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1、精选优质文档-倾情为你奉上机能实验设计实验设计名称 ： 茶多酚与茶碱联合使用 对小鼠酒精代谢影响的初步探讨实验设计成员： 系（部）： 湘雅医学院临床五年制 班级： 临五1303班 联系电话： 专心-专注-专业一. 研究背景与设计思想近几年，随着茶文化的流行，人们在酒过三巡，意犹未尽之时，便会相约一起品茶，不仅是对茶道的继承，自身的修炼，更是因为，现代许多中西医学者和茶叶专家,都从不同角度阐述了茶能解酒毒1。我们对此很好奇，茶中，是哪些成分能够解酒？该种成分又是如何解酒的？资料显示，酒精在人体中，90%以上是在肝脏中代谢1，因此长期大量饮酒，会加重肝脏的负担，引起一系列的疾病。茶中含有茶多酚，是
2、一类多轻基酚类化合物的混合物,简称茶多酚,易溶于热水、乙醇、乙酸乙酷。茶多酚消除体内过量的自由基,避免生物学大分子的损伤2，并能抑制细胞色素P450参与亲电子代谢物的形成,参与辅酶n的电子传递链来终止自由基的反应3,此外,茶多酚可诱导或提高体内抗氧化酶系如SOD和GSH一PX等的活性来协同消除体内过量的有害自由基4。茶多酚能阻止自由基对肝细胞膜中不饱和脂肪酸的氧化损伤,以此缓解酒精对肝脏的损害，预防酒精毒性作用，达到一定的醒酒目的。茶中还有一有效成分，茶碱，是甲基嘌呤类药物。茶碱可以增加心排出量，增加肾小球滤过率和肾血流量，有利尿功能5。酒精在体内的代谢产物需通过肾脏排出体外，茶碱可以预防酒精
3、毒性作用并且醒酒，而茶多酚可以加速酒精的分解代谢，那么，二者同时在茶中，是否有协同作用？我们设计实验，配制茶多酚和茶碱的复合物，将其与茶多酚与茶碱单独作用做比较，看二者同时在体内，与其单独作用，是否有差别。另外，关于茶多酚碎玉酒精代谢的作用，我们在查找相关文章时，看到了一个矛盾之处，有文章说：“多酚作为抗氧化剂,可抑制乙醇氧化为乙醛6”又一篇学位论文提到：“茶多酚在代谢过程中，可能能使肝中ADH的活性增加7”，ADH是肝中的一类美文，可催化醇类氧化成醛。茶多酚可以增加ADH活性，也就是说茶多酚有助于乙醇氧化，那为何茶多酚又具有抗氧化作用，抑制乙醇氧化为乙醛？为了解答我们的疑问，我们将在实验中，
4、测量肝脏中ADH酶的活性，以做证明。二. 研究目的和主要研究内容我们希望通过本次实验，知道茶多酚与茶碱对于ADH酶活性的作用，以及二者复合使用，能否达到更加好的解酒效果，即能既不损害肝脏，又能加速酒精排出体外。我们通过对照实验达到目的，将一定数量且品种相同且健康的实验动物分成四组，A组灌入茶多酚与茶碱的复合试剂，B组灌入茶多酚制剂，C组灌入茶碱制剂，D组为空白对照组，灌入制剂后一段时间，再灌入相同量的酒精，隔一段时间观察四组小鼠的体态特征，测量其尿量，血醛，血醇等指标，再将四组小鼠肝脏取出，测量其肝脏的ADH酶活性，得出数据，总结结论。三. 研究方案与技术路线 （二）实验设计1、实验动物设计我
5、们选用SPFA级小鼠作为实验动物，有以下几点理由：1）、小鼠温驯、容易饲养、繁殖率高，适用于动物需求量大的实验，常用于药物筛选实验、药代动力学，在科研工作中被广泛利用。2）、SPFA级别小鼠仅带有已知的非病原微生物，对操作者威胁较少，且价格较便宜，易得，有利于控制成本。3）、肝和血量相对较大，易于得到样品，能在称重过程中减少实验误差。2、实验专业设计选用小鼠作为实验动物，用灌胃针给予茶多酚或茶碱或两者的混合剂，观察小鼠的醉酒指标：运动能力，对刺激的反应，精神状况等，观察小鼠的排尿，检测血醇，血醛，肝中的ADH,ALDH活性等指标。3、实验统计设计实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则
