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1、分析方法预验证方案方案名称：XXXX有关物质测定方法预验证方案方案编号：版本号： 01版起草人/日期:审核人/日期:审核人/日期:批准人/日期:目录1. 概述 12. 分析方法 12.1 试剂 12.2 对照品 12.3 样品 12.4 仪器 12.5 色谱条件 22.6 溶液的配制 22.7 测定方法 32.8 计算 33.方法验证 33.1 验证项目、验证方法及接受标准 33.2 系统适用性 53.3 专属性 73.4 精密度 113.5 线性 123.6 定量限及检测限 153.7 准确度 163.8 溶液稳定性 184.版本历史 201. 概述本品为XXXX注射液，规格为XXXX。本品
2、各国药典均未收载，本方法是参照欧洲药 典（EP10.4）、美国药典（USP43）、中国药典2020年版收载的xxxx原料质量标准及英 国药典（BP2020）收载的xxxx注射液质量标准及xxxx注射液进口注射标准（I物质A） 项下的有关物质方法，采用中国药典2020 年版四部通则 0512 高效液相色谱法，建立了 本品的有关物质方法。本预验证实验是为了确保该分析方法能够适用于当前本品有关物 质的测定。验证参数包括：系统适用性、专属性、重复性、精密度、线性、定量限（LOQ）、 检测限（LOD）、准确度和溶液稳定性。2. 分析方法2.1 试剂试剂名称级别批号厂家2.2 对照品名称批号含量来源2.3
3、 样品样品名称批号规格来源2.4 仪器名称品牌型号编号2.5 色谱条件色谱柱：C18, 250x4.6mm, 5pm或效能相当的色谱柱;检测波长： XXXnm；柱温：40口；流速： 1.0ml/min；进样体积： 20pl；流动相A： 0.2%磷酸氢二胺（pH7.5）,流动相B：甲醇-异丙醇（87:13）。梯度洗脱条件：时间（min）流动相A（%）流动相B（%）XXXXXXXXXXXXXXX2.6溶液的配制2.6.1 流动相流动相 A：取磷酸氢二胺2g，加水1000ml溶解，用磷酸调pH值至7.5，过滤，取滤液,即得；流动相B:量取甲醇1000ml,超声，即得。2.6.2 溶剂0.02mol/
4、L磷酸氢二钠溶液（pH8.3）：取磷酸氢二钠2.84g，加水1000ml使溶解，用 磷酸调节pH值至&3,混匀，即得；稀释液：取0.02mol/L磷酸氢二钠溶液（pH8.3） 650ml，加甲醇-异丙醇（87:13） 350ml，混匀，即得。2.6.3 系统适用性溶液取XXX2.5mg，置100ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，再移取1ml置5ml量 瓶中，加物质A系统适用性对照品15mg，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2.6.4 供试品溶液精密量取本品lml,置25ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2.6.5 对照溶液精密量取供试品溶液lml,置200ml量瓶中，
5、用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。2.6.6 灵敏度溶液（0.05%）精密量取对照溶液lml,置10ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。2.7 测定方法精密量取空白溶液（稀释液）、系统适用性溶液、灵敏度溶液、供试品溶液和对照溶 液各20卩1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。2.8 计算 采用自身对照法以峰面积计算各杂质和总杂的含量，计算公式如下：杂质（） = AxxFx 1%AS其中：AX指供试品溶液中各杂质的峰面积；AS指对照溶液中物质A的峰面积；F为各杂质的校正因子（杂质A按2.0计，其他均按1.0计）；1%指对照溶液的稀释百分数；总杂为各杂质含量之和。2.9 结果判定2.9.1 系
6、统适用性 系统适用性溶液色谱图中，各峰的分离度应符合要求，理论板数按物质 A 峰计算不低于 2000；灵敏度溶液色谱图中，物质 A 峰的信噪比应不小于 10。2.9.2 杂质限度供试品溶液色谱图中如有峰，杂质 B 峰面积不得大于对照溶液主峰面积 0.6 倍（0.3%），杂质 A 峰面积乘以校正因子 2.0 不得大于对照溶液主峰面积 0.6 倍（0.3%）； 其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积 0.4 倍（0.2%）；各杂质含量的和不得大 于 1.0%，小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。3. 方法验证3.1 验证项目、验证方法及接受标准验证项目验证方法接受标准系统 适用性步骤：1）按方
7、法配制空白溶液、灵敏度溶液、系 统适用性溶液各进样1针；对照溶液连 续进样3针；1）计算对照溶液连续进样3针的主峰面 积 RSD%；3）计算回进对照溶液的主峰面积与连续 进样3针对照溶液主峰面积平均值之 比。1）空白溶液色谱图中，无干扰；2）系统适用性溶液色谱图中，理论板数不低于 2000 （按物质A峰计算），物质A与杂质A的分 离度应不小于3.0；物质A与前后杂质的分离度 不小于1.5；3）对照溶液连续进样3针，主峰面积的RSD%不 得过5.0%；4）每分析完6针及序列结束前均需回进一针对照 溶液，回进对照溶液主峰的峰面积与连续进样3 针对照溶液的主峰面积平均值的比值在 90.0%110.0
