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1、1 适用范围本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。2 相关文件GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法微生物指标HJ4392009 水质 样品的保存和管理技术规定HJ/T 91-2002 地表水和污水检测技术规范HJ494-2009 水质 采样技术指导3 方法原理4仪器设备、实验材料、环境条件4.1 仪器设备4.1.1 高压蒸汽灭菌器。4.1.2 干热灭菌箱。4.1.3 培养箱 36 C 1C。4.1.4电炉；4.1.5 天平；4.1.6冰箱；4.1.7 放大镜或菌落计数器。4.1.8pH 计或精密 pH 试纸。4.1.9灭菌试管、平皿（直径9 cm）、刻度吸管、采
2、样瓶等4.2 实验材料4.21 培养基与试剂A 蛋白胨 10gB 牛肉膏 3gC 氯化钠 5gD 琼脂 1020gE 蒸馏水 1000mL制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.47. 6,分装于玻璃容器中（如 用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa （121C, 15 lb）灭菌20 min,储存于 冷暗处备用。5 操作规程检验步骤5. 1 生活饮用水5. 1. 1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1 mL 充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾 注约15 mL己融化并冷却到4sc左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培 养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同
3、时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作 为空白对照。5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36C土 1C培养箱内培养48 h, 进行菌落计数，即为水样 1 mL 中的菌落总数。5. 2 水源水5. 2. 1 以无菌操作方法吸取 1 rnL 充分混匀的水样，注入盛有 9 mL 灭菌生理盐水的 试管中，混匀成 1 : 10 稀释液。5. 2. 2吸取l : 10的稀释液l mL注入盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成l : 100 稀释液。按同法依次稀释成l : l 000,1 : 10 000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须 更换一支l mL灭菌吸管。5.2.3用灭菌吸管取未稀
4、释的水样和2个3个适宜稀释度的水样l mL,分别注入灭 菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。5.3 菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各 平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的 平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的 平皿作为该稀释度的平均菌落数。 若片 状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布 又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌蔼数。然后再求该稀释度的平均菌落数。5.4不同稀释度的选择及报告方法5.4.1 首先选择平均菌落数在 3030
5、0 之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符 合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1 中实例1）。5.4.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30300 之间，则视二者之比值来决定，若其 比值小于 2 应报告两者的平均数（如表 1 中实例2 ）。 若大于 2 则报告其中稀释度较小 的菌落总数（如表 1 中实例3）。 若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表1中实 例的。1.3若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度最高的平均菌之（见表 1 中 实例 5 ）。落数乘以稀释倍数报告. 之（见表 1 中实例 5 ）。5.4.3若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，
6、则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍 数报。告之（见表1 中实例的）5.4.4 若所有稀释度的平均菌落数均不在 30 300 之间，则应以最接近 30 或 300 的平均 菌落数乘以稀释倍数报告之（见表 1 中实例 7 ）。5.4.5 若所有稀释度的平板上均元菌落生长，则以未检出报告之。5.4.6 如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上， 任意数其中 2 个平板 i cm2 中的菌落数，除 2 求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积 63. 6 C 时，再乘其稀释倍数作报告。5.4.7 菌落计数的报告：菌落数在 100 以内时按实有数报告，大于 100
7、 时，采用两位有效 数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用 10 的指数来表示(见表 1 报告方式”栏)。表 1 稀释度选择及菌落总数报告方式实例不同稀两个稀释菌落总数(CFU/mL)报告方式/(CFU/mL)释度的平均菌落数度菌落数之比10-110-210-3164011365164201640016 000 或1.6x10422760295461.63775038 000 或3.8x10432890271602.22710027 000 或2.7x1044150308215001 500 或1. 5x1035多不可计1650513513000510 000 或5. 1 x 105627115270270或2. 7 x 1027多不可计30523050031 000 或3. 1 x 1046 异常情况处理及注意事项7 结果处理见表 1.
