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1、阿司匹林原料及肠溶片有关物质和含量测定方法比较（中国药典（2005）和中国药典（2010）， 要求结合大家药物分析实验和课本知识及药典内容进行比较，说明各方法的原理及比较方法 的优缺点一、阿司匹林结构及理化性质1. 结构.OCOCHS2理化性质 阿司匹林为固体，具有一定的熔点。在水中微溶或几乎不溶，而能溶于乙 醇、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂中，根据溶解行为的差异可作为供试品溶液 的配制或含量测定时滴定介质选择的依据。（1）酸性：阿司匹林的结构中具有羧基，pKa=3.49水溶液显酸性，并能 与碱发生中和反应。（2）具有酚羟基：阿司匹林结构中都具有潜在的酚羟基，可与铁盐试液 作用显色。可用于鉴别试验
2、。（3）具有酯结构：阿司匹林结构中具有酯结构，在碱性条件下可水解产生酚羟基和羧酸盐。阿司匹林原料药的含量测定1、阿司匹林原料测定（2005版）：直接滴定法（2010 年版阿司匹林原料测定与 2005 版的相同）阿司匹林的含量测定方法：取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中 性） 20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml氢氧 化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O41.直接滴定法 原理：阿司匹林中具羧基，在一定条件下与氢氧化钠反应。测定阿司匹林含量的反应式如下：COOHgOONaJj-OCOCH3+NaOH Q
3、j-OCOCH3+H2O中国药典（2005年版）阿司匹林的含量测定方法为：取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20mL溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠标准滴定溶液（0.lmol/L）滴定。每1mL的氢氧化钠标准滴定溶液（0.1moL/L）相当于18.02mg的阿司匹林（C9H8O4）。滴定度：1ml NaOH 滴定液（0.1mol/L）三 0.1 mmolNaOH三0.1 mmol阿司匹林三0.1xl80.16mg阿司匹林三18.02 mg阿司匹林含量测定结果计算公式为：供试品含量c% ） =100 %WIOOO式中V样品消耗的氢氧化钠滴定溶液的体积，mL；T滴定度
4、，mg/mL；F氢氧化钠滴定溶液的浓度校正因子；W待测药物的称样量，g。原理：阿司匹林结构中有游离羧基，显酸性，pKa36。OCOCH3+H2OCOOHj|-OCOCH3+NaOHCOONa优点：简便、快速。 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）； 酸性杂质干扰（如水杨酸 （因本法缺乏专属性，易受酯键水解产物水杨酸和醋 酸干扰） 注：适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量 测定。1、乙醇的作用：（阿司匹林在水中微溶，但易溶于乙醇.）乙醇溶解阿司匹林；防止阿司匹林在水溶液中滴定过程易水解2、溶剂用中性乙醇的原因：乙醇对酚酞指示剂显酸性，可消耗NaOH而使结果偏 高
5、，故在使用前需用氢氧化钠中和至对酚酞指示剂显中性。（中性乙醇：对指示剂（酚酞） 而言为中性，可消除滴定误差）3、滴定应在不断振荡下稍快进行，以防止局部浓度过大，致使阿司匹林酯水解4、温度在0-40C对测定结果无显著影响。5、指示剂（酚酞）：阿司匹林与氢氧化钠形成强碱弱酸盐，碱性区显色，pH822、水解后剩余滴定法原理：阿司匹林中酯结构，在碱性溶液中易于水解，加入过量标准碱滴 定液，加热使酯水解，剩余碱用酸回滴。OH2NaOH 亠 H2SO4 N日+ 2出0COOH+ 2NaOHOCOCHCOONa4 CH3COONa1mol NaOH三 mol阿司匹林1mol H2SO4三 2 mol NaO
6、H方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴（0.5mol/l） 50.0ml,混合， 缓缓煮沸10min,放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩 余的氢氧化钠。并将滴定结果用空白试验校正。每1ml氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相当于45.04mg的阿司匹林实验组：称量 （过量定量）NaoH滴定 （剩余）NaoH硫酸滴定（消耗体积 V）空白组：（过量定量）NaoH硫酸滴定液滴定（消耗体积V0）NaoH 滴定度(T) =05X180.16 X 1/2=45.04(mg/ml)供试品含量（%）二(Vo-V)xTxF 平均片重(g) d “WIOOOX M 1 UUju（V
7、:样品测定时消耗硫酸滴定液体积（ml） V.空白试验时消耗硫酸滴定液的体积（ml） T:滴定度W：供试品称样量（g）F:硫酸滴定液浓度校正因子F=W定液实际浓度/滴定液规定浓度） 优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰 注：进行空白校正（不加样品或等量溶剂）的原因：消除C02的干扰。（碱液在受热时 易吸收CO2,生成碳酸盐，当用酸回滴时，算滴定液消耗的体积会偏小，使测定结果偏 小，故需空白校正。）阿司匹林有关物质检查 阿司匹林的合成工艺：COONaCOOHCOOHOCOCH3 十 CH3COOH1、阿司匹林中的“有关物质”系指除“游离水杨酸”外的合成原料药苯酚及其他合成副产 物，如醋酸
