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1、金边瑞香不定芽的增殖培养陈志萍 闵 炜（上海农林职业技术学院，上海松江：201600）摘要：通过两次单因子试验，研究了BA（0.55mgL-1）和NAA（0.11mgL-1）在金边瑞香不定芽增殖培养中的作用。BA在诱导产生不定芽的过程中起着主导作用。BA浓度在0.5mgL-1时，培养6周产生的不定芽总数不多，但有效芽（1cm）相对较多,平均3.9个，随着BA使用浓度增加，产生的不定芽总数增多，但有效芽数量减少，BA浓度在3 mgL-1以上时，平均只有1个有效芽。NAA浓度在0.20.5mgL-1范围内，平均有效芽数在3.83.6个，浓度增加到1mgL-1时，有效芽数减少到平均1.8个。试验确定
2、合适的不定芽增殖培养基为MS+ BA0.5mgL-1+ NAA0.2mgL-1。关键词：组织培养；金边瑞香；不定芽增殖；单因子试验金边瑞香（Daphan odora var. marginata）是瑞香科瑞香属的一个变种，叶缘金黄色，花淡紫红色，气味芬芳，与长春和尚君子兰、日本五针松一起被推崇为近代园艺三宝，为我国传统名花，也是世界名花而倍受人们喜爱，其市场销量也日益增长。在金边瑞香的产地仍然以扦插繁殖为主，这种繁殖方式容易使带病毒的植株繁殖后导致后代产生退化而影响其观赏价值。通过茎尖组织培养可以减少后代植株的病毒，而且繁殖系数大，适合于工厂化育苗。本试验在获得金边瑞香茎尖试管芽苗的基础上，研
3、究细胞分裂素和生长素在其组织培养快速增殖中的作用。1材料和方法1.1 试验材料切取在初代培养基中生长的金边瑞香愈伤组织上再生的23cm长的健壮芽苗，转接入不含植物生长物质的MS培养基（MS0）中，经二周左右的短期培养，选叶片展开、生长状况较一致的芽苗作增殖培养的材料。1.2培养基增殖培养基为MS基本培养基，添加3%蔗糖，并附加不同浓度的生长素（NAA）和细胞分裂素（BA），pH值5.8。根据前期试验的结果，设置两次单因子试验来分步筛选最佳的BA和NAA的浓度配比。首先固定NAA的浓度为0.2mg L-1，BA浓度变化在0.55mg.L-1范围，BA和NAA的配比组合见表1。表1 NAA0.2和
4、BA不同浓度组合Table 1 Combination of NAA0.2 and BA with different concentrations编号处理组合（mgL-1 ）1MS + BA0.5 + NAA0.22MS + BA1 + NAA0.23MS + BA2 + NAA024MS + BA3 + NAA0.25MS + BA4 + NAA0.26MS + BA5 + NAA0.2根据第一次试验的结果，再固定BA的浓度为0.5mg L-1， NAA浓度变化在0.11mg .L-1范围，得BA和NAA的配比组合见表2。表2 BA0.5 和NAA不同浓度组合Table 2 Combina
5、tion of BA0.5 and NAA with different concentrations编号处理组合（mgL-1）1MS + BA0.5 + NAA0.12MS + BA0.5 + NAA0.23MS + BA0.5 + NAA0.54MS + BA0.5 + NAA11.3 试验方法将在MS0培养基中生长状况较一致的芽苗剪成2cm长，转入分装50ml不同处理培养基的直径为6cm的培养瓶中，每瓶接一枚芽苗，每个处理接20瓶。培养温度241,光照强度20mol.m-2.s-1,光照时间12h.d-1。接入增殖培养基后一周开始观察各处理芽苗的生长状况，至第6周调查记录增殖的芽苗数，以
6、大于1cm长的芽为有效芽，按随机设计进行方差分析1，比较各处理的差异。2结果与分析2.1 BA对芽苗增殖生长的影响2.1.1 BA对芽苗生长的影响BA的使用浓度在0.5mgL-1时，培养6周芽苗的顶芽伸长1cm左右，茎基部生直径12cm左右的蓬松愈伤组织，上面萌生不定芽，长23cm，叶片展开正常。BA使用浓度在1mgL-1时，顶芽伸长量比在0.5mgL-1时要少，茎基部生直径3cm左右的蓬松愈伤团块，上面的不定芽粗短，大部分的长度不到1cm，并且叶片小而尖。BA浓度在2mgL-1时，茎基部的愈伤团更大，上面的不定芽小而密集，长度大于1cm以上的有效芽仅12枚。当BA使用浓度增加到3mgL-1至
7、5mgL-1时，接入的芽苗茎杆从中上部就开始肿大开裂，呈疏松的海绵状，愈伤团增大，但不定芽的数量减少，长度也都在0.5cm以下，有效芽都在1枚左右（见图版1）。2.1.2 BA对不定芽增殖的影响培养6周后计算各处理中芽苗增殖的有效芽数（长度大于1cm的不定芽），去除统计中出现的极端值，为方便计算，都取14个观察值(如表3)，对表3的数据作方差分析，得表4。表 3 BA 6种处理的有效芽数统计Table 3 Statistical form of the number of effective buds induced by 6 types of treatments of BA处理编号有效芽数
