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1、有关工业微生物产生菌的有关分别挑选工业微生物产生菌的分别挑选菌株分别（ separation ）就是将一个混淆着各样微生物的样品经过分别技术划分开，并依据实际要乞降菌株的特征采纳快速、正确、有效的方法对他们进行分别、挑选，从而获取所需微生物的过程。菌株分别、挑选（ screening ）虽为两个环节，但却不可以绝然分开，因为分别中的一些举措自己就拥有挑选作用。工业微生物产生菌的挑选一般包含两大多半：一是从自然界分别所需要的菌株，二是把分别到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴识。在实验工作中，为使挑选达到事半功倍的成效，总的说来可从以下几个门路进行采集和挑选：（1 ）向菌种收藏机构讨取有关的
2、菌株，从中挑选所需菌株。（2 ）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分别挑选。（3 ）从一些发酵制品中分别目的菌株，如从酱油中分别蛋白酶产生菌，从酒醪中分别淀粉酶或糖化酶的产生菌等。该类发酵制品经过长久的自然选择，拥有悠长的历史，从这些传统产品中容易挑选到理想的菌株。菌株的分别和挑选一般可分为采样、富集、分别、产物鉴识几个步骤。第一节含微生物样品的采集自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众多微生物，种类数目十分可观。但整体来讲土壤样品的含菌量最多。一、从土壤中采样土壤因为具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。从土壤中几乎能
3、够分离就任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都根源于土壤，所以土壤样品常常是首选的采集目标。一般状况下，土壤中含细菌数目最多，且每克土壤的含菌量大概有以下的递减规律：细菌（108 ） 放线菌（ 107 ） 霉菌（ 106 ） 酵母菌（ 105 ） 藻类（ 104 ） 原生动物（ 103 ），此中放线菌和霉菌指其孢子数。但各样微生物因为生理特征不同，在土壤中的散布也跟着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。所以，在分别菌株前要依据分别挑选的目的，到相应的环境和地域去采集样品。（一）依据土壤特色1 土壤有机质含量和通气状况一般耕种土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富，营养充分，且土壤成团
4、粒构造，通气饱水性能好，因此，微生物生长旺盛，数目多，特别合适于细菌、放线菌生长。山坡上的丛林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且灰暗湿润，合适霉菌、酵母菌生长生殖，微生物数目相应也比较少。从土层的纵剖面看， 1 5cm 的表层土因为阳光照耀，蒸发量大，水分少，且有紫外线的杀菌作用，因此微生物数目比 5 25cm 土层少； 25cm 以下土层则因土质密切，空肚量不足，养分与水分缺乏，含菌量也逐渐减少。所以，采土样最好的土层是 5 25cm 。一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各样种类的细菌和放线菌几乎都能分别到。如好气芽孢杆菌、假单胞菌、短杆菌、大肠杆菌、某些嫌气菌等。但总的说来酵母
5、菌散布土层最浅，约 5 10cm ，霉菌和气氧芽孢杆菌也散布在浅土层。2. 土壤酸碱度和植被状况土壤酸碱度会影响微生物种类的散布。偏碱的土壤（ pH7.0 7.5 ）环境，合适于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤（ pH7.0 以下）环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。因为植物根部的分泌物有所不同，所以，植被对微生物散布也有必定的影响。如番茄地或腐化番茄聚积处有许多维生素 C 生产菌。葡萄或其余果树在果实成熟时，其根部邻近土壤中酵母菌数目增加。豆科植物的植被下，根瘤菌数目比其余植被下占优势。3地理条件南方土壤比北方土壤中的微生物数目和种类都要多，特别是热带和亚热带地域的土壤。很多工业微生物菌种，如抗
