《ER、PR、HSP70和HSP90在子宫内膜息肉治疗前后的表达及意义.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《ER、PR、HSP70和HSP90在子宫内膜息肉治疗前后的表达及意义.doc（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、ER、PR、HSP70和HSP90在子宫内膜息肉治疗前后的表达及意义作者：范秀华,邢小芬,刘淳,刘学燕,童重新,王单位：石家庄市，河北医科大学第二医院；河北省儿童医院；河北省威县人民医院；河北省兴隆县妇幼保健院项目来源：河北省科学技术研究与发展指导计划项目（编号：04276101） 【摘要】目的 研究子宫内膜息肉（EP）治疗前后雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及热休克蛋白70、90（HSP70、90）的表达及意义。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）来检测29例EP及其治疗后36个月后内膜中息肉中ER、PR、HSP70和HSP90的转录水平。结果 治疗后子宫内膜中ER、HSP
2、70较治疗前EP组织中表达降低（P0.05），而PR和HSP90改变不明显（P0.05）。结论 通过刮宫治疗EP，能够使子宫内膜内环境得到一定改善，ER、HSP70在本病发生中起重要作用。 【关键词】 子宫内膜息肉 宫腔镜治疗 雌、孕激素受体 热休克蛋白70 热休克蛋白90The expression and significance of ER，PR，HSP70 and HSP90 after the surgery of TCRP FAN Xiuhua，XING Xiaofen，LIU Chun，et al. The Second Hospital of Hebei Medical Uni
3、versity，Shijiazhuang 050000，China 【Abstract】Objective To investigate the role of estrogen receptor（ER），progesterone receptor（PR），heat shock protein 70 and 90（HSP70，90） in endometrial polyps （EP） by detecting their expression before and after treatment.Methods 29 cases of endometrial polyps were obta
4、ined from the patients who underwent a surgical treatment by hysteroscopy（transcervical resection of endometrial polyps，TCRP）.The endometrial tissue of the same person was obtained in 3 to 6 month after the operation.The expression of mRNA of ER，PR，HSP70 and HSP90 was detected by reverse transcripta
5、se PCR（RTPCR）in differdnt groups.Results The expression of ER and HSP70 after treatment was significantly lower than that in endometrial polyps（P0.05）.But there was no significant difference in the changes of expression of PR and HSP90 before and after treatment （P>0.05）.Conclusion TCRP is effect
6、ive in treating endometrial polyp，and ER，HSP70 may play an important role in the pathogenesis of endometrial polyps. 【Key words】endometrial polyps；hysteroscopy；estrogen receptor； progesterone receptor；heat shock protein 70；heat shock protein 90 子宫内膜息肉（EP）是妇科的常见疾病，多发于已婚女性，且发病率、复发率均高，本病的发生多被认为与内分泌不平衡和
7、局部炎症刺激有关，但具体机制不明确1。近年来宫腔镜的普及为本病的确诊和治疗提供了方便，本文就采用宫腔镜下治疗EP，比较息肉治疗前和治疗后内膜组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、热体克蛋白70（HSP70）和HSP90的表达，为临床治疗EP提供理论依据。1 资料与方法1.1 一般资料选取2005年1月至2008年6月就诊于河北医科大学第二医院宫腔镜室，检出多发性EP患者35例（6例失访），年龄2945岁，近3个月未用任何甾体激素类药物，无肝肾等慢性疾病的患者，经宫腔镜EP切除术，或宫腔镜直视下刮宫治疗，组织送病理并证实EP。EP经宫腔镜下治疗息肉后36个月，未服任何药物及上环等其他因素
8、影响，于月经干净37 d，对以上患者宫腔镜复查并取其内膜组织。1.2 研究方法1.2.1 样本采集：用冰0.9%氯化钠溶液清洗标本后迅速投入液氮中保存。采用Trizol法提取细胞总DNA（上海捷瑞生物有限公司），取5 μl经1.5%琼脂糖凝胶电泳，检测完整性。1.2.2 cDNA合成：RNA模板10 μl引物1 μl混匀置于70水浴5 min，后冰浴30 s，再加入DTT 5 μl、5×Buffer 10 μl、RNase Inhibitor 0.5 μl、dNTP 2 μl、MMLV逆转录酶0.5 μl和H2O2 21 μl，
