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1、一、前 言生物安全实验室主要用于从事涉及病原微生物的实验检疫和检测，由于从事微生物的检疫和检测关系工作人员的身体安全、健康以及工作环境的卫生，所以要求从事检疫和检测的工作人员具备相应的专业知识，并执行完善、严格的实验操作规程。本手册作为生物安全实验室工作手册使用，指导工作人员使用和管理生物安全实验室。二、 本实验室的危险性评估当实验室活动涉及传染或潜在传染性生物因子时，应进行危害程度评估。危害程度评估应至少包括下列内容：生物因子的种类（已知的、未知的、基因修饰的或未知传染性的生物材料）、来源、传染性、致病性、传播途径、在环境中的稳定性、感染剂量、浓度、动物实验数据、预防和治疗。危害程度评估应由
2、适当的有经验的专业人员进行，本实验室的由主任 负责完成。2.1 样本的生物学危险评估根据规定，本实验室（BSL-2级）主要从事出入境动物的检验检疫；以及出入境水产品的检验，涉及的生物学危险因子及其评估见表1。 表1 实验样本及其生物学危险评估序号可能接触的生物因子的名称、种类 危险性类别致病性传播途径 感染剂量浓度 预 防 或 治 疗 措 施1牛鼻气管炎病毒2牛赤羽病病毒3456空气7口腔8皮9血液2.2 实验试剂的生物学危险性评估存在生物安全危害可能的实验试剂必须进行生物学危险评估，评估原则遵照2.1。 表2 常用的实验试剂及其危险性评估序号使用试剂名称 危险性类别致病性传播途径感染（中毒）
3、剂量、浓度预防或治疗措施1化学中毒血液2肠道感染皮3呼吸道感染口腔4空气567892.3 通风系统的危险性评估表3 通风系统及其危险性评估序号可能的危险性部位（名称） 可能的危险性类别致病性传播途径 感染剂量、浓度预防或治疗措施1排风管道实验过程中的生物因子累积在管道表面（见表1）空气 未能确定每半年进行一次熏蒸消毒2高效滤器实验过程中的生物因子截留在高效滤器迎风面（见表1）空气未能确定每天定时启动安装在排风机箱内的臭氧发生器，进行消毒；更换时由专业公司的技术人员按规程更换、包装、销毁。2.4 水电系统的危险性评估表4 水电系统及其危险性评估序号可能的危险性部位（名称） 可能的危险性类别致病性
4、传播途径 感染剂量、浓度预防或治疗措施1洗眼器的排水实验过程中的生物因子意外溅入眼睛而应急冲洗，累积在管道表面（见表1）口腔冲洗完毕，加入56升含氯消毒剂，30分钟之后用大量的自来水冲稀，排入城市污水处理体系2电 器实验过程中的生物因子累积在电器表面（见表1）皮肤1每周一次，用湿毛巾沾3%的H2O2消毒剂溶液搽抹消毒。 每天顶时启动紫外线等进行30分钟的消毒2.5 仪器设备的危险性评估表5 仪器设备及其危险性评估序号仪器设备名称 可能的危险性致病性传播途径 感染剂量、浓度预防或治疗措施1洗眼器实验过程中的生物因子累积在电器表面皮肤每周一次，用湿毛巾沾3%的H2O2消毒剂溶液搽抹消毒。2生物安全
5、柜3高压灭菌器456789三、操作管理规程3.1 生物安全柜操作规程【启动准备】1 如紫外灯为关闭，请关闭紫外灯；2 启动安全柜的鼓风机和照明灯，检查进风口和排风口并确认它们未被覆盖、处于正常状态；3 在操作使用之前，鼓风机至少应运行15分钟。【擦抹消毒】1 用70%酒精、2%碱性脱水戊二醛或消毒效果相近、无腐蚀性消毒剂对安全柜内的所有工作面进行擦抹消毒。【材料和设备】1 把材料和设备放置于安全柜内的工作面；2 任何物品放置均不能超出进风格栅的前后风口；在安全柜内工作面应隔离污染物，减少来回操作的次数；4 不能使用明火的本生灯（煤气炉）；5 禁止使用任何闪点在25华度以下的易燃物质。【空气净化
6、】l 材料和设备放置于安全柜内后应允许运行23分钟。【运行操作】 1 运行操作时应选用适宜的服装、长袖袖套，编织袖口和橡胶手套；2 尽量减少安全柜内的来回操作次数，并采用适宜的消毒措施。【终末净化与擦抹消毒】1 从安全柜内取出材料与仪器之前，系统至少应运行23分钟；2 完成操作后应进行终末消毒，擦抹消毒方法同上。3 熏蒸消毒生物安全柜内的污染清除时，可将适量的多聚甲醛(空气中的终浓度达到08)放在电热板或电热盘上(在生物安全柜外进行控制)。然后在生物安全柜内放置第二个放有比多聚甲醛多10 的碳酸氢铵的加热板或盘。第二个盘上覆盖一个能够从远处将其移走的盖子(如连接一个能够从生物安全柜外拉动的绳子
7、)，从而尽量减少对甲醛气体的提前中和。如果相对湿度低于70 ，在使用强力胶带如“管道密封胶带”(ducttape)密封前部封闭板前，还要在安全柜内部放置一个开口的盛有热水的容器。如果前部没有封闭板，则可以用重型塑料布(heavy gaugeplastic，heeting)粘贴覆盖在前部以保证气体不会泄漏进入房间【关闭】l 关闭鼓风机和照明灯。3.2 BSL-2实验室操作规程【准备】样本准备应在样品室内完成。【启动】1、 启动排风风机；2、 启动生物安全柜1、2；3、 启动送风风机；4、 启动空调机。系统运行至少十分钟，检查压差，核心室压差正常范围应在-10Pa,缓冲室压差正常范围应在0Pa。【