8、苯酯、水杨酸苯酯、水杨酸水杨酸、水杨酸酐、乙酰水杨酸苯酯、等杂质。cooCOOH(ClhCOhO畅ftOK杨敝COOH乙ffit水畅醸水杨酸ococh36醋酸苯菴OCOCH3ococh3(CHiCOhO乙醸水杨酸IfOH0H0HcoOCOCHs原理一一根据水畅酸苯酯水杨酸苯酯乙 L-lHILi r:T 这些在2005版药典当中，并没有单独列出有关物质的检查方法，只通过检查原料药的澄清度从而 间接的来检查有关物质的限量。溶液的澄清度检查碳酸钠试液中不溶物。不溶物杂质有未完全反应的酚类，或水杨酸精制 时由于温度过高，产生脱羧副反应的苯酚，以及合成工艺过程中由副反应生成的醋酸苯酯 水杨酸苯酯和乙酰水
9、杨酸苯酚等。这些杂质均不溶于碳酸钠试液，而阿司匹林可溶解。利用 溶解行为的差异，由一定量阿司匹林在碳酸钠试液中溶解应澄清来加以控制。C00时间（分钟）流动相 A（%）流动相 B（%）0.010060.02080杂质与阿司匹林的酸性强弱，利用它们在碳酸钠溶液中的溶解度差异，规定一定量样品在碳 酸钠溶液中应澄清。方法一一取本品0.50g，加温热至约45C的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。而2010版药典当中不仅检查了药物的澄明度，还利用了 HPLC进一步的量化了杂质的限量。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20： 5： 5： 70）为流动相
10、A,乙腈为流动相B,按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为276nm。阿司匹林峰的保留时间约为8分钟，理论板数按阿司匹林峰计算不低于5000,阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。测定法取该品约o.lg，精密称定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇 使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液lml,置200ml量瓶 中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液；精密量取对照溶液10m l,置 100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得灵敏度试验溶液。分别精密 量取供试品溶液、对照溶液、灵敏度试验溶液及水杨酸检查项下的水杨酸对照品溶液各1
11、0“， 注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，除小于灵敏度试验溶液中 阿司匹林主峰面积的单个杂质峰、溶剂峰及水杨酸峰不计外，其余各杂质峰面积的和不得大 于对照溶液主峰峰面积（0.5%）。方法一一HPLC梯度洗脱，主成分自身对照法（0.5%） 色谱柱：ODS流动相：A：乙腈-四氢咲喃-冰醋酸冰（20:5:5:70）B：乙腈检测波长： 276nm原料药：供试品溶液： 0.01g/ml 对照溶液： 0.05mg/ml 灵敏度试验溶液： 0.005mg/m23J1020030d20000图&2阿司匹林有关物质HPLC检查色谱图 a；阿可匹林供试品05%自身对照（SOml）： c；
12、0.05%自身对照（灵敏度试验ml）；d：水畅酸对照（I0|ig/mD；亡：空白1：阿司匹林；2：水杨酸：3：乙酰水杨醸水畅酸10000min30000-有关物质 :除水杨酸峰外，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（0.5%）2005年在有关物质检查时未使用HPLC很大可能是因为当时HPLC不够普及，而使用澄明度 发检查是简单快捷且便宜的方法,但该方法只检查了无羧基杂质如苯酚、醋酸苯酯、水杨酸 苯酯，而水杨酸水杨酸、水杨酸酐等含羧酸的杂质并不能检查到，而且由于每个人的眼睛对 澄清的鉴别界限不同，作为定性检查灵敏度也是不够的；而HPLC的使用则增加了选择性和灵敏度，但同时也增加了成本和
13、实验要求。附：高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度 高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。其缺点是： 价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有 毒性的居多。三、总结通过上述分析发现，阿司匹林原料药与其片剂的检验方法是不同的，比如， 鉴别实验中，需要将制剂时引入的辅料等干扰因素除去，然后再按照原料药的检 查方法进行检查。含量测定时，两者采用了不同的方法，原料采用的是直接酸碱 滴定法，片剂采用的是二步酸碱滴定法，原因是在片剂制剂中引入的辅料不允许 采用直接酸碱滴定法，会干扰实验结果。由此可以看出，在进行原料药及其制剂 的分析时，原料测定方法要求选择具有较高的准确度的方法，而制剂的测定方法 要求侧重于具有较高的专属性。
