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1、一、仪器与试药A glien t 1100高效液相色谱系统（G1310A 一元泵，G1313A自动进样器，G1316A柱温箱, G1314A紫外检测器）,Zo rbax XDB C8 柱（5八 m, 416mm X 150mm ）;马来酸依那普利对 照品购自中国药品生物制品检定所，批号1007052200401;依那普利拉和依那普利双酮、马 来酸依那普利片（规格5mg）均由河南省泌阳盘古药业有限责任公司提供；试剂：乙月青，色谱 纯，其他试剂均为分析纯。二、色谱条件用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙青-磷酸盐缓冲溶液（0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用 磷酸调pH为2.2） （25： 75）为
2、流动相，流速1.5，检测波长为215nm,柱温为50C，进 样量:20八l。含量测定：照高效液相色谱法（中国药典1990年版二部附录34）测定。系统适用性试验， 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙醇-水-1%磷酸（70 : 30 : 1.5）为流动相，检测波 长为215nm，理论塔板数按依那普利峰计算应不低于700。测定法 取本品20片，精密称 定，研细，精密称取适量（约相当于马来酸依那普利25mg），置25ml量瓶中，加水适量， 振摇使马来酸依那普利溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，注入 液相谱仪，记录色谱图，量取峰面积；另取以五氧化二磷为干燥剂，在50C减压干燥4
3、小 时的马来酸依那普利适量，制成每ml中含1mg的溶液，同法测定，计算，即得。含量测定：照高效液相色谱法（附录V D）测定。色谱条件与系统适用性试验用辛烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，以己青-磷酸盐缓冲溶液（0.01mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调pH 为2.2）（25:75）为流动相，检测波长为215nmn，柱温为50C，取马来酸依那普利对照品 与依那普利拉对照品适量，加水溶解分别制成每1ml中含0.1mg的溶液。另取依那普利双 酮对照品适量，加流动相超声处理使溶解，制成每1ml中含0.1mg的溶液。取上述三种溶 液用水稀释成每1ml含马来酸依那普利、依那普利拉、依那普利双酮各为0.02mg的
4、混合溶 液，取20gl，注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按依那普利峰计算不低于300，拖尾 因子应不大于2.0。马来酸峰与依那普利拉峰的分离度应符合要求，依那普利拉、依那普利 与依那普利双附各峰的分离度应大于4.0测定法取本品20片，精密称定，研细，精密称取 适量（约相当于马来酸依那普利20mg），胃10Oml量瓶中，加水适量，振摇，使马来酸依 那普利溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液20gl，注入液相色谱仪，记 录色谱图；另取马来酸依那普利对照品适量，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中约 含0.2mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。检查：含量均匀度照高效液
5、相层析法（中国药典1985年版二部附录29页）测定。仪器及 性能要求用十八烷基硅烷键合硅胶为填科；乙醇-水-1%磷酸（50 ： 1.5）为流动相，流速 1ml/min；柱温为50C ；检测波长为215nm。塔板数按马来酸依斯普利峰计算应不得低于 700。供试品溶液的制备与测定取1片，置10ml量瓶内，加水1ml振摇使溶解，用甲醇稀 释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液6pl注入滚相层析仪，记录层析谱， 量取峰面积，另取马来酸依那普利对照品，同法测定，计算，即得。除合量差就于15% 的不得多于1片并不得超过土20%外，应符合规定。（中国药典1985年版二部附录45 页）。照高效液相色
6、谱法（中国药典1995年版二部附录V D）测定。色谱条件与系统适用性试验用辛基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液（取磷酸 二氢钾136mg，加水800ml溶解，用磷酸调节pH至2.0，用水稀释至1000ml，摇匀，即 得）一乙腈（1:1）为流动相，检测波长为215nm，理论板数按依那普利峰计算应不低于1000。测定法 取本品10粒，精密称定，倾出内容物，囊壳用小毛刷刷净后，精密称定，内 容物混匀，研细，精密称取细粉适量（约相当于马来酸依那普利10mg），置50ml量瓶中， 加上述磷酸盐缓冲液适量，充分振摇使马来酸依那普利溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精 密量取续滤液20pl注入液相色谱仪，记
7、录色谱图；另取经50C减压干燥4小时的马来酸依 那普利对照品适量，精密称定，加上述磷酸盐缓冲液制成每1ml中含0.2mg的溶液，同法 测定，按外标法以峰面积计算，即得。（胶囊）检查：含量均匀度照高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录VD）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙醇一水一1%磷酸溶 液（70： 30： 1.5）为流动相，检测波长为215nm。理论板数按依那普利峰计算应不低于7 00。测定法 取本品1粒，将内容物倾入10ml量瓶中，囊壳用少量甲醇分次洗净。洗液 并入量瓶中，充分振摇使马来酸依那普利溶解，用皿稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取 续滤液20
8、pl，注入液相色谱仪，量取峰面积；另精密称取经50C减压干燥4小时的马来酸 依那普利对照品，用甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，同法测定，按 外标法以峰面积计算。应符合规定（中国药典1995年版二部附录XE）。溶出度 取本品， 照溶出度测定法（中国药典1995年版二部附出录XC第二法），以水250ml为溶剂，转谏 为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液适量，滤过，照含量测定项下的方法， 精密量取续滤50pl注入液相色谱仪，量取峰面积；另精密称职经50C减压干燥4小时的马 来酸依那普利对照适量，用水溶解并定量稀释制成每1ml中约含20pg的溶液。同法测定， 按外标法以