6、生素产生菌，特别是霉菌、酵母菌，大多从南方土壤中挑选出来。原由是南方温度高，暖和季节长，雨水多，相对湿度高，植物种类多，植被覆盖面大，土壤有机质丰富，造成得天独厚的微生物生长环境。4季节条件不同季节微生物数目有显然的变化，冬天温度低，天气干燥，微生物生长迟缓，数目最少。到了春季跟着气温的高升，微生物生长旺盛，数目渐渐增添。但就南方来说，春季常常雨水多，土壤含水量高，通气不良，即便有微生物所需的温度、湿度，也不利于其生长生殖。随后经过夏天到秋天，约有 7 10 个月处在较高的温度和丰富的植被下，土壤中微生物数目比任何时候都多，所以，秋天采土样最为理想。（二）采样方法用取样铲，将表层 5cm 左右
7、的浮土除掉，取 525 处的土样 10 25 ，装入预先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在 10 30 处取样。给塑料袋编号并记录地址、土壤质地、植被名称、时间及其余环境条件。一般样品取回后应立刻分别，免得微生物死亡。但有时样品许多，或到外处取样，路程遥远，难以做到实时分别，则可预先用选择性培育基做好试管斜面，随身带走。到一处将取好的土样混匀，取 34 撒到试管斜面上，这样可防止菌株因不可以实时分别而死亡。二依据微生物生理特色采样1. 依据微生物营养种类每种微生物对碳氮源的需求不相同 , 散布也有差别。研究表示，微生物的营养需乞降代谢种类与其生长环境有着很大的有关性。如丛林土有相当多枯枝
8、落叶和腐化的木优等，富含纤维素，合适利用纤维素作碳源的纤维素酶产生菌生长；在肉类加工厂邻近和饭馆排水渠的污水、污泥中，由于有大批腐肉、豆类、脂肪类存在，因此，在此处采样能分别到蛋白酶和脂肪酶的产生菌；在面粉加工厂、糕点厂、酒厂及淀粉加工厂等场所，简单分别到产生蛋白酶、糖化酶的菌株。若要筛选以糖质为原料的酵母菌，往常到蜂蜜、蜜饯、甜果及含糖浓度高的植物汁液中采样。在挑选果胶酶产生菌时，因为柑橘、草莓及山芋等果蔬中含有许多的果胶，所以，从上述样品的腐化部分及果园土中采样较好。若需要挑选代谢合成某种化合物的微生物，从大批使用、生产或办理这种化合物的工厂邻近采集样品，简单获取满意的结果。在油田邻近的土
9、壤中就简单挑选到利用碳氢化合物为碳源的菌株。 Hartman 等人曾从乙烯氯化物的工厂邻近分别到一株以乙烯氯化物为碳源和能源的分枝杆菌。含 1% 乙烯氯化物的空气经过该菌培育可除掉 93% 的毒性。也有人从含油污泥中挑选出能以 20# 机械润滑油为唯一碳源的株石油降解菌菌株，分别为动胶菌属（Zoogloea sp. ）、氮单胞菌属（ Azomonas sp. ）和假单胞菌属（ Pseudomonas sp. ）。当然，也可将一种需要降解的物质作为样品中微生物的唯一碳源或氮源进行富集，而后分别挑选。别的，许多微生物对碳源的利用是不完整专一的，如以油脂为碳源的某些脂肪酶产生菌相同也可以分解淀粉或其
10、余糖类物质获取能源而生长。以石油等碳氢化合物为碳源的油田微生物，也能够利用一些糖类为碳源。拥有以上特征的微生物在一般土壤、水、及其余样品中也会存在。可是数量较少。. 依据微生物的生理特征在挑选一些拥有特别性质的微生物时，需依据该微生物独到的生理特征到相应的地址采样。如筛选高温酶产生菌时，往常到温度较高的南方，或温泉、火山迸发处及北方的堆肥中采集样品；分离低温酶产生菌时可到严寒的地方，如南北极地域、冰窖、深海中采样；分别耐压菌则往常到海洋底部采样。因为深海中生活的微生物能耐很高的静水压，如从海中筛到一株水活微球菌（Micrococcus aquivivus ）, 它能在 600 个大气压下生长。
