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1、流过多少汗,流下多少泪,只为高考这一天；付出多少时间，付出多少努力，只为高考这一刻；高考这条路就算布满荆棘也要披荆而过，请相信天道酬勤,请相信付出一定会有回报，对自己布满信心，加油，祝高考成功顺利。1.（江苏卷.33）（9分)下表是几种限制酶辨认序列及其切割位点,图、图中标注了有关限制酶的酶切位点，其中切割位点相似的酶不反复标注。请回答问题：(1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段,通过_酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处在_态的大肠杆菌。（2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_,平板上长出的菌落，
2、常用R鉴定,所用的引物构成为图中_。(3）若aH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位,这两种酶 (填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。（4)若用au3A I切图1质粒最多也许获得 种大小不同的N片段。【答案】（1）BclI和Hind 连接 感受 （2)四环素 引物甲和引物丙（3) 都不能 (4)7（)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因,应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR技术规定两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链。【考点定位】基因工程,限制酶，连接酶,重组质粒【名师点睛】此题是对
3、基因工程的考察，解答本题的核心在于理解重组质粒中标记基因的作用,在插入目的基因时不能破坏标记基因,故选择限制酶须注意;PC扩增基因时，两种引物结合的部位相反,延伸的方向相反;限制酶具有特异性，不同的限制酶辨认不同的序列,判断某种限制酶能否切割某片段，应根据该片段中与否具有限制酶的辨认序列。2.(课标卷40)某一质粒载体如图所示,外源DN插入到Apr或Ttr中会导致相应的基因失活(Ampr表达氨苄青霉素抗性基因,tr表达四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BHI酶切后,与用BaHI酶切获得的目的基因混合,加入DA连接酶进行连接反映，用得到的混合物直接转化大肠杆菌,成果大肠杆菌有的未被转化,有的被
4、转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是具有环状目的基因、具有质粒载体、具有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答问题: （1）质粒载体作为基因工程的工具，应具有的基本条件有_(答出两点即可)。而作为基因体现载体,除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终结子。（2)如果用品有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅具有环状目的基因的细胞是不能辨别的,其因素是_；并且_和_的细胞也是不能辨别的,其因素是_。在上述筛选的基本上,若要筛选具有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用品有是_的固体培养基。（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体,其D复制所
5、需的原料来自于_【答案】（1）可以自我复制、具有标记基因、具有一种至多种限制酶切割位点(答出两点即可）(2)两者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长 具有质粒载体 具有插入了目的基因的重组质粒（或答具有重组质粒) 两者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长 四环素 (3)受体细胞【考点定位】基因工程【名师点睛】本题以图文结合的形式，综合考察学生对基因工程技术的熟记和理解能力。解决此类问题的核心是，熟记并理解有关的基本知识、形成知识网络，从题图中挖掘出隐含的信息,据此结合每个问题情境进行图文转换、实现对知识的整合和迁移。3（新课标卷.40）图（a）中的三个NA片段上依次表达出了
6、oR 、BamH I和Sau3AI三种限制性内切酶的辨认序列与切割位点,图(b)为某种体现载体示意图(载体上的coRI、Su3AI的切点是唯一的)。根据基因工程的有关知识,回答问题：(1）经BaH I酶切割得到的目的基因可以与上述体现载体被_酶切后的产物连接，理由是_。(2)若某人运用图(b）所示的体现载体获得了甲、乙、丙三种具有目的基因的重组子,如图(c）所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中体现目的基因产物的有_，不能体现的因素是_。（）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常用的有_和_,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是_。【答案】（）Su3A 两种梅切割后产生的片段具有相似
7、的黏性末端(2）甲和丙 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终结子的下游，两者目的基因均不能转录（3）oliDNA连接酶 T4DNA连接酶 4NA连接酶【考点定位】基因工程的原理及技术【名师点睛】.拟定限制酶的种类(1)根据目的基因两端的限制酶切点拟定限制酶的种类应选择切点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择Pst。不能选择切点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择Sm。为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用Pst和EcoR两种限制酶(但要保证质粒上也有这两种酶的切点)。(2)根据质粒的特点拟定限制酶的种类所选限制酶
