琼脂糖核酸电泳的步骤

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1、琼脂糖核酸电泳的步骤1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;2. 根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般2030 ml);3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染料,轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液,倒入电泳槽中,待其凝固;4. 室温下3045分钟后凝胶完全凝结,小心拔出梳子,将凝胶安放在电泳槽内;5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶面1 mm为宜,如样品孔内有气泡,应设法除去;6. 在DNA样品中加入10X体积的载样缓冲液(loading bu

2、ffer),混匀后,用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内;7. 接通电源,红色为正极,黑色为负极,切记DNA样品由负极往正极泳动(靠近加样孔的一端为负)。一般60100V电压,电泳2040min即可;8. 根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳;9. 电泳完毕,关上电源,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖凝胶浓度线形DNA的最佳分辨范围(bp)0.5%1,00030,0000.7%80012,0001.0%50010,0001.2%4007,0001.5%2003,0002.0%502,000

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