9、峰面积计算出每粒的溶出量。限度为标示量的75%。应符合规定。其他 应符 合胶囊剂项下有关的各项规定（中国药典1995年版二部附录IE）。含量测定：根据含量均匀度项下测得的结果，计算出平均含量，即得。三、方法与结果1系统适用性试验取马来酸依那普利对照品与依那普利拉适量加水溶解并制成每1ml中含0.1mg的溶液，另 取依那普利双酮适量，加流动相超声处理使溶解，制成每1ml中含0.1mg的溶液，取上述 三种溶液用水稀释成每1ml中含马来酸依那普利、依那普利拉、依那普利双酮各为 0.02mg的混合溶液，进样。理论板数按依那普利峰计算不低于300，拖尾因子应不大于2.0。 马来酸峰与依那普利拉峰的分离度
10、应符合要求，依那普利拉、依那普利与依那普利双附各峰的分离度应大于4.02样品测定取本品细粉适量，加流动相使马来酸依那普利溶解并制成每1m l中含2mg的溶液，作为供 试品溶液；精密量取适量,用流动相稀释制成每1m l中含0.1mg的溶液，作为对照溶液; 取对照溶液20八l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程 的15%，再精密量取供试液20八l注入液相色谱仪，记录谱图至主成分峰保留时间的3倍。测定法 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于马来酸依那普利20mg)， 胃10Oml量瓶中，加水适量，振摇，使马来酸依那普利溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤 过，精密
11、量取续滤液20印l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取马来酸依那普利对照品适 量，精密称定，加水溶解并定量制成每1ml中约含0.2mg的溶液，同法测定，按外标法以 峰面积计算，即得。分别取马来酸依那普利对照品和供试品细粉适量，精密称定，分别加溶剂制成0.2mg/ml的 马来酸依那普利溶液。取供试品溶液，滤过。分别取续滤液和对照品溶液进样分析图。按外 标法以峰面积计算供试品中马来酸依那普利的含量。测定供试品3批，结果马来酸依那普利 的含量分别为标示量98.5%99.3%和98.8%。采用USP25方法测得结果相应地分别为98.6%、 99.5%和98.8%。两种方法的测定结果一致。四、线性范围精密称
12、取马来酸依那普利对照品20. 44mg，于50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作 为对照品储备液；分别精密量取上述对照品储备液3mL (60%)、4mL (80%)、5mL (100%)、6mL (120%)、7mL (140% )于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇 匀，即得，取上述溶液各20?l注入液相色谱仪，记录色谱图，得线性回归方程为A=1 73 56 .0 21 *C- 97 49 5. 70 0 r=0. 99 97 ( n=9)。结果表明：马来酸依那普利在 122.64p g/mL286.16p g/mL浓度范围内，线性关系良好。以信噪比S/N=10计算，本法对马来酸 依那
13、普利的检测限为，以信噪比S/N=3计算，检测限为。五、进样精密度取标准曲线试验下浓度为(204.40|J g/mL)的溶液20p L，连续进样6次，记录色谱图 峰面积RSD = 0.44% (W2.0%)，说明进样精密度良好。六、回收率取马来酸依那普利对照品适量，分别按处方比例的80%、100%、120%精密称定，置100ml 量瓶中，再加入同比例的辅料适量，每个浓度各三份，共九份，加水适量，振摇使马来 酸依那普利溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取标准 曲线下中间浓度的溶液为(204.40p g/ml)作为对照品溶液，精密量取上述溶液20p l注 入液相色谱仪，按外
14、标法以峰面积计算回收率，回收率=99.07%RSD% =1.02 %(n=9)。结果表明：该方法的加样回收率符合要求。采取标准加人法测定方法的回收率。分别精密称取同一份已知含量的供试品细粉6份，分置 50ml量瓶中，分别精密加人马来酸依那普利对照品储备液5、7、9ml，照样品测定项下 的方法操作。得方法的回收率为(99.8 士 0.1)%，n=6七、酸破坏试验、碱破坏试验、氧化破坏试验取样品三份(0.9g/份)，各置25mL量瓶中，用流动相适量溶解后，第一份加0. 5moL/L 盐酸溶液5mL，第二份加0.5moL/L氢氧化钠溶液5mL，第三份加30%过氧化氢溶液1mL， 三份样品均置水浴加热
15、30min，放冷，第一份及第二份分别用0.5moL/L氢氧化钠溶液、0.5moL/L盐酸溶液调pH至中性。三份样品加流动相定容至25mL,摇匀，滤过，取续滤 液20p L注入色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的三倍。从色谱图看，杂峰与主峰能 较好地分离。八、溶出度取本品，照溶出度测定法（中国药典2000年版二部附录X C第一法），以水500ml为溶剂， 转速为每分钟100转，经30分钟时取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取马 来酸依那普利对照品适量，加水制成每1ml中含20gg（规格10mg）或10gg（规格5mg）的溶液， 照含量测定项下的方法自“分别精密量取对照品溶液和供试品溶液”
16、起依法测定，计算每片的 溶出量。限度为标示量的75%，应符合规定。溶出度 取本品，照溶出度测定法（中国药典1995年版二部附录X C第一法），以水500ml 为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经30分钟时，取溶液滤过，弃去初滤液，取续 滤液作为供试品溶液。另取经50C碱压干燥4小时的马来酸依那普利对照品适量，精密称 定，用水稀释成每1ml含马来酸依那普利20pg的溶液，作为对照品溶液，精密量取供试品 溶液与对照品溶液各20pl，注入液相色谱仪，按含量测定项的色谱条件，依法操作，计算 出每粒的溶出量，限度为标示量的75%，应符合规定。其它应符合胶囊剂项下有关的各项 规定（中国药典1995年版二部附录I E）。溶出度取本品，照溶出度测定法（附录X C第一法），以水500ml为溶出介质，转速为每分钟 100转，经30分钟时取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取马来酸依那普利对照 品适量，加水制成每1ml中
