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1、植物RNA提取步骤（附图）实验步骤1. 在 eppendorf 管中加入 700ul 提取液（配方见后面）和 10 ul 巯基乙醇（在有褐 化现象的时候再加就行，否则推荐不加），65 度预热（可选）。2. 研钵液氮预冷，取适量材料加入过量液氮，迅速研磨成均匀的粉末（有滑腻感）， 加入到预热的eppendorf管中水浴6min （可选）.取出后加入氯仿、酚各350u,振荡20min。3. 4C 13000rpm离心15min,同时在另外的eppendorf管加入氯仿、酚各350ul。4. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡 10 min。5. 4C 13000rpm离心8min。同时在另外的ep
2、pendorf管加入氯仿700ul。6. 吸取上清，加入到上述离心管中，振荡10m in。7. 4C 13000rpm离心8min同时在另外的eppendorf管加入350ul的75%乙醸 350ul 的 8MLiCl。8. 吸取上清，加入到上述离心管中，一20C沉淀30min, 13000rpm离心20min。9. 弃上清， 75%乙醇清洗两次。溶于30ul的水（DEPC水），直接进行测定浓度和电泳CTAB结果如下（左侧四个）： 0.155ug/ul260/280=2.11260/230=2.20 SDS 结 果 如 下 （ 右 侧 四个） 0.102ug/ul 260/280=1.78 2
3、60/230=2.05电泳结果如下：加入DNase和buffer（promega）,37度消化30min,氯仿抽提两次，用1/10体积NaAc 和二倍体积无水乙醇沉淀15min, 13000rpm离心10min.75%酒精洗两次，溶于30ul的水 （DEPC 水）中.提取液配方：CTAB提取液：CTAB 2% m/v，四硼酸钠-硼酸缓冲体系0.0025mol/l (PH=8.0) NaCl 1.4mol/lSDS提取液：SDS 2% m/v，四硼酸钠-硼酸缓冲体系 0.0025mol/l ( PH=8.0) NaCl 1.4mol/lCTAB和SDS都不必说了，这里用四硼酸钠-硼酸缓冲体系的原因是Tris和DEPC起 反应。NaCI的作用是提高盐浓度防止RNA降解。如降解严重可选加EDTA二钠或减少水浴时间。如提取杂质过多可选加PVP。例如松树。适用范围：各种常见树类如杨树等，草本类皆可。以上的图片左侧四个泳道都为CTAB，右侧四个泳道为SDS。提取杂志残留量：CTAB水浴vCTAB未水浴vSDS水浴vSDS未水浴而易降解程度正好相反，所以请酌情使用。
