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1、神经干细胞的体外培养和外源基因在其中的表达神经干细胞（neural stem cells，NSCs）是一类可自我复制并分化成神经系统细胞的多能细胞，其在治疗神经退行性疾病、脊髓和大脑损伤等方面具有广阔的应用前景。体外培养是研究和应用NSCs最常用的手段，通过合适的培养条件，可以促进NSCs增殖和分化，并从中获得大量的神经元、神经胶质细胞和OLPs（oligodendrocyte progenitor cells）。此外，外源基因在NSCs中的表达也是神经科学领域的研究热点之一，通过引入特定的基因序列，可以实现NSCs的定向分化、细胞命运转化以及复杂神经网络的建立等功能。一、神经干细胞的培养方法
2、1.来源及分离NSCs在胚胎发育和成年人中均存在，来源包括胚胎干细胞、胚胎脑、成人大脑和它们的亚型等。如何高效、纯化地获取NSCs是体外培养的第一步。常用的NSCs来源及处理方法如下：（1）胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）：体外诱导ESC分化为NSCs的方法较为成熟，但ESC的来源受到道德和法规的限制，应用范围相对小。（2）胚胎脑：通过胚胎脑的悬浮培养、机械和化学分离等方法，可以将NSCs从中分离出来。（3）成人大脑：近年来的研究表明，成人大脑中也存在NSCs，可以通过基因表达谱分析或荧光标记的细胞颗粒来筛选NSCs，并在体外培养中进行进一步的繁殖和分化。2.培
3、养基的配方NSCs的培养需要一种复杂的培养基，其中至少应包括以下组分：营养成分、生长因子、抗生素、酶解液和缓冲液等。常见的培养基及其组分如下：（1）N2B27：可能是最常用的NSCs培养基，包括DMEM/Hams F12、N2和B27等组分。其中N2是一种无血清添加剂，是神经细胞特异性营养成分的混合液，可以提高神经小管的生长和稳定神经元表型。B27包括28种胱抑素、抗氧化剂和其他生长因子，已经被证明在维持NSCs的自我更新和神经分化中起重要作用。（2）Neurobasal：由具有抗氧化活性和脉冲响应因子的脑血管内皮细胞衍生的培养基。（3）DMEM/F12：经常加入N2和B27，以支持NSCs的
4、减少分化和生长。3.分化诱导NSCs存活时细胞内有完整的表观遗传调控系统，其表达谱受于复杂的调控网络。通过培养基的组分和特定的生长因子，可以向着特定的神经细胞类型诱导NSCs分化，包括神经元、星形胶质细胞和熟化的OLPs等。二、外源基因在神经干细胞中的表达外源基因在NSCs中的表达可以通过转染病毒、质粒转染、高效转染物质介导的转染等方法来实现。目前，最常用的转染载体是病毒，包括质粒病毒、腺病毒和逆转录病毒等。这些病毒将外源DNA序列嵌入NSCs的染色体DNA，从而实现在NSCs中的恒定表达。外源基因在NSCs中的表达可应用于下列研究领域：1.定向分化NSCs的分化方向是其未来的细胞命运。NSC
5、s的未分化状态支持着其自我信号，从而保持其多能性并促进其增殖。当细胞进入分化状态时，细胞开始表达一些特定的神经细胞类型和功能上的基因，并且停止增殖。外源基因的加入可以改变标准分化协议中的基因表达谱，以间接地操纵NSCs的命运。例如，人工过表达ATOH1基因可以在体外诱导成人NSCs分化成某种神经元类型。2. 细胞修复NSCs在体内可以游走到受损区域并成为解决方案的一部分。在体外，NSCs也可以被应用于维修或取代受损的神经组织。对这种应用的限制在于，NSCs很难定向分化成特定类型的细胞，并且在体内NSCs的寿命比较短。引入外源基因可能会在分化NSCs的方向上起作用。在治疗神经系统疾病方面，NSC
6、s和外源基因的联合应用表现出了良好的治疗效果。例如，在肌萎缩侧索硬化症治疗中，NSCs担任了产生可维持神经髓鞘的细胞类型的角色。3. 细胞命运重编程细胞重编程是将已分化细胞转变为全能状态的一种过程。这可以通过一些特定外源因素来完成，例如低分子化合物、mRNA、微RNA和外源基因等。外源基因可以促进NSCs的全能状态，并可以转化成多种类型的神经细胞。例如，人工过表达Pax6基因可以在体外将NSCs转化为星形胶质细胞，转录因子NeuroD1可以将NSCs转化为神经元。三、结论总之，NSCs在体外的培养和外源基因的引入是神经科学领域的前沿研究。在完善培养系统和了解细胞特异性之后，NSCs有望在解决神
7、经系统疾病方面发挥更广泛的作用。同时，NSCs的繁殖和分化过程可以使神经系统发育的过程被重新建造，以期获得更深入的理解。外源基因的应用也是研究神经科学中的一个难题，但这个难题前景十分光明，未来可以为应用、基础科学和神经学提供无限可能。四、神经干细胞在神经系统疾病治疗中的应用由于神经干细胞具有多能性、自我复制和分化能力，可以分化为多种神经元和胶质细胞，因此，在神经系统疾病治疗方面，神经干细胞具有广泛的应用前景。神经干细胞在临床上的应用主要包括以下方面：1. 脑损伤恢复神经干细胞可以分化为不同类型的神经元和胶质细胞，因此在脑损伤、中风和脑外伤等神经系统疾病的治疗中具有广泛的应用。神经干细胞移植后可
8、以促进细胞生长和组织修复，并调节神经元和胶质细胞的功能，从而改善神经系统疾病的症状。2. 神经退行性疾病治疗神经退行性疾病是由神经系统中神经元或神经元的突出部分遭受损害而引起的疾病，如阿尔茨海默病、亨廷顿病和帕金森病等。神经干细胞在治疗神经退行性疾病方面具有广泛的应用前景，能够分化成多种神经元和胶质细胞，并在神经退行性疾病患者中恢复受损的神经系统功能。3. 脊髓损伤治疗脊髓是人体神经系统的主要传导通路，如果脊髓受到损伤，就会影响神经信号的传递，导致不同程度的功能障碍。通过移植神经干细胞，可以促进脊髓的修复和再生，并最终使患者恢复损伤前的功能。4. 白质病变治疗白质是神经系统中的主要结构组成部分之一，由多神经突出部分（轴突）及其周围的神经胶质细胞组成。与白质相关的疾病包括多发性硬化症（MS）等，该疾病导致神经髓鞘遭受损害，导致轴突失去保护，最终导致神经元的死亡及功能障碍。神经干细胞可以分化为能够产生新的神经髓鞘的类脂分子的细胞，从而缓解白质病变的症状。总之，神经干细胞的应用具有广阔的前景，可促进神经系统疾病的治疗和康复。未来，人们对神经干细胞的理解将进一步深入，开发出更有效的治疗方法，能够更好地帮助患者重新获得健康。