11、分别耐高浸透压酵母菌时，因为其独爱糖分高、酸性的环境，一般在土壤中散布极少，所以，往常到甜果、蜜饯或甘蔗渣聚积处采样。若有人曾在花蜜中分别到一株能耐 30% 高糖的耐高浸透压的酵母菌。三、特别环境下采样1局部环境条件的影响值得注意的是微生物的散布除了自己的生理特征和环境条件综合要素的影响以外，还要受局部环境条件的影响。如北方天气严寒，年均匀温度低，高温微生物相对较少。但在该地域的温泉或堆肥中，却会出现为数众多的高温微生物。氧气充分的土层中按理只合适于好氧菌生长，实质上也有一些嫌气菌生活，原由是好气菌生长生殖耗费了土层中大批氧气，为嫌气菌创建了局部生长的有益环境，故一般土壤中也能分别到嫌气菌。大
12、海关于微生物来说是一个特别的局部环境，只管很多微生物也是经河水、污水、雨水或灰尘等门路而来，但因为大海独到的高盐度、高压力、低温及光照条件，使大海微生物具备特别的生理活性，相应也产生了一些不同于陆地根源的特别产物。前苏联学者发现， 20% 50% 的海鞘、海参体内的微生物可产生拥有细菌毒性和杀菌活性的化合物。别的，美国马里兰大学也曾从海绵体内的共生或共栖的细菌中分别到抗白血病、鼻咽癌的抗癌物质。日本发现深海鱼类肠道内的嗜压古细菌， 80% 以上的菌株能够生产 EPA 和 DHA ，最高产量可达 36% 和 24% 。笔者从鳕鱼肠道中分别到一株 pj20 细菌，产 EPA14.78mg/L ，在
13、 15 培育时 EPA 占脂肪酸的 12.7% 。日本也从大海 Thraustochvtrium aureum 中挑选到一株产 DNA 达 290mg/L 的菌株。从海洋中采样时，可参照此中不同种类微生物的散布规律：表层多为好气异养菌，基层因为有机质丰富，硫化氢含量高，厌气性腐败菌和硫酸盐复原菌许多，两层中则多为紫硫菌。拥有特别性质的微生物往常散布在一些特别的环境中。如得克萨斯州中南部的一个岩洞中存在着大批嗜碱性的，能进行氨氧化和产几丁质酶的微生物，其原由是这里生活这 2000 万只蝙蝠，它们每晚吃钓 5 万 lb （磅）昆虫，其排泄物造成了洞内 0m 深的丰富营养层，这种特别的环境对该种微生
14、物起了选择和富集的作用。还有人从侵害木船的一种蠕虫肠道中分别到既能固氮又能降解纤维素的微生物。从考拉 (Koala) 熊肠中也曾分别到萜烯分解酶的产生菌，这可能因为考拉专吃含有高萜烯的桉树类植物，给该种微生物创建了一个适合的生长环境。美国从用硝酸办理过的花生壳中分别到一株节杆菌，该菌以木质素为独一碳源，它对办理过的花生壳的消化率可达到63% ，再加入酿酒酵母使其蛋白质含量达到 13.6% ，可作为牛、猪、鸡饲料的增添剂。2极端环境条件的影响微生物一般在中温、中性 pH 条件下生长。但在绝大多半微生物所不可以生长的高温、低温、高酸、高碱、高盐或高辐射强度的环境下，也有少量微生物存在，这种微生物被
15、称为极端微生物。生活所处的特别环境，致使它们拥有不同与一般微生物的遗传特征、特别构造和生理机能，因此在冶金、采矿及生产特别酶制剂方面有着巨大的应用价值。嗜冷菌（thermophiles ）的最适生长温度为 15 ，在 0也可生长生殖，最高温度不超出 20 。主要散布于严寒的环境中，如南北两极地域、冰窟、高峰、深海和土壤等低温环境中。这种微生物在低温发酵时可生产很多风味食品且可节俭能源及减少中温菌的污染。最适生长 pH 在 8.0以上，往常在 pH9 10 之间的微生物，称之为嗜碱菌（ alkaliphiles ）。大批不同种类的嗜碱菌已经从土壤、碱湖、碱性泉甚至大海中分别获取。因为大多半碱湖伴有高盐，很多嗜碱菌同时也是嗜盐菌。该类菌所产生的酶如耐碱蛋白酶和碱性纤维素酶可作为清洗剂的舔加成分，也可将碱性淀粉酶用于纺织品工业。嗜碱菌中的基因还可以够用来调理其余细菌中基因产物的表达和分泌。嗜热微生物是嗜热菌最好的根源。有人从温泉和海底火山口分别出了极端嗜热菌。从意大利境内的喷硫磺气的火山口中分别到一种原始的微生物，在 pH2 和 90 时生长最好，其代谢种类极不平常，既能作为耗氧型自养菌将硫氧化成硫酸，使自己增殖，又能
