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1、大孔树脂吸附分离实验一、实验目的1、了解大孔树脂的使用方法；2、掌握利用大孔树脂的静态和动态吸附分离操作；3、掌握大孔树脂的洗脱方法；4、学习吸附等温曲线、吸附动力学曲线和洗脱曲线的测定方法。二、实验原理大孔树脂是一种具有大孔结构的有机高分子共聚体，是一类人工合成的有 机高聚物吸附剂。因其具多孔性结构而具筛选性，又通过表面吸附、表面电性 或形成氢键而具吸附性。一般为球形颗粒状，粒度多为 20-60 目。大孔树脂有 非极性(HPD-100,HPD-300,D-101,X-5,H103)、弱极性(AB-8, DA-201,HPD- 400)、极性(NKA-9,S-8,HPD-500)之分。大孔吸附
2、树脂理化性质稳定，一般 不溶于酸碱及有机溶媒,在水和有机溶剂中可以吸收溶剂而膨胀。大孔树脂吸附技术以大孔吸附树脂为吸附剂，利用其对不同成分的选择性 吸附和筛选作用，通过选用适宜的吸附和解吸条件借以分离、提纯某一或某一 类有机化合物的技术。吸附分离依据相似相容的原则，一般非极性树脂宜于从 极性溶剂中吸附非极性有机物质，相反强极性树脂宜于从非极性溶剂中吸附极 性溶质，而中等极性吸附树脂，不但能从非水介质中吸附极性物质，也能从极 性溶液中吸附非极性物质。大孔吸附树脂吸附技术广泛应用于制药及天然植物中活性成分如皂甙、黄 酮、内脂、生物碱等大分子化合物的提取分离以及维生素和抗生素的提纯、化 学制品的脱色
3、、医院临床化验和中草药化学成分的研究等。它具有吸附快，解 吸率高、吸附容量大、洗脱率高、树脂再生简便等优点。大孔树脂吸附分离操作步骤：(1) 树脂的预处理目的是为了保证制剂最后用药安全。树脂中含有残留的未聚合单体，致孔 剂，分散剂和防腐剂对人体有害。预处理的方法：乙醇浸泡24h-用乙醇洗至 流出液与水1： 5不浑浊一用水洗至无醇味一5%HCl通过树脂柱，浸泡2-4h-水 洗至中性一2%NaOH通过树脂柱，浸泡2-4h水洗至中性，备用。(2) 上样将样品溶于少量水中，以一定的流速加到柱的上端进行吸附。上样液以澄 清为好，上样前要配合一定的处理工作，如上样液的预先沉淀、滤过处理，pH 调节，使部分
4、杂质在处理过程中除去，以免堵塞树脂床或在洗脱中混入成品。 上样方法主要有湿法和干法两种。（3）洗脱先用水清洗以除去树脂表面或内部还残留的许多非极性或水溶性大的强极 性杂质（多糖或无机盐），然后用所选洗脱剂在一定的温度下以一定的流速进 行洗脱。（4）再生 再生的目的：除去洗脱后残留的强吸附性杂质，以免影响下一次使用过程 中对于分离成分的吸附。再生的方法：95%乙醇洗脱至无色，再用 2%盐酸浸泡，用水洗至中性，再 用 2%NaOH 浸泡，再用水洗至中性。注意：再生后树脂可反复进行使用，若停止不用时间过长，可用大于 10% 的 NaCl 溶液浸泡，以免细菌在树脂中繁殖。一般纯化某一品种的树脂，当其吸
5、 附量下降 30%以上不宜再使用。三、试剂及仪器 仪器：紫外可见分光光度计，电子天平，恒温水浴振荡器，玻璃层析柱，恒流 泵试剂：AB-8大孔树脂，大豆异黄酮，无水乙醇，盐酸，氢氧化钠四、实验内容1、树脂的预处理用95%乙醇浸泡AB-8树脂24h后用去离子水洗至中性。然后用5%HC1溶液浸 泡3h,用去离子水以洗至中性；再以5%NaOH溶液浸泡3h,水洗至中性后备 用。2、大豆异黄酮的定量检测方法配置200 口 g/mL的芸香叶苷/乙醇标准溶液，分别取0.1mL,0.2mL,0.3mL,0.4mL,0.5mL.0.6mL,0.7mL的上述溶液，加水稀释至5mL，采用紫外分光 光度法，在261nm
6、处测定吸光度，绘制标准曲线。芸香叶苷/乙醇标准溶液200卩g/mL0.10.20.30.40.50.60.7吸光值0.1280.2580.3510.4850.6280.7450.8543、静态吸附等温线的测定准确称取湿树脂10g置于三角烧瓶中，加入50mLl%的大豆异黄酮溶液，放 置于恒温水浴振荡器，控制温度30C，吸附时间为lOmin, 20min, 30min, 40min, 50min, 60min,90min,120min,150min时分别取1mL样液测吸光度，然后以时间t 为横坐标，C/C0为纵坐标绘制吸附等温线（C为不同时间取样溶液的浓度，C0 为初始样液的浓度）。每次测定为吸取
7、1毫升稀释5倍，大豆异黄酮原始含量是232.9 口 g/mL时间min10203040506090120150吸光值0.4740.4750.4040.3120.2750.2360.1900.1730.152大豆异黄 酮含量 ug/ml76.9877.1465.5450.5144.4638.0930.5727.7924.364、动态吸附实验平衡吸附量 q= A C*V/m= (76.98-24.36) *50mL/10.04g =2621 u g/g体积 (mL)4812162024吸光度0.0420.3110.5130.5660.6220.653体积 (mL)283236404448吸光度0.
8、6860.7020.7300.7450.7680.768体积 (mL)535761656973吸光度0.7970.8000.8130.8140.8250.806水洗洗出液吸光度0.419，则C水洗脫=13.6 口 g/mL动态吸附量 q=73 *C-(C1 *4+c2*4+ . +C12 *4) -(C13 *5)-(C14 *4+ 0+C18*4)-20*C/10.02 =1512 u g/g水洗脱5、动态洗脱实验对上述完成动态吸附的树脂柱静置 30min 后用去离子水淋洗，收集水洗流 出液中大豆异黄酮的含量。然后用 70%的乙醇以 20d/min 的流速洗脱。每 5mL 为一个收集单位，分别测定洗脱液中大豆异黄酮的浓度，以洗脱剂的体积为横 坐标，以收集的洗脱液浓度为纵坐标绘制动态解吸曲线。计算解吸的大豆异黄 酮的含量及解吸率。体积(mL)51014182226稀释倍数10101001005050吸光度0.0100.0310.2710.3040.3390.171体积(mL)303438424650稀释倍数101010101010吸光度0.3570.5000.3400.2310.1940.128
