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1、紫外光谱法测定食品中防腐剂实验目的 1.进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的结构和工作原理。2.掌握利用苯甲酸和山梨酸的紫外吸收光谱图。 3.学会用标准曲线法测定样品中苯甲酸和山梨酸含量。实验原理 1食品在储存、运输过程中易发生腐蚀、变质，因此常在食品中添加少量防腐剂。苯甲酸和山梨酸及其钠盐、 钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。 苯甲酸具有芳香结构， 在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。山梨酸具有,-不饱和羰基结构，在波长250nm处有*跃迁的K吸收带，且吸光度与浓度的关系符合朗伯比尔定律，因此可根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性鉴定和定量测定。 2由于食品中
2、防腐剂用量很少， GB2760-2011 规定0.2-1.5g/kg， 并且食品样品中其它的成分也可能对防腐剂的测定具有干扰作用， 因此一般可预先将样品中的防腐剂与其它成分进行分离，再经过提纯和浓缩进行测定。常用的分离方法包括蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验采用溶剂萃取法，先用HCl酸化样品，再用乙醚从样品中萃取出苯甲酸和山梨酸；萃取物经过碱性溶液（NaOH）溶解，用乙醚稀释后 进行紫外光谱检测。 仪器和试剂 1.紫外可见分光光度计 751G型（上海分析仪器厂），分析天平 ，1.0cm石英比色皿2.HCl溶液（0.05molL-1,0.1molL-12 molL-11:1）、NaHCO3溶液（1%
3、） 、NaCl 、 乙醚 、苯甲酸 、山梨酸。3.试样（ 酱油、果汁、果酱等流状食品）实验步骤1.样品预处理准确称取样品1.5-2.5g，置于150mL分液漏斗中，加入40mL蒸馏水，用蒸馏水冲洗取样器皿，将洗液并入分液漏斗。加入适量粉状NaCl，待溶解后加入0.5mL1:1HCl。依次用30mL、25mL、20mL乙醚萃取样品溶液，合并萃取液,弃去水相，用2份30 mL0.05molL-1HCl洗涤乙醚萃取液，弃去水相。用3份20mL1% NaHCO3溶液萃取乙醚溶液，合并萃取液。用2 molL-1HCl酸化，转移至250 mL分液漏斗中。依次用30mL、25mL、20mL乙醚萃取，（如有残
4、渣可用少量石油醚溶解）合并乙醚萃取液并转移到100mL容量瓶用乙醚定容，然后取定容后的试样2mL于10mL容量瓶定容，供紫外光谱测定。2.标准试样制备苯甲酸（山梨酸）标准贮备液（1.000g/L） ：准确称量经过干燥的苯甲酸0.05g（105干燥处理2h）于100mL烧杯中，用适量乙醚溶解，转移到50mL容量瓶稀释定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。 苯甲酸标准溶液（32mg/L） ：准确移取苯甲酸储备液1.6mL于50mL容量瓶 中，加入乙醚定容。 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸（山梨酸）标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL 、 2.00mL和2.50mL于5个10mL
5、容量瓶中，用乙醚定容。得到浓度分别为1.6mg/L、3.2mg/L、4.8mg/L、6 .4 mg/L、8 .0mg/L溶液。3.用紫外可见分光光度计测定将暗电流闸门处在关的位置，将开关放在校正上，然后启动电源正常后再启动主机。将波长刻度选在210nm处，置光源为氢灯。调暗电流使电表指针为零，灵敏度旋钮顺时针旋三圈，此时灵敏度透光率1%电表指针偏三小格。取处理后的试样，用1cm石英吸收池，以乙醚为参比，在波长210-310nm范围内测定吸收光谱，记录吸收波长，吸收强度，根据吸收峰波长及强度确定防腐剂种类。具体操作如下：调暗电流为零，灵敏度旋钮顺时针转三圈，使透光率电表指针偏三小格；将参比液推入
6、光路，透光率置于100%，选择开关扳到“X1”上。拉开闸门使单色光进入参比样后，射到光电管上，调节狭缝使电路表指针大致到零上，再用灵敏度旋钮准确调在零上，推回闸门。然后将试样置于光路中，打开闸门，电流表指针偏离灵位，此刻旋转读数盘，使电流表示数为零，这时读数盘指针所指的吸光度就是试样的吸光度。4.制定工作曲线用上面的测定方法，以乙醚为参比，在波长228nm处分别测定苯甲酸标样，记录苯甲酸K吸收带最大波长处的吸光度（波长为228nm时的吸光度）。数据记录见表1,。如果试样防腐剂是山梨酸在波长为250处用同样方法测定 。5.食品试样测定取处理好的试样，按上述测定其K吸收带的吸光度。记录出的结果数据
7、记录和处理数据计算测定次数 12345由以上数据，用最小二乘法计算浓度与吸光度间线型回归方程A=kC+b的系数k及常数b好，并计算相关系数r，根据测定次数和置信度99%要求，检验相关系数r，当r大于0.959符合要求。绘制工作曲线：以C为横坐标，A为纵坐标作直线；将试样测定结果标在坐标上，在直线上找到对应的横坐标Cx，然后计算试样中苯甲酸含量； m为试样质量若以苯甲酸钠含量计算 结果分析： 按照同样实验步骤平行完成5次测定，记录测定结果，Q检验后求平均值、标准偏差s、相对标准偏差sr 食品试样测定数据及结果分析测定次数 12345Cxssr问题讨论1.是否可用苯甲酸的B吸收带进行定量分析？2.萃取过程常出现乳化或不分层现象，应采取什么方法解决？3.如果样品中同时存在苯甲酸和山梨酸两种防腐剂，是否可以不经分离分别测定它们的含量？参考文献1.刘淑萍，高筠等编著.分析化学实验教程 M.北京： 冶金工业出版社，20042 黄晓钰，刘邻渭主编.食品化学综合实验M.北京：中国农业出版社，2002（邬学清编）
