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1、抗型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义抗型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义2011-02-27 刘升云曾庆馀陈肃标谢素和许杰州肖征宇黄少弼 【摘要】目的了解抗型胶原抗体在类风湿关节炎(RA)中的临床意义。方法以改进的酶联免疫吸附法(ELISA)检测179例RA患者和171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性型胶原抗体水平。结果RA患者抗天然和抗变性型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期RA患者各为30.0%和36.7%。其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%，健康人二者均为2.5%。抗天然型胶原抗体阳性RA患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(
2、P0.05)。抗变性型胶原抗体和抗天然型胶原抗体同时阳性RA患者的CRP平均水平较高。结论抗天然型胶原抗体可以作为RA的一个辅助诊断指标。抗天然与抗变性型胶原抗体的检测有助于判断RA病情活动性。 【关键词】关节炎，类风湿；抗型胶原抗体；酶联免疫吸附测定；C反应蛋白 Anti-type collagen antibodies in rheumatoid arthritis LIU Shengyun,ZENG Qingyu,CHEN Subiao (Department of Rheumatology,Shantou University Medical College,Shantou 51503
3、1,China) 【Abstract】ObjectiveTo investigate the clinical significance of anti-type-collagens antibody in rheumatoid arthritis (RA).MethodSerum IgG antibodies to native and denatured type collagens (anti-nc and anti-dc ) were detected in 179 patients with RA by an improved enzyme linked immunosorbent
4、assay (ELISA),and their clinical significance was analysed with corresponding clinical materials.ResultsIn RA,the positive rates of anti-nc and anti-dc were 22.3% and 36.9%;in early RA were 30.0% and 36.7%,respectively.In other rheumatic diseases the positive rates were 3.5% and 31.6%,respectively a
5、nd were both 2.5% in healthy controls.Anti-nc positive RA showed higher prevalence rate of RF and higher scores of patients global assessment of disease activity (P0.05).The presence of anti-nc and anti-dc concomitantly was associated with high CRP level in RA patients.ConclusionAnti-nc could serve
6、as a supplemental parameter in diagnosing RA and together with anti-dc may help evaluate the disease activity. 【Key words】Rheumatoid arthritis;Anti-type collagen antibody;Enzyme-linked immunosorbent assay;C-reactive protein 抗型胶原抗体(antibodies to type collagen)与类风湿关节炎(RA)病情活动性、严重性的关系目前仍有争论。本研究参照Fujii等
7、1提出的实验条件检测179例RA患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗型胶原抗体，探讨其在RA中的临床意义。结果报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料 1.1.1病人组：为1994年9月至1999年3月在汕头大学医学院第一附属医院风湿科住院、门诊、随访的RA患者，共179例，全部符合1987年美国风湿病协会(ARA)的RA分类标准2。其中男性53例，女性126例，年龄1776岁，平均46.3岁。其中病程1年之内，X线未出现明显骨质破坏者(以下简称早期病例)30例。 1.1.2对照组：共289例，分为两组：一组为同期在汕头大学医学院第一附属医院风湿科门诊或住院的非RA的其他风湿性疾病
8、患者171例；另一组为正常对照组，共118名。 1.2抗型胶原抗体的体测 参照Fujii等1的方法。 1.2.1微量反应板的包被及封闭：正常羊血清于62 加热20 min，加入固体Tris (0.05 mol/L)、NaCl (0.15 mol/L)和2 mol/L HCl，调pH值至8备用(BNGS)。天然型胶原在46 水浴中加热20 min，即为变性胶原。 将天然型和变性型胶原分别溶解于0.05 mol/L的醋酸中，浓度为3 mg/ml。0.02 mol/L磷酸缓冲液(PB) pH 7.6稀释胶原溶液，使浓度为40 g/ml，加入微量反应板孔，每孔100 l，保鲜膜覆盖，4 过夜。 在与待
9、检血清标本进行温育之前，包被好的微量反应板用含0.05%吐温20的生理盐水溶液洗涤3次，然后每孔加入100 l BNGS，室温(2428 )下封闭30 min，洗涤液洗涤3次。 1.2.2检测：BNGS稀释待检及阳性对照、阴性对照血清，转入微量反应板的微孔中，设二孔平行，每孔100 l，同时设空白对照。室温温育2 h，生理盐水-吐温溶液洗涤3次。含25%BNGS的0.1 mol/L TBS pH 8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG，每反应孔加入100 l，室温温育2 h，洗涤。将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸-磷酸缓冲液pH 5.0中，使各自浓度分别为0.05%和0.017%，加入
10、反应孔，每孔100 l，37 温育30 min后每孔加入终止液1.25 mol/L硫酸50 l终止反应，酶标分光光度计492 nm处测吸光度(A)值。 1.2.3结果判断：以正常血清的平均A值加3个标准差作为正常值上限，待检血清A值超过者即被认为是阳性。 1.3统计学处理 计量资料数据采用t检验，计数资料数据采用2检验。 2结果 2.1ELISA工作浓度的选择：为便于比较，选择工作浓度时以天然型胶原作为包被抗原，测定血清抗天然型胶原抗体水平。 参照文献3的方法进行。结果表明，型胶原包被液浓度以40 g/ml，第二抗体辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG稀释度以1400，血清以140稀释为最佳。 2.
11、2RA患者及对照组血清抗型胶原抗体检测结果：179例RA患者中，抗天然型胶原抗体阳性者40例，阳性率22.3%，显著高于健康人和疾病对照组(3.5%和2.5%)(P0.05)；抗变性型胶原抗体阳性者66例，阳性率36.9%，与正常对照组(2.5%)相比差异有极显著性(P0.000 1)，与其他风湿病(31.6%)差异不大。30例早期RA患者抗天然型胶原抗体阳性9例，阳性率为30.0%。 抗天然型胶原抗体对RA诊断的敏感性为22.3%，特异性为96.9%，抗变性型胶原抗体对RA诊断的敏感性为36.9%，特异性为80.3%。 2.3抗型胶原抗体与RA病情的关系：抗天然型胶原抗体阳性患者RF阳性率高于阴性组(79.5%对61.8%，P0.041)，病情活动评分较高(8.59.5对6.61.5，P0.027)。抗变性型胶原抗体阳性RA患者血清CRP平均水平较阴性组高(24.8%对19.6%，P0.003)。晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数、干燥综合征并发率、类风湿结节的发生率、功能分级二组间无统计学差异。IgG、IgM、IgA、-球蛋白，ESR水平、ANA阳性率及滴度、放射学病情进展及使用SAARDs的比例等方面在阳性组与阴性组无差异。抗变性型胶原抗体阳性的早期RA患者ESR、CRP水平较阴性组增高(P0.05)。