8、%之间；5）灵敏度溶液色谱图中，物质A峰信噪比应不 小于10。专属性步骤： 分别配制如下溶液：1）空白溶液（稀释液）；2）系统适用性溶液；3）供试品溶液；4）对照溶液；5）灵敏度溶液；6）空白辅料溶液；7）酸、碱、氧化、高温、光照破坏的供 试品溶液；8）酸、碱、氧化、咼温、光照破坏的空 白辅料溶液；以上溶液各配制1份，进样1针，分析 其专属性（DAD检测器）1）空白溶液和未破坏空白辅料溶液在主峰及各杂 质保留时间处无明显干扰；2）未破坏及各破坏条件下样品溶液中主峰与相邻 后杂质峰、主要降解杂质峰与相邻杂质峰之间的 分离度均应不小于1.5；3）使用DAD检测器进行峰纯度分析时，主峰和 杂质A、杂
9、质B峰最小纯度值应大于0（LabSolutions 系统）。精 密 度重 复 性分析人员1平行配制6份加标供试品溶 液、1份对照溶液；各进1针。计算6份 加标供试品中杂质A、杂质B的含量及 RSD%、计算总杂的含量及RSD%、最大 未知单杂的含量和极差。报告平均值。分析人员1平行配制的6份加标供试品溶液中， 已知杂质A、杂质B、含量的RSD应三10.0%；最 大未知单杂含量的极差应0.10%；总杂含量的 RSD 应10.0%。定量限杂质A、杂质B和主成分的定量限溶液： 连续进样3针，分别计算主成分、 杂质A、杂质B、峰面积RSD%及信噪 比,主成分、杂质A、杂质B信噪比S/N 均不小于10,作
10、为、定量限溶液。物质A、杂质A和杂质B、色谱峰S/N值均 应不小于10,连续3针峰面积RSD均应10.0%。检测限主成分、杂质A、杂质B、的检测限溶 液。物质A、杂质A、杂质B、色谱峰信噪比S/N均 应不小于3。线性步骤：1）配制含杂质A、杂质B为0.05%、 0.15%、0.3%、0.36%、0.45%、0.6%的线 性溶液各一份；2）配制含杂质为0.05%、0.25%、0.5%、 0.60%、0.75%、1.0%的线性溶液各一份；3）配制含物质 A 为 0.05%、0.1%、0.2%、 0.24%、0.4%、0.8%的线性溶液各一份； 以上线性溶液各进样1针，分别以浓度 为x轴，峰面积为y
11、轴，作线性方程， 计算相关系数和截距。方案线性方程y=ax+b, r；计算杂质A、杂质B、和物质A的线性方程，相 关系数（r）均不得小于0.998；杂质A、杂质B、和物质A线性方程的截距和1.0%线性溶液峰面积的比值应三10.0%。准确度步骤：1）取供试品储备，加杂质对照储备，配 制含0.05%、0.3%和 0.6%浓度水平杂质 A、杂质B，含0.05%、0.5%和1.0%浓度 水平杂质的溶液各三份；以上溶液各进样1针，按外标法计算杂 质A、杂质B、含量，与理论值对比， 回收率应符合要求。0.1%、1%和2%浓度水平杂质A、杂质B、的回 收率及平均回收率均应在90.0%110.0%之间； 9份
12、样品的回收率RSD应不大于10.0%。溶 液 稳 定 性供试 品溶 液稳 定性采用加标供试品溶液，分别置于室温密 封保存，以预定的时间点分别取样分析（如0h、6h、12h、24h，具体可根据实 际情况进行调整），计算不同时间间隔各 杂质的含量，与0小时结果比较。不同时间间隔，与0小时比，加标供试品溶液中 杂质A、杂质B、含量，绝对差值应三0.20%；最 大未知单杂含量绝对差值应三0.10% ；总杂含量绝 对差值应三0.40%。对照 溶液 稳定 性分别置于室温密封保存，以预定的时间 点分别取样分析（如0h、6h、12h、24h、 36h、60h、72h，具体可根据实际情况进 行调整），以峰面积的
13、变化来考察其稳定 性；不同时间间隔，对照溶液的主峰峰面积与0h主峰 峰面积的比值均应在90.0%110.0%之间；系统 适用 性溶 液分别置于室温密封保存，以预定的时间 点分别取样分析（如0h、4h、8h、12h、 24h，具体可根据实际情况进行调整），以 峰面积的变化来考察其稳定性；不同时间间隔，系统适用性溶液的杂质A峰、杂 质B峰的峰面积与0h相应杂质主峰峰面积的比 值均应在90.0%110.0%之间。系统适用性溶液色谱图中，理论板数不低于2000 （按物质A峰计算），各峰分离度应符合要求。3.2 系统适用性3.2.1 溶液配制3.2.1.1 稀释液/空白溶液 见 2.6.2 项下。3.2
14、.1.2 系统适用性溶液 见 2.6.3 项下。3.2.1.3 供试品溶液见 2.6.4 项下。3.2.1.4 对照溶液见 2.6.5 项下。3.2.2 测定方法和接受标准取空白溶液、系统适用性溶液、对照溶液进样分析。空白溶液色谱图中，无干扰；系统适用性溶液色谱图中，理论板数按物质A峰计算 不低于2000；各峰的分离度应符合要求；对照溶液连续进样3针，主峰面积的RSD应 不得过 5.0%；回进对照溶液主峰的峰面积与连续进样 3 针对照溶液的主峰面积平均值 的比值应在90.0%110.0%之间；灵敏度溶液色谱图中，物质A峰信噪比应不小于10。3.2.3 结果试验结果显示，结果见表 1。表 1 系统适用性测定结果名称序号峰面积平均峰面积峰面积RSD回收率RS-Rep1RS-Rep2RS-Rep3RS-B1系统适用性溶液名称保留时间(min)相对保留时间分离度理论塔板数(USP)图1 系统适用性溶液色谱图3.3 专属性3.3.1 溶液的配制空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液、
