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1、人多巴胺（Dopamine） ELISA试剂（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人Dopamine单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的Dopamine与单抗结合，加入生物素化的抗人Dopamine，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值,Dopamine浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Dopamine浓度。酶标板(Coated Wells )96孔酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate ）12ml10
2、x 标本稀释液(Sample Buffer )12ml20 X浓缩洗涤液(Wash Buffer )50ml标准品(Standards ) : 10ng/ 瓶2瓶底物工作液（TMB Solution ）12ml第一抗体工作液（Biotinylated Antibody12ml终止液(Stop Solution )12ml收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8 C保存48小时；更长时间须 冷冻（-20 C或-70 C）保存，避免反复冻融。血清至少10倍稀释，血浆可以不在稀 释。标准品液配制：使用前加入0.5ml蒸留水混匀，配成20ng/ml的溶液。设标准管8
3、管，第一管加标本稀释2. 液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样 器吸出500ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。10 X标本稀释液用蒸留水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸留水）。洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）3.4.1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37 C 120分钟。2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将
4、反应板充分混匀后置37 C 60分钟。4. 洗板：同前。5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37 C 30分钟。6 洗板：同前。7 每孔加入底物工作液100ul，置37 C暗处反应15分钟。 o 每孔加入100ul终止液混匀。8. 一.30AA用酶标仪在450nm处测吸光值。9.1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。2. 以标准品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在 坐标纸上作 图，画出标准曲线。3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应Dopamine含量，再乘上稀释倍数即可。1.2.3.灵敏度:特异性:重复性:最小的Dopamine检测浓度小于15pg/ml。可同时检测重组或天然的人板内、板见变异系数均小于Dopamine。不与人其它细胞因子有交叉反应。10%。1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确OD值错误地升高。3.度误差及4. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。5. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！