9、3010 min、42 30 min，95灭活逆转录酶5 min。1.2.3 引物及扩增：ER 引物：上游5GGAGACATGAGAGCTGCCA3，下5CCAGCAGCATGTCGAAGATC3，目的片段长度438 bp；PR引物：上游5’TCATGAGCCGGTCCGGGTGCAAG3’，下游5CGGGGTGGACGAGGCACAGG3，目的片段长度196 bp；HSP70引物：上游下游5CGGTTGTCGAAGTCCTCCCC3，目的片段长度277 bp；HSP90引物：上游5TCGCCTT TCAGGCAGAAATTGC3，下游5CGACTTTTGTTCCACG
10、ACCCATA3，目的片段长度501 bp；内参上游5 AGCGAGCATCCCCCAAAGTT3，下游5GGGCACGAAGGCTCATCATT3，扩增片段长度为285 bp。 扩增体系包括：上下游引物：2.5 μl、逆转录产物（cDNA）：1 μl 、dNTP（2 mmol/L）：1 μl、Buffer：2 μl、ddH2O：14.85 μl，共25 μl。ER扩增条件：95预变性5 min，95变性45 sec、53退火45 s、7230 s，72延伸5 min，30个循环，4保存。PR扩增条件：95预变性5 min，95变性45 s、55退火30 s
11、、72延伸30 s，30个循环后72最后延伸5 min，4保存。HSP70和HSP90扩增条件：95预变性5 min，进入循环，95变性30 s、55退火30 s、72延伸30 s，30个循环后72最后延伸5 min，4保存。1.2.4 产物分析：紫外透射仪上观察结果并照相，选用BandScan 5.0凝胶图像处理软件进行光密度值分析，采用目的基因与βactin光密度的比值表示目的基因的表达水平。1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，RTPCR结果采用配对t检验分析，P0.05为差异有统计学意义。2 结果 治疗前后ER、PR、HSP70和HSP90转录水平结果见表1、图
12、1。治疗后子宫内膜中ER、HSP70表达降低（P0.05），而PR和HSP90改变不明显（P0.05）。表1 RTPCR检测治疗前后ER、PR、HSP70和HSP90转录水平（略） 注：与治疗前比较，*P0.053 讨论3.1 EP的病理机制 研究发现，EP的发生与局部甾体激素分泌不平衡及炎症刺激有关。增殖期息肉中PR的表达低于同期内膜，而ER表达二者无差异；分泌期息肉中ER表达水平较相对应的分泌期内膜升高，PR表达二者无异2，考虑孕龄女性EP患者增殖期EP中PR处于低水平、相对缺乏的状态，使其进入分泌期后对孕激素的反应能力下降，从而使孕激素抑制ER产生的作用减弱，导致ER持续高水平表达，细胞
13、增殖形成息肉。但究竟何原因导致EP局部ER、PR表达失衡，是一直以来让众多学者困扰的问题，本病治疗后易复发，去除息肉后子宫内膜局部环境是否能够恢复正常，对评价本病疗效起着至关重要的作用。我们研究发现，EP刮除后36个月取增生期子宫内膜中ER表达降低，PR较前无明显改变。3.2 HSP家族 高等动物在不利环境中，组织会发生共同的分子反应，导致一组特殊基因——热休克基因的激活，产生HSP，可作为分子伴侣，参与蛋白质的折叠、转运、转位及生物合成等过程，使细胞产生热耐受。在HSP大家族中，最为关注的是HSP70，因它在生物中含量最多且具有高度保守性，因此表达稳定3，此外，研究发
14、现，HSP70、90在正常子宫内膜和增生过长子宫内膜中均有表达，其二者在正常子宫内膜的生长和功能维持中有一定的作用4，HSP在正常细胞中水平较低，而在应激后表达显著增高，在对子宫内膜癌的研究中则发现HSP70 高表达对内膜癌细胞的生长提供一个有利的环境，而HSP90的作用却相反5，而从本实验的研究结果来看，去除息肉影响后，子宫内膜HSP表达均减少，但HSP90减少差异无统计学意义。3.3 在炎性应激学的研究中发现，雌激素能够对应激反应产生抑制。 而在妇科肿瘤的研究中也发现ER表达与HSP70呈负相关6，我们研究结果显示去除息肉组织后，ER与HSP70表达均降低，考虑是通过刮除息肉改善局部环境后
15、，局部甾体水平与炎性反应均缓解，与上述观点并不相悖。我们认为，通过刮宫治疗EP，能够使子宫内膜内环境得到一定改善，但对本病远期复发的评价仍需探索。【参考文献】1 邢小芬，范秀华.子宫内膜息肉合并不孕30例诊治分析.河北医药，2006，28：959.2 Taylor LJ，Jackson TL，Reid JG，et al.The differential expression of estrogen receptors，progesterone receptors，bcl2 and ki67 in endometrial polyps.Obstet Gynaecol，2003，110：79479
16、8.3 傅庆国，孟凡东，郭克建，等.热休克蛋白70在诱导肿瘤免疫中的效应.中华微生物学和免疫学杂志，2003，23：3133.4 Witkin SS.Heat shock protein expression and immunity：Relevance to gynecologic oncology.Gynaecol Oncol，2001，22：249256.5 Workman P，Maloney A.HSP 90 as a new therapeutic target for cancer therapy：The story unfolds.Expert Opin Biol Ther，20