8、要与切割目的基因的限制酶相一致，以保证具有相似的黏性末端。质粒作为载体必须具有标记基因等,因此所选择的限制酶尽量不要破坏这些构造，如图乙中限制酶ma会破坏标记基因;如果所选酶的切点不止一种,则切割重组后也许丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。2.基因体现载体中启动子、终结子的来源(1)如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，在构建基因体现载体时，不需要在质粒上目的基因的前后端接上特定的启动子、终结子，由于目的基因中已具有启动子、终结子。（2)如果目的基因是通过人工措施合成的，或通过A文库获得的,则目的基因是不含启动子和终结子的。若只将基
9、因的编码序列导入受体生物中，目的基因没有启动子、终结子,是无法转录的，因此，在构建基因体现载体时,需要在与质粒结合之前,在目的基因的前后端接上特定的启动子、终结子。4（天津卷.)（2分)人血清白蛋白(HA） 具有重要的医用价值,只能从血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA（r）的两条途径。（1）获取HSA基因，一方面需采集人的血液，提取_合成总cNA,然后以cDN为模板，采用CR技术扩增HS基因。下图中箭头表达一条引物结合模板的位置及扩增方向,请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。 (2)启动子一般具有物种及组织特异性,构建在水稻胚乳细胞内特异体现rS的载体，需要选择的启
10、动子是_(填写字母,单选）。A.人血细胞启动子 B.水稻胚乳细胞启动子 C大肠杆菌启动子D.农杆菌启动子 （)运用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中,需添加酚类物质，其目的是_。(4）人体合成的初始HS多肽，需要通过膜系统加工形成对的的空间构造才干有活性。与途径I相比，选择途径I获取rSA的优势是_。（5）为证明rHSA具有医用价值,须确认HSA与_的生物学功能一致。【答案】(12分）(1)总RNA（或mRNA）(2）B（3）吸引农杆菌移向水稻受体细胞,有助于目的基因成功转化（4)水稻是真核生物,具有膜系统，能对初始rHA多肽进行高效加工（5)HA【考点定位】本题考察基因工程有关内容。【名师点睛】
11、本题结合生产rHSA的实例考察目的基因的获取、基因体现载体的构建、转化措施、受体细胞的选择、目的基因的检测与鉴定。属于容易题。解题核心是明确PR技术的原理，明确两条引物结合位置和合成子链的方向相反。5.(新课标2卷.0)（15分）下图表达通过核移植等技术获得某种克隆哺乳动物（二倍体)的流程。回答问题:(）图中表达正常细胞核,染色体数为2n，则其性染色体的构成可为_。过程表达清除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至合适时期再进行,去核时常采用_的措施。代表的过程是_。（2)通过多次传代后,供体细胞中_的稳定性会减少,因此,选材时必须关注传代次数。（3)若获得的克隆动物与供体动物性状不完全相似,从
12、遗传物质的角度分析其因素是_。(4）与克隆羊“多莉（利）”培养成功同样,其她克隆动物的成功获得也证明了_。【答案】（15分)(1）或XY 显微操作(去核法) 胚胎移植（2)遗传物质 （3）卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的形状产生影响（）已经分化的动物体细胞核具有全能性。【考点定位】核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植【名师点睛】本题以“获得某种克隆哺乳动物(二倍体)的流程图”为情境，综合考察学生对核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植的熟记和理解能力。解决此类问题的核心是，熟记并理解有关的基本知识、形成知识网络，“读懂”流程图中的每个箭头的含义，据此结合每个问题情境进行图文转换、实
13、现对知识的整合和迁移。6.(海南卷.3)基因工程又称为DNA重组技术，回答有关问题:(1)在基因工程中,获取目的基因重要有两大途径，即_和从_中分离。（)运用某植物的成熟叶片为材料,同步构建cD文库和基因组文库,两个文库相比,DA文库中具有的基因数目比基因组文库中的少，其因素是_。（3)在基因体现载体中，启动子是_聚合酶辨认并结合的部位。若采用原核生物作为基因体现载体的受体细胞,最常用的原核生物是_。(4)将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时,常用的携带目的基因的金属颗粒有_和_颗粒。【答案】（分）(1）人工合成 生物材料(每空2分，共4分，其她合理答案可酌情给分）（2）cDA文库中只具有叶细胞已转录（或已体现）的基因，而基因组文库中具有该植物的所有基因（5分，其她合理答案可酌情给分)(3）RNA（2分） 大肠杆菌（或答细菌）（2分）（4）金粉 钨粉(每空1分，共2分）【考点定位】基因工程【名师点睛】(1)目的基因的获取有从基因文库中获取和人工合成两类措施。（2)基因体现载体涉及目的基因、启动子、终结子和标记基因。(3)目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法；导入动物细胞常用显微注射技术，导入微生物细胞常用感受态细胞法。.（上海卷九)回答下列有关遗传信息传递与体现的问题。在图2所示的质粒PZHZ11（总长为3.6kb,1kb=10对碱基因)中，acZ基因编码半乳糖苷酶
