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1、病原学检查B.1 血涂片的制作 用一次性采血针在耳垂或指端采血，婴儿可从拇趾或足跟采血。取血在表面洁净、无刮痕的载玻片上涂制薄血膜和(或)厚血膜。用推片的左下角刮取血液4l5l，再用该端中部刮取血液1.0l1.5l。将左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左，由里向外划圈涂成直径0.8cm1cm的圆形厚血膜。厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5个10个白细胞为宜。用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两张玻片保持250350角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。B.2 染色 B.2.1 吉氏染色 先用甲醇固定薄血膜。成批染色时，将血膜
2、朝一个方向插入染色缸中，或每对载玻片血膜朝外插入染色缸中，倒入新配制的2%吉氏原液（2mL吉氏原液与98mL蒸馏水或PBS缓冲液混匀)渗没厚、薄血膜，30min后，向染色缸中注入自来水或PBS缓冲液至溢出，除掉染液表面浮渣，将染色缸中残余的染色液倾出，加入新水，反复冲洗23次，然后取出玻片，将血膜朝下插在晾片板上晾干。单张血膜染色可取蒸馏水或PBS缓冲液2mL加入吉氏染色12滴，混匀后滴在厚、薄血膜上，20min30min后，水洗、晾干。B.2.2 瑞氏染色 用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水滴。在薄血膜上加瑞氏染液58滴，染色1min2min。然后再加58
3、滴蒸馏水于薄血膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10min。用清水轻轻冲去染液，晾干。 B.3 血涂片检查 在染色后的血膜上加一滴香柏油，用光学显微镜油镜检查。以检查厚血膜为主，薄血膜主要用于虫种鉴别。着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸粒细胞颗粒呈鲜红色，嗜中性粒细胞核呈紫蓝色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈蓝色或淡蓝色，疟原虫核呈红色。除环状体外，其他各期均可查见疟色素。疟原虫形态见表B.1和表B.2。以查完整个厚血膜，未查见疟原虫者判为阴性。根据疟原虫形态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。表B.1 四种疟原虫薄血膜形态鉴别(吉氏染色)时期形态间日
4、疟原虫恶性疟原虫三日疟原虫卵形疟原虫被寄生红细胞大小形状颜色斑点胀大褪色薛氏点出现稍晚，红色，细小数多正常正常或稍紫茂氏点红色，粗大数少正常或缩小正常齐氏点淡红色，微细正常或稍胀大卵圆形或边缘呈伞矢状褪色薛氏点出现较早粗大，数多小滋养体(环状体)大小核胞浆色素较大，约占红细胞直径的1/31个较薄无小环状体较小，约占红细胞直径1/6, 大环状体与间日疟原虫相似1或2个小环状体纤细，大环状体与间日疟原虫相似无中等1个较粗厚偶见细小褐色颗粒中等1个较粗厚无大滋养体大小核胞浆色素色素较大多见1个阿米巴样，常含空泡黄褐色，细小，杆状，散在分布较小1或2个圆形，空泡不显著黄褐色，细小，结成团块后，呈黑褐色
5、较小1个带状，空泡不显著深褐色，粗大，沿边缘分布较小1个圆形，空泡不显著棕黄色，较粗大未成熟裂殖体大小核胞浆色素较大2个以上圆形或不规则，空泡消失黄褐色，分布不匀较小2个以上圆形，空泡消失黑褐色团块状较小2个以上圆形，空泡消失深褐色，分布不匀较小2个以上圆形或卵圆形，空泡消失棕黄色，分布不匀成熟裂殖体大小裂殖子色素大于正常红细胞1224个，常为1618个，排列不规则。裂殖子较大黄褐色，常聚集一侧小于正常红细胞826个，常为818个，排列不规则。裂殖子较小，黑褐色团块小于正常红细胞612个，常为8个，常排列如菊花状。裂殖子较大深褐色，常聚集中央小于正常红细胞614个，常为8个，排列不规则。裂殖子
6、较大棕黄色，聚集中央或一侧雌配子体大小形状核胞浆色素大于正常红细胞圆形1个，较小，深红色，位于一侧深蓝色黄褐色，均匀散在较大新月形，两端尖锐1个，较小，深红色，位于中央深蓝色黑褐色，紧密分布于核周围小于正常红细胞园形1个，较小，深红色，位于一侧深蓝色深褐色，均匀散在小于正常红细胞圆形1个，较小，深红色，位于一侧深蓝色棕黄色，散在雄配子体大小形状核胞浆色素 大于正常红细胞园形1个，较大，淡红色，位于中央浅蓝色黄褐色，均匀散在较大腊肠形，两端钝园1个，较大，淡红色，位于中央浅蓝色或淡红色黑褐色，松散分布于核周围小于正常红细胞圆形1个，较大，淡红色，位于中央浅蓝色深褐色，均匀散在小于正常红细胞圆形1
7、个，较大，淡红色，位于中央浅蓝色棕黄色，散在表B.2 四种疟原虫厚血膜形态鉴别(吉氏染色)时间间日疟原虫恶性疟原虫三日疟原虫卵形疟原虫小滋养体（环状体）较大。核1个，较大，胞浆较厚。常呈！或，状较小。核12个，较小，胞浆纤细。常呈！、飞鸟、V和断环状中等。核1个，较大，胞浆粗厚。常呈 环状或鸟眼状大小与间日疟原虫相似，胞浆致密，核较大。大滋养体较大。呈阿米巴样，形状不规则。核位于胞浆之中或外边，胞浆常缩成圆形或断裂成数块。色素分布不匀较小。常呈圆形，色素细小或结成12个团块中等。常呈圆形，色素粗大大小与间日疟原虫相似，胞浆呈深蓝色，核较大裂殖体较大。裂殖子1224个。裂殖子较大较小。裂殖子82
8、6个。裂殖子较小较小。612个。裂殖子大于间日疟原虫裂殖体大小与间日疟原虫相似，裂殖子614个，核较大配子体较大。圆形，色素粗大。雌配子体较大，核小，胞浆深蓝色，雄配子体较小，核大，胞浆浅蓝色雌配子体新月形，雄配子体腊肠形与间日疟原虫相似，但较小。色素较粗大卵圆形，大小与间日疟原虫相似， 雌配子体核致密，偏于一侧，雄配子体核疏松色素黄褐色，细小。杆状，或结成粗大颗粒。分布不匀黄褐色，颗粒细小，结成团块后，呈黑褐色。配子体色素粗大，分布于核周围有时小滋养体可见色素，深褐色，较粗大。沿边分布色素颗粒较大，呈深棕色，分布弥散被寄生红细胞常见红细胞“影子”和薛氏点可见红细胞“影子”和茂氏点可见红细胞“影子”小滋养体时即可见薛氏点其他常可查到各阶段的疟原虫仅见小滋养体(或)和配子体。一般不见大滋养体和裂殖体常可查到各阶段疟原虫常可查到各阶段疟原虫