8、人员进入】1、 系统参数处于正常状态，人员方可进入；2、 人员进入时应更换工作服，按缓冲间1 淋浴间 缓冲间2 核心实验室的顺序进入。【物品进入】1、 实验人员进入核心实验室后，物品方可进入；2、 物品应从传递窗输送进入。【实验进行】1、 实验操作应于生物安全柜内完成；2、 实验用废水应用专用的接水桶盛接；3、 带上备用更换的清洁工作服，留置于淋浴间内。【物品消毒】1、 实验结束，实验物品应置于高压灭菌器内灭菌；2、 高压灭菌应遵循高压灭菌器的操作规程。【人员退出】1、 实验操作完成，实验物品已完成高压灭菌，方可认为实验结束；2、 实验结束后，人员应从进入路线退出，在缓冲室内洗手，更换工作服，
9、并用密闭的塑料袋负压包装；3、 进入淋浴室，冲淋全身，并换上清洁工作服。【系统关闭】1、 关闭空调机；2、 关闭送风系统；3、 在确认生物安全柜内紫外线灯完成消毒后，关闭生物安全柜；4、 关闭排风机。【系统消毒】1、 紫外线消毒定时于每天上午7：007：30、下午5：306：00，如需加班未能在此时段完成，应事先调节。2、 排风系统采用臭氧消毒，与紫外线灯同时进行。【应急】1、 实验室内如遇样品溅入眼睛，请脚踏洗眼器开关冲洗眼睛；2、 如遇紧急停电，应急照明即自动启动，人员从正常路线退出。3、 如遇意外事故，击碎报警盒，按下按钮报警。【特别注意】1、 人员进入实验室内，紫外线灯应关闭，以免灼伤
10、皮肤与眼睛；2、 洗眼器使用完毕后，洗眼水应视危险性大小决定是否置于高压灭菌器内灭菌。3.3 实验操作规程331样品的接收与开启接收和打开样品的人员应当了解样品对身体健康的潜在危害，并接受过如何采用常规预防措施的培训，尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此。样品要在生物安全柜内打开，并准备好消毒剂。332移液管和移液辅助器的使用1应使用移液辅助器，严禁用口吸取。2所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染。3不能向含有感染性物质的溶液中吹人气体。4感染性物质不能够用移液管反复吹吸混合。5不能将液体从移液管内用力吹出。6刻度对应(Marktomark)移液管不需要吹出最后一滴液体，因此最好使用这种移
11、液管。7污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移液管应当在消毒剂中浸泡18，24小时后再进行处理。8盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内，而不能放在外面。9固定有皮下注射针头的注射器不能够用于移液。应当用钝头导管替代针头。可以用工具打开瓶塞后再用移液管取样，从而避免使用注射器和针头。10为了避免感染性物质从移液管中意外滴出而扩散，在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。333避免感染性物质的扩散1为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为23mm并完全封闭，手柄(shanks)的长度应小于6cm以减小振动。或者采用一次性
12、灭菌棉签。2使用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环。3为了避免产生气泡和气溶胶的扩散，不要在玻片上进行触酶试验，而应当采用试管、毛细管或盖玻片法。4准备高压灭菌和或处理的废弃样品和培养物应当放置在防漏的容器内，如实验室废物袋。5在每一阶段工作结束后，必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。 334生物安全柜的使用1应参考国家标准和相关文献，介绍生物安全柜的使用方法和局限性。并发给工作人员书面的操作步骤、安全或操作手册。应明确注明当出现溢出、破损或不良操作时，安全柜就不再能保护操作者。2生物安全柜必须运行正常时才能
13、使用。3生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。4安全柜内应尽量少放置器材或样品，不能阻碍后部的气流循环。样品在放人安全柜内的工作区前需要清除表面污染。5安全柜内不能使用酒精灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器。允许使用微型电加热器，但最好使用一次性无菌接种环；6所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过观察挡板看到。7尽量减少操作者身后的人员流动。8操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。9实验记录、移液管以及其他物品不能够阻碍前面的空气格栅，因为这将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。10工作完成后以及每天下班前，应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭。 11工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行5分钟。 335 避免感染性物质的注入