8、目（个）平均数1233333444445673.9 2111222333334452.6 3111111111222221.4 4111111111111111.0 5111111111111111.0 6111111111111111.0 表4 表3资料的方差分析Table 4 Variance analysis of the data of table 3变异来源DFSSMSFF0.01处理间误 差578102.9645.3520.590.58135.413.20总变异83148.32从表4的分析得到处理间的F值为35.41大于F0.01的值3.20，即BA不同浓度诱导产生不定芽的数目有极
9、显著的差异，故对BA的6种不同浓度产生不定芽的平均数作多重比较。由表4中误差的均方值（MS）计算得ES值为0.2，再查表1，得到不同处理组合有效芽数两极差之间所包含的个数（P）所对应的SSR0.01值，并求得各个P下的最小显著极差LSR得表5。表5 BA 6种处理的有效芽数目的最小显著极差Table 5 Minimum significance range of the number of effective buds induced by 6 types of treatment of BAP23456SSR0.013.74 3.89 4.01 4.09 4.14 LSR0.010.75 0
10、.78 0.80 0.82 0.83 根据表3中BA 6种处理的有效芽平均数，按照从大到小的顺序排列，并对照表5的各对应值，比较差异显著性见表6。表6 BA 6种处理的有效芽数目的差异显著性Table 6 Significance of the number of effective bud induced by 6 types of treatment of BA处理有效芽平均数（个）差异显著性（ 1%）BA0.53.9ABA12.6BBA21.3CBA31CBA41CBA51C由表6可见，BA浓度在0.5mgL-1时平均有效芽数为3.9个，极显著地多于其他浓度的有效芽数，BA的浓度在1mg
11、.L-1时，平均有效芽数2.6个，极显著地多于浓度在2mgL-15mgL-1时的平均有效芽数。随着BA浓度的增加，则丛生芽变得小而密集，但有效芽的数量显著减少。由此可以确定BA的浓度以0.5mgL-1为宜，下一步试验NAA浓度在0.11mgL-1范围内对不定芽增殖的效应。22 NAA对不定芽增殖的影响接入NAA不同浓度培养基中的芽苗经培养6周后，统计各处理的有效芽数（长度大于1cm的不定芽），去除统计中出现的极端值，为方便计算，都取15个观察值，如表7。表7 NAA 4 种处理的有效芽数目统计Table7 Statistical form of the number of effective
12、buds induced by 4 types of treatments of NAA处理编号有效芽数目（个）平均数11111112333444452.521222233335556783.831111122234568993.641111111111234441.8对表7的数据作方差分析得表8。表8 表7资料的方差分析Table 8 Variance analysis of the data of table 7变异来源DFSSMSFF0.05F0.01处理间误 差35640.98239.8613.664.283.19*2.784.16总变异59280.85从表8的分析得到处理间的F值为3
13、.19大于F0.05的值2.78，而小于F0.01的值4.16，即NAA不同浓度之间诱导产生不定芽的数目有显著的差异，故对NAA的4种不同浓度产生不定芽的平均数作多重比较。由表8中误差的均方值（MS）计算得ES值为0.53，再查表1，得到不同处理组合有效芽数两极差之间所包含的个数（P）所对应的SSR0.05值，并求得各个P下的最小显著极差LSR得表9。表9 NAA 4种处理的有效芽数目的最小显著极差Table9 Minimum significance range of the number of effective buds induced by 4 types of treatments of NAAP234SSR0.052.832.98 3.08LSR0.051.501.591.63根据表7中NAA 4种处理的有效芽平均数，按照从大到小的顺序排列，并对照表9的各对应值，比较差异显著性见表10。表10 NAA的4种处理的有效芽数目的差异显著性Table 10 Significance of the number of effective buds induced by 4 types of treatment of NAA处理有效芽平均数（个）差异显著性（ 5%）NAA0.23.8aNAA0.53.6aNAA0.12.