6、。（1）随机：选正常成年健康重相近的雄性小鼠40只（视情况可增大样本总量），将40只小鼠随机编号成A1-A10,B1-B10,C1-C10 ,D1-D10.称重并记录。 （2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照。（3）重复：本实验采用的是每实验小组有10只小鼠，具有一定的重复性。（4）数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。表1四组小鼠相关指标测定编号项目体重(KG)血醇（mg/ml）血醛（mg/ml）ADH(U/L)ALDH(U/L)A1.10总体均值BCD（总体均值=样本均值标准差；方差P）表2四组动物醉酒指标及排尿情况组别活动能力反应能力精神状
7、况排尿情况ABCD注：前三个各指标均以空白对照组为基准分为+，+，+，+四个等级，且空白对照组全为+。排尿情况以空白对照为+，排尿增加为+，减少为+，无排尿为0；若空白组无尿，则有少量尿为+多尿为+4、实验方法设计小鼠实验技术路线 B组对照组C组对照组D组对照组A组实验组组灌胃针灌入蒸馏水灌胃针灌入茶碱灌胃针灌入茶多酚灌胃针灌入茶多酚和茶碱30min灌胃针灌入白酒灌胃针灌入白酒灌胃针灌入白酒灌胃针灌入白酒观察小鼠的醉酒指标：运动能力、精神状况、反应能力（轻度骚扰）观察小鼠排尿情况60min眼球取血测血醇，血脂取肝组织测ADH、ALDH活性实验技术方法（1）随机抽样：随机40只健康的成年雄性小白
8、鼠随机平分成四组，并编号称重。（2）实验前培养：将小鼠放置在实验室（室温20-25摄氏度，光照周期12h，湿度适宜）培养三天到一周使其适应实验室环境，实验前12小时停止喂食，实验前2小时停止喂水。（3）小鼠经口灌胃给药方法：先保定动物,即用右手将小鼠尾巴提起，置于鼠笼或粗糙的平面上，当小鼠向前挣扎时，用左手的拇指和食指捏住小鼠两耳后颈背皮肤，翻转小鼠置于掌心，拉直后肢，以小指压住小鼠尾巴即可。在保定小鼠过程中，不要用力过大，勿握其颈部，以免窒息死亡。以灌胃器轻轻压其头部，使口腔与食道成一条直线，再将灌胃针沿上腭壁轻轻进入食道，当灌胃针进入约3cm左右时即达胃内。如果灌胃针的位置插入正确，小鼠可
9、自行吞服药，灌胃针插入位置不正确，小鼠会强烈挣扎，必须拔出重插，否则可能将药物灌入气管，造成小鼠死亡。注完药液后轻轻抽出灌胃针。小鼠一次最大灌胃量为：0.4ml/10g体重。（4）考虑到小鼠吸收茶多酚和茶碱量较少以及两种物质在小鼠体内产生效应的时间较延后（有相关文献实践）。所以将给药顺序进行调整，给予灌服茶多酚或茶碱30min后再给予灌服白酒。（5）参照文献*，乙醇的半数致死量为10.09g/kg,不致死最高用量为8g/kg，故实验用量应在4-7g/kg之间，此处取6g/kg。有条件可做一次预实验得出最佳用量。（6）观察小鼠的排尿情况和醉酒指标，可通过轻度骚扰小鼠来直观地初步得出小鼠的运动能力
