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1、DNA提取所需试剂及配制方法1. TE (pH80) buffer (灭菌)10xTE Buffer（pH 7.4， 7.6， 8.0）组份浓度 100 mM Tris-HCl， 10 mM EDTA 配制量 1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4， 7.6， 8.0) 100mL 500 mM EDTA(pH8.0) 20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。1M Tris-HCl buffer（pH7.4， 7.6， 8.0）组份浓度 1 M Tris-HCl配
2、制量 1L配制方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。pH 值浓 HCl7.4约70mL7.6约60mL8.0约42mL4. 将溶解定容至 1L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大, 温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 10% (w/v) SDS 溶液(灭菌)10(W/V)SDS 组份浓度 10(W/V)SDS配制量 100mL配制方法1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中
3、，加入 约80mL的去离子水，68C加热溶解。2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。3将溶液定容至100mL后，室温保存。3. Tris-饱和酚(pH80)溶液Tris- HCl 平衡苯酚1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实 验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚 必须在160C对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断 裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我 们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起
4、严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所 有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤， 忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯 酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20C，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先 在室温下放置使其达到室温，然后在68 C水浴中使苯酚充分溶解。 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶 的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 加入等体积的
5、1M Tris-HCl（ pH8 .0 ） ，使用磁力搅拌器搅拌1 5 分钟，静置使其充 分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1M Tris-HCl （pH8.0）,使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其 充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。4. 酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）溶液苯酚/氯仿/异戊醇1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25： 24： 1）。氯仿 可使蛋白（25 ： 24 ： 1） 质变性并有助于液相与有机相
6、的分离，而异戊醇则有助于消除抽 提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24： 1）均匀混合后，移 入棕色玻璃瓶中4C保存。5. 氯仿6. 3 mol/L 醋酸钠溶液（灭菌）3 M醋酸钠 组份浓度3 M醋酸钠（pH5.2）配制量 100mL配制方法1.称取40.8gNa0Ac3H20 置于100200mL烧杯中，加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解。2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。3. 加入去离子水将溶液定容至 100mL。4. 高温高压灭菌后，室温保存。7. 无水乙醇，75%乙醇9. 蒸馏水（灭菌）10.终浓度为20 mg/mL的RNA酶（也
7、可不加）琼脂糖凝胶电泳所需试剂及配制方法1. 琼脂糖2. 1XTAE缓冲液，50XTAE缓冲液50xTAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1 .称量下列试剂，置于1 L 烧杯中。Tris242 gNa2EDTA2H2O37.2 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。4. 加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。3. 6X loading buffer4. DNA Marker100 bp DNA Ladder Marker150 bp DNA Ladder Marker卩骼的Agarose)祖豁的Agarose)1,200 bp=卿h60D bp450 bp300 bp150 bp200 bp ONA Ladder Marker门鳴的Agarose)ooo ODD O&.2 It t1：4004,000 bp=1|8二 988 館2Q0 bp
