常用转染方法原理及应用

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1、转染方法原理应用特 点二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐 法带正电的DEAE-葡聚糖(dextran)与带负电 的核酸磷酸骨架相互作用形成复合物,通过 细胞内吞作用进入细胞瞬时转染相对简便,结果可重复,但对细胞有一 定的毒副作用,转染时需去除血清磷酸钙法磷酸钙-DNA复合物吸附于细胞膜,被细胞 内吞稳定转染,瞬时转染操作简便,但重复性差,不适用于原代 细胞及某些培养细胞阳离子脂质体法带正电的脂质体与带负电的核酸磷酸骨架 形成复合物,被细胞内吞稳定转染瞬时转染,适用于所有细胞,转染效率高,重复性 好,但转染时需去除血清,转染效果随 细胞类型变化大非脂质体脂类法内含多种脂质成分,与DNA结合后转运到

2、细 胞内瞬时转染稳定转染适用于所有细胞,包括许多原代培养细 胞;转染效率高,细胞毒性小,转染时可 以不去除血清逆转录病毒介导法通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色 体中稳定转染可用于难转染的细胞,如原代细胞、体 内细胞等。但携带基因不能太大,操作 复杂,耗时,需考虑安全因素。腺病毒介导法通过感染宿主细胞将外源基因整合到染色 体中瞬时转染特定宿主细胞可用于难转染的细胞,需考虑安全因素电穿孔法高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA通过膜上 形成的小孔导入稳定转染,瞬时转染,适用于所有细胞,但细胞致死率高,DNA和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化实验条件基因枪法将DNA用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的 颗粒用弹道装置射入细胞,DNA在胞内逐步 释放、表达瞬时转染可用于人的表皮细胞、成纤维细胞、淋 巴细胞系及原代细胞显微注射法通过显微操作将DNA直接注入靶细胞核稳定转染,瞬时转染转染细胞数有限,多用于基因工程改造 或转基因动物的胚胎细胞

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