10、、反应能力、精神状况，如表2记录。（6）取材：眼球取血（详见机能实验学P26）离心取上清液 颈椎脱臼处死小鼠，取肝组织 a.每只小鼠分别用 ADH ELISA活性检测试剂盒和ALDH ELISA活性检测试剂盒测小鼠肝脏中的ADH ALDH的活性。（详见小鼠ALDH（ADH）ELISA活性检测试剂盒说明书） b.用顶空-气相色谱法测定血清中的乙醇和乙醛的浓度【8】。（中南大学物理科学与技术学院双超所可代做）。 如表1记录。（7）实验数据的统计分析与评价 总体均值=样本均值标准差； 计算95可信限； 计算ABCD各组实验数据的方差P； 根据可信限和P值来反应实验数据的精度和可靠性。（三）可行性分析
11、:1、小鼠易得到，容易侍养，在科研工作中被广泛利用。2、实验流程简单清晰易于操作，重复性强，实验耗时短，实验现象比较直观。3、小鼠ALDH（ADH）ELISA活性检测试剂盒可以购买，气相色谱仪测定血清中的乙醇和乙醛的浓度可以交给第三方代做，不需要自己拥有仪器。（四）实验设计工作时间安排:1、共计3-7D 完成小鼠的适应性培养（可视为不占用时间）。2、共计1D 内完成对小鼠的各项实验操作，完成酶活性的检测。3、气相色谱仪部分耗时未知。四. 创新性与可行性创新性：目前，关于茶是否能解酒的争议一直存在，通过本次实验，可以进一步了解茶的解酒机理，为“茶是否能解酒”提出科学的解释做出理论基础。目前，市面
12、上对于解酒，一般有两种方法，一种是去医院打点滴，这种办发虽然有效，但是适用范围并不广，第二种办法，就是服用各种关于解酒的制药。这种方法存在两个问题，首先，其解酒效果与解酒速度有待商榷，再者，解酒药本身也有副作用，不宜经常服用。本次研究结果可以对解酒药的改善提供相关理论依据。本次实验通过对两种茶类有效成分的研究，可以指导人们饭后的饮茶习惯，比如每种茶中两种物质的含量均不相同，可以指导人们选用相对健康的茶类，也可以为制作供酒后服用的茶类提供理论依据。 可行性:1、小鼠易得到，容易侍养，在科研工作中被广泛利用。 2、实验流程简单清晰易于操作，重复性强，实验耗时短，实验现象比较直观。 3、实验中所测各
13、种指标均有成熟的测定方法。其中小鼠ALDH（ADH）ELISA活性检测试剂盒可以购买，气相色谱仪测定血清中的乙醇和乙醛的浓度可以交给第三方代做，不需要自己拥有仪器。参考文献1DiluzioNR,HartmanAD.Role of lipid peroxidation in the pathogenesis of the ethanol induced fatty liver. Fed ProcAm soc ExpBiol, 1967, 26: 143614422杨贤强,沈生荣,候京武,等.(一)表没食子儿茶素没食子酸酷对活性氧自由基的清除作用机 制J,中国药理学报,1994,15(4):350
14、3533盛丽,任爱梅.天然抗氧化剂茶多酚J,化学教育,2004(11):89,294曹明富.茶多酚对小鼠辐射损伤的防护效应J,茶叶科学,1998,18(2):1391445陈文武 王建军 刘进奎.氨茶碱静注致血压升高19例.河南大学学报：医学版.1996年 第2期 11-12页 6王岳飞 郭辉华 丁悦敏倪捷儿徐侠仲杨贤强.茶多酚解酒作用的实验研究.Journal of Tea2003, 29(3): 1451477王玲.表没食子儿茶素没食子酸酯对急性中毒小鼠乙醇吸收的影响及其可能机制.安徽大学硕士学位论文【8】叶怀庄1，李莉2 顶空一气相色谱法测定大鼠血液中乙醇和乙醛浓度的实验研究 邯郸医学高等专科学校学报 JOURNAL OF HANDAN MEDICAL COLLEGE 2004，17（6）
