排水管子上的夹子夹紧排水管子。打开面板上右边蒸气开关，手柄往上推为开蒸气，同时把左边的进水开关手柄往上推为开，待电流表指针指在2A-3A时马上把左边进水开关手柄往下压，压到底压不下为关（如果
7、水进入侧面蒸发炉慢，电流表长时间没反应，用吸耳球往正面的细长管内吹几下，以排除管内空气），待蒸气管喷出气后又上推打开左进水开关供水，1分钟左右电流稳定在3.5A-6A左右后，关闭右蒸气开关，手柄往下压到底。因为红色进水开关是控制机器内部产生蒸气的水源开关，从侧面的有机玻璃窗口可以看到蒸发炉水位的高低，防止水位过高，因为一开始水没有沸腾，水不断进入，容易使电流过大而烧坏保险丝。蒸气开关是起通断蒸气作用，也是水源进入蒸发炉和排除蒸发炉水的排水器件。（如果蒸气出来后电流不大，开关一下红色蒸气开关会正常。5.1.3.3.3 在250mL三角接受瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示剂，蒸馏时
8、间设定6-8分钟，并使接受瓶托架盘往上移，使滴定管浸没在液体中，然后按时控开关。5.1.3.3.4 向上扳动侧面红球手柄把消化管固定在左边托架上，然后按面板上开关分别加入H2O、NaOH液体，然后上推蒸气开关，向试管内注入蒸气，进行蒸馏样品，在接受瓶内接受液达150mL左右时移下接受瓶，用蒸馏水冲洗滴管口继续蒸馏半分钟，然后取下接受瓶，待滴定用，关蒸气开关，第二个样品只要放上后，加好液，上推蒸气开关即可，不要关电源。5.1.3.4滴定用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定接收瓶内的溶液，滴定溶液由绿色变为淡紫色时为止，记下消耗盐酸的毫升数，按下式计算蛋白含量：蛋白含量（%）=（V-V0）N0.01
9、4A100/W式中：V消耗的盐酸的毫升数V0空白试验时消耗盐酸毫升数N盐酸的当量浓度0.0141mL盐酸的克当量数A固定系数（6.25、5.7、5.3）W试样重量,g5.1.3.5关机关电源、关水龙头、打开排水夹子，两红球开关上推，取下消化管，擦干机器。5.1.4注意事项5.1.4.1 消化时如气体外逸，加大自来水压力。小花圈每次试验结束后清洗一遍延长使用寿命。碱泵每次工作完后把氢氧化钠溶液外接皮管移入蒸馏水瓶内，前面套好消化管抽洗几次，防止碱浓度过高，残留在碱泵内而影响寿命年工也可防止单向阀阀芯粘连。待下次使用时，在蒸馏时须排出100mLNaOH，以防止第一个样品NaOH浓度不够。过一段时间
10、用稀酸清洗一下蒸发炉并用清水洗几次，保养电极。5.1.4.2 如果操作不当，15A保险丝烧断后，请拔去电源插头，换上新的后，关水龙头，打开排水夹子排尽蒸发炉内的水，按照开机步骤重新开机操作。5.2 凯式定氮测定法5.2.1仪器和用具5.2.1.1 凯氏烧瓶：50ml； 5.2.1.2 圆底烧瓶：100ml； 5.2.1.3 万用电炉； 5.2.1.4 锥形烧瓶：100ml； 5.2.1.5 微量滴定管：5ml、刻度0.01ml； 5.2.1.6 容量瓶：50ml； 5.2.1.7 移液管：5ml； 5.2.1.8 量筒：10ml； 5.2.1.9 洗耳球；5.2.2 试剂 同上5.2.3 操作
11、方法5.2.3.1 消化 称取经粉碎通过40-60目的样品0.20.3g（W，精确到0.0001g），用蜡光纸卷着倒入洗净烘干的50ml凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g,同时加入硫酸-过氧化氢-水混合液35ml，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾10min，取出待消化液冷却至室温后，加水1020ml，再待溶液温度降到室温后，干净地转入50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。同时做空白实验。5.2.3.2 蒸馏 在烧瓶内加水400ml和少量沸石，
12、加5滴混合指示剂，加几滴酸液使水呈紫红色，连接蒸馏装置，并检查有无漏气处。 量取30ml1%硼酸溶液注入锥形瓶内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5ml，由漏斗注入蒸馏瓶内，再加水10ml，冲洗加液漏斗。量取40%氢氧化钠溶液1ml，提起活塞注入蒸馏瓶内，立即用水25ml冲洗漏斗，旋紧活塞。这时蒸馏瓶内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹，关闭活塞，加热烧瓶，待蒸馏瓶内溶液开始沸腾时开始计时，经2min降低锥形瓶，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹，断绝蒸气，使蒸馏瓶内溶液全部吸入回流管中，放松簧夹，从漏斗加入
13、蒸馏水4050ml，再通蒸气加热和回流，将蒸馏瓶洗涤一次备用。5.2.3.3 滴定 用0.01 mol/L盐酸溶液滴定锥形瓶内的吸收液，滴定溶液出现浅紫红色为止。同时做空白实验。5.2.4 结果计算 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算： 粗蛋白质（干基%）= （V1-V0）N14P式中：V蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml； V1实验用去的盐酸溶液体积，ml； 1V0空白试验用去的盐酸溶液体积，ml； N盐酸溶液的当量浓度，N； 14每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数；P蛋白质换算系数（小麦5.7，其他谷物及豆类6.25）； W试样重量，mg； M试样水分百分率，%。5.2.5 注意事项5.2.5.1 消化过程中若硫酸损失过多，可酌情补加硫酸，勿使消化瓶内干涸。5.2.5.2 加入蒸馏瓶内的碱液必须过量。5.2.5.3 消化液加水稀释后，应及时进行蒸馏。 6.相关文件 7.相关记录 实施日期2008.10.25制定日期2008.10.20页 次2/6山东九阳豆业发展有限公司
