多糖的超声波提取

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1、1多糖的超声波提取将干燥过的豆粉碎过40目筛,用滤纸包成圆柱形,中加入3倍体积的石油醚,用索氏抽提装置脱脂4h, 干燥后加入3倍体积分数为95 %乙醇浸泡2天,每天换2次乙醇。抽滤,以除去生物碱、低聚糖、挥发油等 小分子物质。自然(冷冻)干燥后备用。称取5.0g预处理过的豆粉,水复溶后按试验设定的条件进行超声波提 取,将提取液离心(3000r/min,15min),沉淀物按照同样的提取条件重复提取2次,合并上清液进行旋转蒸发 浓缩。向浓缩液加入Sevag试剂去蛋白后加入3倍体积的95%乙醇,于4C冷藏柜中静置过夜,离心 (4000r/min,10min)得沉淀,依次用乙醇、丙酮,乙醚反复洗涤3

2、次,真空冷冻干燥,得多糖粗提物。2葡萄糖标准曲线的绘制精确称取经105C干燥至质量恒定的葡萄糖标准样品50.15mg,用蒸馏水溶解并定溶于50mL容量瓶,配制 成质量浓度为1.003mg / mL的葡萄糖标准溶液。依次吸取0、2.0、4.0、6.0、&0、10.0、12.0mL葡萄糖标准 液于100mL容量瓶中并加蒸馏水定容摇匀备用。然后精确移取上述各溶液2mL置于具塞刻度试管中,各加入5% 苯酚溶液1.0mL和浓硫酸5mL,充分混匀,室温静置30min,于波长490nm处测定吸光度。0号管为空白对照, 以葡萄糖质量浓度为纵坐标,吸光度为横坐标绘制标准曲线。3多糖得率计算将粗多糖溶解并稀释至适当质量浓度,移取1.0mL粗多糖样品液按2方法操作,于490nm处测定其吸光度, 重复3次,取平均值。按以下公式计算多糖得率。状兀豆多糖得率/ % = -0x 100m x V式中:C为提取的样品液多糖的质量浓度(mg / mL); V0为样品液的总体积/mL; n为稀释倍数;V为样 品测定液的体积/mL; m为称取的预处理豆粉的质量/g。

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